优化ApoB抗原免疫剂量提高抗体产生的效果

以湖羊为研究对象,设计了3种不同的ApoB抗原免疫剂量,从抗体产生规律、抗体效价和ApoB产品性能三个方面进行了统计和分析。结果表明：组2(抗原剂量每次0.4 mg)的抗体效价显著高于组1(抗原剂量每次0.2 mg)和组3(抗原剂量每次1 mg),组2五免后的抗体效价能够达到1:29,而且ApoB的产品性能检测各个指标均合格。表明ApoB抗原每次免疫注射剂量为0.4 mg时,所生产的ApoB抗体效果最佳,为ApoB抗体广泛应用于医疗领域奠定基础。     

兔抗双酚A多克隆抗体的制备

[目的]通过动物免疫制备抗双酚A多克隆抗体。[方法]采用双酚A半抗原（BPAH）和双酚酸（DPA）分别与牛血清蛋白（BSA）偶联制备免疫抗原,免疫新西兰白兔获得抗血清;采用间接竞争ELISA法测定抗血清的效价。[结果]经紫外扫描及红外光谱分析,完全抗原BPAH-BSA及DPA-BSA制备成功;供试3只阳性大白兔的抗血清效价分别为〉51200、25600和12800,完全抗原BPAH-BSA免疫的大白兔抗血清效价高于DPA-BSA免疫的大白兔抗血清效价。[结论]该研究成功制备了高效价抗双酚A多克隆抗体。     

hAPOB的克隆、原核表达及抗体效价分析

【目的】人载脂蛋白B(hAPOB)是保持人体血脂恒定的重要蛋白,检测hAPOB具有重要的临床价值。【方法】本研究将hAPOB(97-526AA)序列连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1-hAPOB(97-526AA)原核表达质粒,然后将其转入宿主菌BL21,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的80 kDa的融合蛋白;将纯化后的融合蛋白免疫湖羊,制备抗hAPOB血清并检测抗体效价。【结果】每次注射0.4 mg的原核表达抗原,湖羊抗血清的产生效果最佳;经间接酶联免疫分析(ID-ELISA)方法检测,原核表达蛋白免疫湖羊得到的hAPOB抗体效价为l︰40000。【结论】本试验获的抗血清能够满足商用标准,为后续拓展其应用奠定了基础。     

牛乳铁蛋白抗体的制备及其特性测定

利用BLF抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备了6株抗BLF的单克隆抗体细胞株,并用此抗原免疫新西兰大白兔获得了55 m L的兔多抗血清。针对腹水单抗及多抗血清进行了一系列特性分析,结果显示,5株抗体效价基本上在1∶10~6以上;间接ELISA测定6株抗体与酪蛋白、乳白蛋白和β-乳球蛋白基本无交叉反应,抗体特异性良好;抗体为IgG1亚类,2B12抗体亲和力优于其他抗体。多抗血清效价可达到1∶10~7以上,抗体也具有一定的特异性。     

双峰驼血清IgG纯化及其抗血清制备

纯化双峰驼血清IgG并制备兔抗骆驼IgG抗血清,为制备针对特定蛋白的特异性纳米抗体储备材料,利用Protein G纯化双峰驼血清IgG,并用纯化的IgG免疫成年家兔后采用ELISA方法检测抗血清效价;采用间接ELISA方法,利用制备的抗血清检测PCV2 Cap蛋白免疫双峰驼血清中抗Cap蛋白的抗体水平,Western blot技术检测制备的抗血清与从噬菌体纳米抗体库中筛选到的针对不同蛋白的纳米抗体的反应性,以确定抗血清的适用性。结果显示,从双峰驼血清中纯化到骆驼IgG,SDS-PAGE分析显示纯化的骆驼IgG包括3条链,约50ku的传统重链IgG1,约43ku缺失CH1的重链IgG3和约30ku的传统轻链;3次免疫后兔抗骆驼IgG抗血清效价达1∶512 000;应用制备的抗血清检测PCV2 Cap蛋白免疫5次的双峰驼血清中抗Cap蛋白的抗体效价达1∶1 024 000;制备的抗血清可以与原核表达的针对不同病毒蛋白的纳米抗体反应;说明制备的兔抗骆驼IgG抗血清可用于免疫骆驼血清和表达的纳米抗体的检测。研究结果为目标蛋白免疫骆驼后抗体效价检测及纳米抗体文库构建提供关键材料。     

免疫方式对Iss抗体产生的影响

为获得抗大肠杆菌Iss蛋白的抗体,将纯化的GST-Iss蛋白分别免疫雏鸡及小鼠。结果显示,无免疫佐剂、弗氏佐剂免疫雏鸡所产生的Iss抗血清效价仅为1∶100,氢氧化铝佐剂免疫小鼠所产生的Iss抗血清效价为1∶60 000。Iss融合蛋白采用氢氧化铝佐剂免疫小鼠,可获得更强的体液免疫应答,抗体效价更高。     

环丙沙星多克隆抗体的制备

用合成的CPLX-BSA偶联物免疫兔子,制备CPLX多克隆抗体。用ELISA方法检测抗血清效价。结果表明,2只兔子中1只产生了高效价的抗血清,另1只产生的效价较低。说明用合成的CPLX-BSA偶联物免疫兔子可获得高效价的环丙沙星抗血清。     

达氟沙星抗体的制备

为了制备达氟沙星(DFLX)多克隆抗体,使用合成的DFLX-BSA偶联物免疫獭兔,用ELISA方法检测抗血清效价.结果显示,2只动物中1只产生了高效价的抗血清,另1只产生的效价较低.得出结论,用合成的DFLX-BSA偶联物免疫兔子获得了高效价的抗血清.     

羊抗人载脂蛋白A1多克隆抗体的制备及免疫佐剂优化

载脂蛋白A1(ApoA1)是预测冠心病(ASCVD)最有价值的指标之一.从人血浆中通过PEG沉淀法提取ApoA1,经过纯化和验证后,选择不同佐剂进行乳化,以不同免疫程序接种成年湖羊,制备羊抗人载脂蛋白A1多克隆抗体.通过琼脂扩散试验定期检测免疫后羊血清中抗人ApoA1多克隆抗体的效价,比较不同佐剂的免疫效果.结果显示,CV13佐剂与弗氏完全佐剂结合免疫后,抗体效价达到或超越弗氏佐剂组,明显优于ISA206佐剂.本研究结果可为国内医药企业自主制备高质量羊抗人ApoA1多克隆抗体用于ApoA1检测试剂盒提供技术参考.     

抗莱克多巴胺多克隆抗体的制备

为了制备抗莱克多巴胺多克隆抗体,试验通过连接剂butane-1,4-diol diglyciydyl ether把莱克多巴胺和载体蛋白BSA和OVA偶联成免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔,饱和硫铵沉淀方法纯化抗体,间接ELISA法检测抗血清效价。结果通过免疫兔获得了抗莱克多巴胺的多克隆抗体。经ELISA测定,其效价为1∶12800。