河南省规模化鸡场隐孢子虫感染情况调查

隐孢子虫（Cryptosporidium）是一种引起人兽共患病的机会性原虫,能感染包括人在内的240多种动物,引起动物机体不同程度的消化道和呼吸道症状。目前已鉴定出16个有效种,40多个基因型。感染禽类的隐孢子虫主要有3个种：贝氏隐孢子虫（C.baileyi）、火鸡隐孢子虫（C．meleagridis）和鸡隐孢子虫（C．galli）。其中C．baileyi为感染鸡的优势虫种,主要寄生在鸡的喉头、气管、法氏囊、泄殖腔等部位;C．meleagridis主要寄生于小肠,属于人兽共患病原;     

不同禽源贝氏隐孢子虫分离株对鹌鹑致病性的比较研究

本研究旨在观察不同禽源贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)对鹌鹑的致病性差异。采用光镜、扫描电镜等技术研究了鸡源、鸭源、鹌鹑源、白文鸟源、鸵鸟源贝氏隐孢子虫分离株对10日龄鹌鹑的致病性。结果表明,感染鹌鹑均出现腹泻和呼吸道症状,排卵囊持续期11~18 d,虫体寄生于喉头、气管、法氏囊和泄殖腔。其中鸭源C.baileyi感染组鹌鹑发病率和死亡率分别为82.5%、25%,鸡源C.baileyi(郑州株)感染组发病率和死亡率分别为77.5%、12.5%,鹌鹑源C.baileyi感染组发病率、死亡率分别为37.5%和17.5%。本研究结果提示,不同禽源C.baileyi对鹌鹑有一定致病性,其致病性强弱存在差异。     

禽隐孢子虫病及其公共安全

禽隐孢子虫病是由火鸡隐孢子虫和贝氏隐孢子虫所引起的一种原虫病,主要的宿主为火鸡、鸡、孔雀等,是引起火鸡、鸡、鹌鹑因患呼吸系统和肠道疾病而死亡的重要病原.从目前研究报道来看,火鸡隐孢子虫和贝氏隐孢子虫均可引起人畜共患,因此其更被关注.基于上述情况,对感染禽隐孢子虫的种类、临床症状和诊治等作一概述.     

应用巢式PCR检测隐孢子虫

应用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)建立了一种检测隐孢子虫(Cryptosporidium)的方法。试验中隐孢子虫卵囊纯化采用庶糖密度梯度离心法,以液氮-热水浴反复冻融及酚-氯仿抽提冷乙醇沉淀法制备模板DNA,根据隐孢子虫18S rRNA序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法。该方法特异性强,可检出牛源微小隐孢子虫(C.parvum)、羊源微小隐孢子虫(C.parvum)、牛源安氏隐孢子虫(C.andersoni)、鸡源贝氏隐孢子虫(C.baileyi)及猪源隐孢子虫(C.suis);敏感性高,该方法最低核酸DNA检测量达到10fg。初步应用结果表明,所建立的Nested PCR方法适合于隐孢子虫病的诊断和分子流行病学调查。     

不同禽源贝氏隐孢子虫分离株对雏鸡致病性比较研究

为研究不同禽源贝氏隐孢子虫对雏鸡的致病性差异,人工感染3日龄雏鸡鸡源、鸭源、鹌鹑源、白文鸟源贝氏隐孢子虫.结果发现,各感染组雏鸡潜隐期均为4d,显露期为11～18 d,均未发生死亡,但其增重均受影响.鸡源C.baileyi(林州株)、C.baileyi(郑州株)和鸭源C.bailey(郑州株)感染组雏鸡临床症状较为明显,发病率较高,分别为71.4％、85.7％和77.1％,剖检可见气管有较多粘液分泌物,法氏囊粘膜充血肿胀,平均增重较不感染对照组分别减少34.5、53.1和19.7 g；鹌鹑源C.bailey(武陟株)和白文鸟源C.bailey(郑州株)感染组雏鸡仅部分表现轻微临床症状,发病率分别为31.4％和28.6％,平均增重较不感染对照组分别减少39.7和43.1g.结果表明不同禽源C.bailey对雏鸡均有不同程度的致病性,以鸡源和鸭源C.baileyi致病性较强.     

隐孢子虫（Cryptosporidium）病毒的鉴定及其特性

根据已发表的隐孢子虫病毒的序列,设计合成2对引物,对小球隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、鼠隐孢子虫(C.muris)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)进行RT-PCR扩增,结果发现仅小球隐孢子虫(C.parvum)含有大小约为1.7×103nt和1.3×103nt2个片段的dsRNA病毒.将其PCR产物连接到pMD18-T载体上进行克隆测序,经与GenBank比较,含这2个片段的dsRNA病毒与已发表的该虫病毒的同源性分别为96%和98%.电泳鉴定发现,该病毒对低浓度RNA酶不敏感,且不能被DNA酶降解.依赖RNA的RNA聚合酶活性测定结果表明,该病毒具有该聚合酶的活性.电镜观察未发现存在病毒样粒子.     

隐孢子虫病免疫学研究进展

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是一种全球性的人畜共患病。其病原体为一种寄生性原虫，即隐孢子虫。隐孢子虫属于真球虫目、隐孢科、隐孢属，目前认为其有效种有6个，即感染鱼类的鼻隐抱子虫（C．nasorum）、感染爬行类的响尾蛇隐池子虫（C．crotati）、感染鸟类的火鸡隐抱子虫（C．meleagridis）和贝氏隐抱子虫（C．baileyi）、感染哺乳动物的鼠隐抱子虫（C．muris）和小隐子虫（C．parvum）。现已发现隐抱子虫可寄生于多种脊椎动物，下面就其引起的局部病理变化、免疫器官的反应、免疫反应和免疫诊断等方面述之。1寄生部位与所引起…     

一例禽隐孢子虫病的诊治

正禽隐孢子虫病是由隐孢子虫科隐孢子虫属的贝氏隐孢子虫、火鸡隐孢子虫寄生于家禽的呼吸系统、消化道、法氏囊和泄殖腔内所引起的一种原虫病。隐孢子虫病呈全球性分布,能使鸡、鸭、鹅等多种家禽致病,是仪次于球虫病的高发性原虫病。近年来,由于禽场的饲养管理水平不断提高,典型的禽隐孢子虫病病例在规模化禽场已很少     

PCR-RFLP鉴定隐孢子虫种类研究

为快速、准确鉴别人畜隐孢子虫种类，建立了巢式PCR扩增隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域，扩增片段测序结果表明：安徽牛源分离株(Cryptosporidium muris)781bp；北京鸡源分离株(C.baileyi)776bp；北京牛源分离株(C.muris)781bp；河南牛源分离株(C.muris)725bp；长春牛源分离株(C.muris)776bp；宁夏鸡源分离株(C.baileyi)725bp.该片段位于18SrRNA全序列271～1103bp之间。使用Ssp I限制性内切酶消化发现C.muris产生418～420bp和305～363bp两个片段，C.baileyi产生544～545bp和185～231bp两个片段。所检测的6个分离株可以显著区分为C.muris和C.baileyi两个种，所建立的PCR-RFLP可以有效鉴别隐孢子虫种类。     

河南地区鸭隐孢子虫病流行病学调查

隐孢子虫病是重要的人兽共患原虫病,广泛分布于世界各地.隐孢子虫(Crptosporidium)宿主种类广泛,可以寄生于240多种动物,隐孢子虫有效种目前已达到16个,另有40多个基因型.其中已确定的禽类有效种有3个,即贝氏隐孢子虫(C.baileyi)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)和鸡隐孢子虫(C.galli),还可能存在新的有效种和基因型,至少存在有2个未命名种(分别寄生于鹌鹑和鸵鸟[1])和3个新基因型(从黑鸭分离到的鸭基因型和加拿大鹅分离到的两个鹅基因型)[2].……     

隐孢子虫病免疫学研究进展

隐孢子虫病（Cryptosxporidiosis）是一种全球性的人畜共患病。现已发现隐抱子虫可寄生于多种脊椎动物，其中包括哺乳动物、乌类、爬行类和鱼类。隐强子虫属于真球虫目、隐抱科、隐抱属，目前认为其有效种有6个，即感染鱼类的鼻隐抱子虫（C．nasorum）、感染爬行类的响尾蛇隐抱子虫（C．crotatN、感染鸟类的火鸡隐抱子虫（C。meleagrZdZs）和贝氏隐梅子虫（C．baileyi）、感染哺乳动物的鼠隐抱子虫（C。。urZs）和小隐掴寸一虫（C．parvu。）。下面就其引起的局部病理变化、兔疫器官的反应。免疫反应和免疫诊断等方面综述之。】．寄生…     

禽隐孢子虫病研究概况

禽隐孢子虫病是由火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis)和贝氏隐孢子虫(C、baileyi)引起的以消化道和呼吸道症状为主的禽类寄生原虫病。自1929年Tyzzer首次报道在鸡的盲肠上皮细胞上发现隐孢子虫以未,有关学者对禽隐孢子虫病的病原学、流行病学、临床病理学、诊断学等方面做了大量研究,取得了一定的成就。本文就禽隐孢子虫病的研究概况,作一综述。     

种鸡感染隐孢子虫的鉴定

本文对广东某种鸡场3万余只中40%排白色、浅黄色稀粪的种鸡，作病因检查时，发现隐孢子虫卵囊，并根据测定数据，形态及寄生部位作鉴定，作者认为此次检出的卵囊介于贝氏隐孢子虫与火鸡隐孢子虫之间，究意属何种隐孢子虫还有待探讨。     

固始鸡源隐孢子虫人工感染试验

为了解来源于地方鸡品种的隐孢子虫分离株致病特点,对收集到的河南固始鸡源隐孢子虫经鹌鹑传代纯化后,进行动物感染。结果:固始鸡源隐孢子虫分离株无论在正常还是免疫抑制情况下均不能感染小鼠,但能成功感染海兰雏鸡,出现明显的呼吸道症状及法氏囊病变。剖检发现虫体主要寄生在法氏囊、气管和泄殖腔等部位。根据卵囊形态学及寄生部位等特点,本试验分离的隐孢子虫种类鉴定为贝氏隐孢子虫(Crypto-sporidium baileyi)。增大感染剂量,可使雏鸡排卵囊高峰期提前,排卵囊量增大,持续期延长;免疫抑制剂的使用也可使高峰期提前,持续期延长,但会造成试验动物死亡率增高。雏鸡临床症状、剖检病变和增重减少均与感染剂量呈正相关,免疫抑制剂的使用会加重此影响。     

河南省鸵鸟隐孢子虫流行病学调查

为了系统掌握河南地区鸵鸟隐孢子虫流行状况,于2006年8月～2007年8月对河南地区6个养殖场共829份样品应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行感染情况调查,结果显示隐孢子虫总感染率为1.7%(14/829),其中,郑州某驼鸟场的感染率2.8%(14/506),其他养殖场未发现隐孢子虫感染.所查到的14份隐孢子虫阳性样品来自20～40日龄鸵鸟,表明幼龄鸵鸟更容易感染隐孢子虫.鸵鸟隐孢子虫卵囊大小为4.2～6.0 μm×4.5～5.0 μm,平均5.56 μm×4.48 μm,卵囊形状指数(L/W )为1.24(n=100),根据卵囊形态结构特征初步鉴定为贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi).     

Real-timeqPCR检测鸡胚中贝氏隐孢子虫方法研究

为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBRGreen实时荧光定量PCR（Real—timeqPCR）方法,同时对贝氏隐孢子虫在鸡胚中培养7d后尿囊膜和尿囊液样品中虫体DNA进行检测。结果表明,建立的SYBRGreenreal—timeqPCR方法可特异性检测到贝氏隐孢子虫,建立的标准曲线线性关系良好（R2=0．998）,卵囊基因组DNA检测阈值为10个卵囊,重复检测结果显示试验重现性较好。该方法成功检测到尿囊膜和尿囊液中虫体DNA。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐孢子虫real—timeqPCR方法,可用于对贝氏隐孢子虫在鸡胚中繁殖规律分析和抗隐孢子虫药物筛选等研究。     

家禽隐孢子虫病的预防及控制

禽隐孢子虫病是一种原虫病。到目前为止 ,已发现和命名的隐孢子虫有 1 9种。而禽类已知的隐孢子虫主要有 3种 ;即贝氏隐孢子虫、火鸡隐孢子虫和未定名的鹌鹑隐孢子虫。近年来 ,我国不少地区相继报道了家禽的隐孢子虫病 ,对养禽业构成一定的危害。1　病原及生活史卵囊呈圆形或卵圆形 ,无色 ,表面光滑 ,无卵膜孔、孢子囊和极粒 ,卵囊内含一团颗粒状残体和 4个长形弯曲的裸露子孢子。子孢子纵向排列在残体一侧 ,无折光体 ,其核偏于后部。火鸡隐孢子虫卵囊大小为 4.5～ 6.0× 4.2～ 5 .3μm,平均 5 .2× 4.6μm;卵囊指数为 1 .0～ 1 .33,平均 1 …     

贝氏隐孢子虫对樱桃谷鸭的致病性试验

隐孢子虫病是一种全球性的人畜共患原虫病；禽类隐孢子虫发现于鸡、火鸡、鹌鹑、鹅、孔雀等，有关鸭隐孢子虫病的报道较少，特别是不同剂量感染的致病性差异未见报道，本试验采用鸭源贝氏隐孢子虫卵囊，雏鸡传代后，经口感染2日龄樱桃谷鸭，通过临床症状观察和病理变化观察，旨在探讨河南省鸭源贝氏隐孢子虫的致病性及不同剂量的卵囊接种后所引起的临床症状和病理变化的差异。     

基于18S rRNA和HSP70基因序列的隐孢子虫种系发育分析

为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征,以阐明隐孢子虫病的分子流行病学特点。通过18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列分析,其结果：河南人源隐孢子虫分离株为Cryptosporidium parvum鼠基因型;河南鹿源隐孢子虫分离株为C. parvum鹿基因型;河南猪源隐孢子虫的2个分离株均为C. parvum猪基因I型,即C. suis;河南鹌鹑源的隐孢子虫2个分离株分别为C. baileyi和C. meleagridis;河南乌鸡源隐孢子虫和鸵鸟源隐孢子虫分离株均为C. baileyi;河南牛源隐孢子虫分离株为C.andersoni。     

四种隐孢子虫半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因的克隆和序列分析

为克隆不同种隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)的半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因,分析其核苷酸与编码氨基酸序列的变异情况,根据GenBank上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)Cryptopain-1基因序列设计合成引物,用PCR技术从不同种隐孢子虫基因组DNA中扩增Cryptopain-1基因,并将其克隆至pZeroBack/blunt载体,阳性克隆经PCR鉴定正确后测序,与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因进行序列同源性比对,并进行系统进化分析。结果显示,本研究成功从泰泽隐孢子虫(C.tyzzeri)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、兔隐孢子虫(C.cuniculus)基因组DNA中扩增出Cryptopain-1基因。与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因比较,泰泽隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、兔隐孢子虫Cryptopain-1基因核苷酸序列相似性分别为98.67%、94.53%、98.34%,演绎的氨基酸序列相似性分别为99.00%、96.51%、99.00%。研究结果为利用Cryptopain-1基因进行隐孢子虫的代谢、致病机理等研究奠定了基础。