猪前脂肪细胞原代培养方法的建立

目的:摸索猪前脂肪细胞的原代培养方法,为研究猪脂肪发生的分子机制奠定基础.方法:取皮下脂肪,酶消化法分离细胞,用转铁蛋白、氢化可的松、胰岛素诱导分化,油红O染色鉴定.结果:在培养期间,细胞逐渐由梭形变为圆形,并逐渐增大,油红O染色为红色.结论:分离的细胞为未分化的前脂肪细胞,可用此方法培养的细胞进行脂肪发育过程中具体分...     

猪脂肪细胞发育研究进展

概述了脂肪细胞的类型，脂肪组织发育的一般规律，脂肪细胞的增殖、分化、肥大过程。为更好地了解脂肪组织的发育，改变中国地方猪种生长速度缓慢、沉积脂肪过多等生产劣势寻找新的途径。     

猪脂肪细胞膜免疫调控的研究

本文综述了脂肪细胞膜免疫技术的研究概况。免疫机制。影响因素、及特异膜蛋白的研究等。对于进一步深入研究猪脂肪细胞膜蛋白的组成和功能。揭示脂肪细胞膜蛋白与脂肪细胞代谢和功能之间的关系．阐明脂肪细胞分化和脂肪沉积的分子和细胞机制,寻找减少猪脂肪过度沉积提供了科学依据,开辟了降低猪脂肪。提高瘦肉率研究的新领域。     

IGF-Ⅰ对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响

前体脂肪细胞是定向的干细胞系,其增殖与分化受诸多因素影响,调控前体脂肪细胞增殖分化意味着可能成功控制脂肪发育。本文采用原代培养的大鼠前体脂肪细胞,通过胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)处理,用细胞计数、生长曲线绘制、细胞倍增时间测定以及MTT比色的方法研究IGF-Ⅰ对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响,探索控制脂肪发育的可能途径。结果表明:IGF-Ⅰ可以显著促进大鼠前体脂肪细胞增殖,缩短倍增时间。IGF-Ⅰ浓度80ng/mL为适宜浓度,倍增时间由67.49h下降到44.24h。     

维生素D受体在体外培养SD大鼠脂肪细胞中的表达

为了探索维生素D受体(VDR)在SD大鼠脂肪细胞分化过程中的表达规律,采用Ⅱ型胶原酶消化法进行SD大鼠脂肪细胞的分离培养,并将其诱导分化为成熟的脂肪细胞,分别在细胞生长至单层汇合后的第0、4、8、12、16天收集细胞样品。对VDR和脂滴进行荧光染色,同时采用Western blot对脂肪细胞分化过程中的VDR蛋白表达量进行分析,采用real-time PCR定量分析脂肪细胞分化过程中的VDR表达量。结果显示,随SD大鼠脂肪细胞的分化,细胞中脂滴逐渐增加,VDR mRNA和蛋白的表达量与脂质积累过程呈负相关性,表明VDR的表达在脂肪细胞分化过程中有一定的变化规律,其可能以负反馈的调节机制参与了脂肪细胞的分化过程。     

脂肪细胞的分化形成与天然产物调控

研究脂肪生成的机理及其调控过程对于防治动物肥胖引起的相关疾病、改善肉品风味和质量以及畜牧生产效率具有重要意义。脂肪细胞起源于多能性骨髓间充质干细胞（MSCs）,接受细胞外刺激因子后迅速引起早期脂肪调节因子、C/EBPβ和C/EBPδ的表达,并传递信息至PPARγ和C/EBPα等转录因子,促进细胞的分化和脂滴形成。在此过程中,众多转录因子和细胞周期蛋白参与前体脂肪细胞到脂肪细胞的分化与成脂过程。植物来源的多种天然产物,如多酚类、生物碱、萜类、醌类化合物在脂肪细胞分化和抑制脂肪生成过程中发挥重要的调控作用,对这些天然化合物的深入和成药研究有望成为具有抑制细胞内脂滴聚集的潜在药物。     

莱芜猪前体脂肪细胞的原代培养及诱导分化研究

为了建立莱芜猪前体脂肪细胞的体外培养体系,探索猪脂肪组织增生的生物学特征。本研究采集1日龄莱芜猪仔猪颈、背部皮下脂肪组织,采用胶原酶与胰蛋白酶相结合的方法,分离原代前体脂肪细胞,进行前体脂肪细胞的原代和传代培养,以及前体脂肪细胞诱导分化的研究,并采用Real-time PCR方法检测前体脂肪细胞分化过程中关键基因PPARγ的表达。结果表明,分离的猪原代前体脂肪细胞约8h后开始贴壁,贴壁的细胞呈短梭形或不规则的三角形,第3天多数细胞进入指数生长期,呈成纤维细胞样形态,细胞生长曲线近似S形;诱导培养结果显示,少量细胞在第2天开始出现脂滴,大多数细胞在第3天出现脂滴,第7～8天小脂滴逐渐融合成大脂滴,在第12天左右融合成大脂滴,油红O染色呈橘红色。在前体脂肪细胞分化过程中PPARγ基因mRNA的表达量逐渐增加,在诱导后的48h表达量最高,随后其表达丰度逐渐下降。本试验成功建立了莱芜猪前体脂肪细胞培养体系和体外诱导分化模型,为进一步研究莱芜猪前体脂肪细胞增殖与分化机制和猪体脂肪的沉积奠定基础。     

雌激素受体在泌乳中期和静止期牦牛乳腺组织内的分布与表达

旨在揭示牦牛泌乳中期和静止期乳腺组织雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)的分布及蛋白水平的表达。采集泌乳中期(分娩后3～4个月)和静止期(断乳后1个月)各5头健康牦牛的乳腺组织,应用SP免疫组织化学染色方法和Image pro plus 6.0图像分析软件检测ERα和ERβ在牦牛泌乳中期和静止期的分布情况,并采用Western blot技术对乳腺组织内的ERα和ERβ蛋白含量进行半定量测定。结果表明:泌乳中期牦牛乳腺组织内ERα大多分布于腺泡上皮细胞的细胞质、少部分分布于小叶间结缔组织内脂肪细胞的细胞核、偶见于血管内皮细胞的细胞核;静止期牦牛乳腺组织内ERα大量分布于结缔组织中脂肪细胞及血管内皮细胞的细胞核中,少数分布于腺泡上皮细胞的细胞质中;泌乳中期ERβ大多分布于乳腺腺泡上皮细胞的细胞质,偶见于血管内皮细胞及脂肪细胞的细胞核中,但着色较腺泡上皮细胞的细胞质浅。静止期ERβ广泛分布于乳腺导管上皮细胞的细胞质、小叶间结缔组织内间质细胞的细胞核及血管内皮细胞的细胞核中,腺泡上皮细胞的细胞质内也有表达,但较泌乳中期阳性细胞数少。牦牛乳腺组织内ERα蛋白的相对表达量静止期显著高于泌乳中期(P<0.05);静止期与泌乳中期乳腺组织内ERβ蛋白的相对表达量无显著差异(P>0.05)。雌激素受体不同亚型在不同发育期牦牛乳腺组织内的表达存在差异,提示,雌激素受体不同亚型在牦牛乳腺发育及泌乳生物学中可能执行不同的功能。     

不同经济类型猪种脂肪细胞的发育及其脂肪合成能力的比较研究

通过脂肪组织固定技术，将脂肪组织分离为体积不同的脂肪细胞，发现不同经济类型的猪种在不同年龄阶段其脂肪细胞的生长发育过程存在明显差异。肥胖型香猪的脂肪沉积在５￣８月期间是由脂肪细胞的肥大作用引起的；瘦肉型长白猪的脂肪细胞明显小于香猪，单位组织重的脂肪细胞数极显著地高于香猪。同时研究表明，体积不同的脂肪细胞合成脂肪的能力差异极显著，表现为细胞体积越大其合成脂肪的能力越强，不受品种和年龄的影响。     

湖羊乳腺上皮细胞的分离培养与鉴定

乳腺上皮细胞是哺乳动物特有的具有分泌功能的细胞,也是研究乳腺发育的细胞基础,是研究乳腺发育和功能不可缺少的理想实验材料.试验通过组织块贴壁培养法获得的羊乳腺上皮细胞,采用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,可以确定所获得的细胞为湖羊乳腺上皮细胞.     

动物乳腺干细胞研究进展

乳腺是一个高度活跃的器官,在青春期和生殖周期中,其上皮细胞发生了极大的变化。这些变化是由专门的干细胞和祖细胞推动的。研究乳腺干细胞对动物乳腺发育、哺乳和乳腺癌等方面都有着重大意义。如今,在乳腺干细胞生物学研究方面已经取得了显著进步。乳腺干细胞是组织学上未分化的上皮细胞,可以对称分裂产生两个相同的干细胞,或不对称地产生一个干细胞和一个腔上皮祖细胞或基底/肌上皮祖细胞。通过标记滞留细胞、染料排斥法、干细胞抗原-1标记、细胞表面标记物标记以及谱系示踪等方法可以鉴定出多种不同类型的乳腺干/祖细胞,应用多种不同方法分离鉴定乳腺干细胞有助于深入了解其异质性。乳腺的研究主要分为6个阶段：胚胎期、青春期、性成熟期、妊娠期、泌乳期和退化期。在乳腺不同发育阶段,乳腺干/祖细胞的类型及特性不同。有研究表明,在胚胎期就有基底和管腔谱系的祖细胞产生,静止的乳腺干细胞也可能来自于胚胎期,出生后,静止干细胞可以在卵巢激素的刺激作用下重新进入细胞周期,产生乳腺细胞谱系和自我更新。作者介绍了乳腺干细胞和祖细胞的存在、形态特征、鉴定方法,简述了乳腺干细胞在胚胎期、青春期和妊娠期的特征,分析了目前该领域研究的不足之处以及对未来应用的展望。     

泌乳周期中外源物质对大鼠乳腺内肥大细胞数量的影响及乳腺组织内组胺含量的研究

选择泌乳期和静止期大鼠，经乳腺局部（乳导管）或外周（跖部皮下）注射辣根过氧化物酶（HRP）后，应用改良甲苯胺蓝染色法（MTB）对乳腺及其引流（鼠蹊部）和非引流（腘）淋巴结内的肥大细胞数量变化进行了研究，用荧光测定改良法检测了乳腺组织中组胺含量。结果显示，对照组乳腺及引流和非引流淋巴结内的肥大细胞数量均为静止期显著多于泌乳期（P〈0．01），乳腺中组胺含量也呈相同的变化趋势。在泌乳期从不同部位引人HRP后，乳腺及乳腺引流淋巴结内肥大细胞数量明显增多，与对照组相比差异极显著（P〈0．01）；而乳腺非引流淋巴结内肥大细胞数量则略有减少，与对照组相比差异不显著（P〉0．05）。在静止期从不同部位引人HRP后，乳腺及乳腺非引流淋巴结内肥大细胞数均减少，而乳腺引流淋巴结内的肥大细胞数则随引人部位不同而有差别：乳腺引人时增加，而外周引入时减少。本研究结果表明肥大细胞数量随生理周期的改变而增减的趋势与乳腺的发育、乳腺局部免疫状态及内分泌调节都有关系，而且不同泌乳阶段乳腺内肥大细胞对异物的易感性也存在差异。     

大鼠乳腺局部免疫的调节机制--泌乳期与静止期乳腺肥大细胞分布的比较

应用改良甲苯胺蓝染色法(MTB)观察了大鼠泌乳期和静止期乳腺肥大细胞的分布、形态、数量变化规律．并用阿尔新蓝一番红鉴别染色法(AB-S)进行了细胞化学分型研究。结果：AB-S染色显示，大鼠乳腺只存在黏膜型肥大细胞；无论是泌乳期还是静止期。乳腺肥大细胞大多分布于腺泡间和小叶问结缔组织中。细胞的形态各异，但细胞数量在静止期和泌乳期有显著差异。泌乳期的乳腺肥大细胞数量明显减少(P＜0．01)。乳腺肥大细胞的动态变化，可能与乳腺泌乳期腺泡上皮的生长和静止期腺泡问结缔组织细胞增生等结构变化有关。     

Ultrasonographic assessment of the feline mammary gland

The aim of this study is to characterise the feline mammary echotexture using B-mode ultrasonography, which is not routinely used to examine the feline mammary gland. Using a 5-9 MHz linear transducer the ultrasonographic appearance of non-stimulated and stimulated mammary glands was determined in 35 mature intact non-pregnant, pregnant and lactating queens aged from 16 months to 8 years. In intact non-pregnant queens, mammary glands are fairly underdeveloped and on the ultrasonograms they appear with a regular hypoechoic texture and generally show a thickness of less than 2.0mm. The stimulated mammary tissue typically presents a more hyperechoic appearance compared to the non-stimulated gland and a fine granular echotexture. Maximum echogenicity of the mammary gland is reached during lactation. In late pregnancy, the mammary glands reach 6-9 mm in thickness. During lactation, the size of the glands depends on the existence of a suckling stimulus, with the suckled glands reaching about 11 mm in thickness. Ductal structures can only be imaged during late pregnancy and lactation. Ultrasonographic evaluation of the feline mammary gland can become a valuable diagnostic tool to characterise physiological changes and may further contribute to a better characterisation of diseased mammary tissue.     

动物乳腺干细胞的研究进展

乳腺干细胞具有产生所有类型乳腺细胞的能力。在乳腺组织生长发育过程中,乳腺干细胞对于动物青春期、妊娠期、泌乳期和泌乳衰退期的乳腺生长与重建等具有重要意义。体外培养的乳腺干细胞是研究乳腺细胞增殖、分化、生存和凋亡等信号通路的理想模型,同时在转基因乳腺生物反应器方面也具有重要的应用前景。因此,乳腺干细胞的研究对于乳腺发育的认知,乳腺癌的治疗及农业生产具有重要意义。作者针对乳腺干细胞的筛选、定位和体外培养方法的研究现状进行了系统的综述,并对未来的研究方向与应用前景加以展望。     

Bovine mammary dendritic cells: a heterogeneous population, distinct from macrophages and similar in phenotype to afferent lymph veiled cells

Dendritic cells (DC) are a heterogeneous population of professional antigen presenting cells and are potent stimulators of na?ve T-cells. However, there is little previous research describing DC in bovine mammary tissue, primarily because of the difficulty distinguishing these cells from macrophages, which possess a similar phenotype. Using immunohistofluorescence and a combination of markers (MHC-II, CD205, CD11c), DC were localized in the bovine mammary gland and supramammary lymph node. In mammary tissue DC were found within the alveolar epithelium and within the intralobular connective tissue. In the lymph node DC were found on the periphery of B-cell areas, in the cortex, and among T-cells in the paracortex and medulla. DC in mammary parenchyma and supramammary lymph nodes were quantified and further characterized using flow cytometry. DC were CD11c(hi), CD14(lo) cells that expressed MHC-II and CD205. DC could be distinguished from macrophages based on their low CD14 expression. This research provides a better understanding of mammary gland immunology, while potentially aiding in the targeting of antigens to mucosal DC for vaccine development.     

Modulation of apical Na+/Pi cotransporter type IIb expression in epithelial cells of goat mammary glands

Recently, the type II sodium-dependent phosphate cotransporter NaPi IIb, which mediates the intestinal phosphate transport, was detected in the apical membranes of caprine mammary gland epithelial cells. Regulatory influences of developmental stages, dietary phosphorus (P) supply and hormones like calcitriol are well described for the intestinal NaPi IIb. Therefore, it was the aim of this study to examine the influence of involution and dietary P restriction on the expression of mammary gland NaPi IIb and of vitamin D receptor (VDR). During involution both, NaPi IIb and VDR, showed an initial increase of expression. This resulted in a delayed response on protein level. Dietary P restriction resulted in a decrease of mRNA expression which was not reflected on protein level. Influenced expression pattern, at least on mRNA level, indicate that mammary gland NaPi IIb is a regulated phosphate transporter which might have an important role especially during involution. Coexpression pattern with VDR provides an indication that calcitriol could be the modulator of these adaptive responses to involution and dietary P restriction. Therefore, a physiological meaning of NaPi IIb in mammary gland epithelia during processes of cell regeneration has to be considered.     

猪乳腺细胞分离培养及EGFP基因转化

本研究旨在从猪乳腺组织中分离得到上皮细胞和成纤维细胞,并将EGFP基因导入这些细胞.利用乳腺细胞堵养体系从成年猪乳腺组织中分离培养上皮细胞和成纤维细胞,并利用脂质体介导转染技术将EGFP基因导入这些细胞.结果,从成年猪乳腺组织中成功分离培养出上皮细胞和成纤维细胞,获得转EGFP基因上皮细胞和成纤维细胞.上皮细胞呈短梭形或多角形,细胞之间紧密相靠,互相衔接,连接成片;细胞核呈圆形或椭圆形,核仁2～4枚,比较明显.成纤维细胞呈长梭形.结果表明,可以从猪乳腺组织中分离上皮细胞和成纤维细胞,EGFP可以在这些细胞中表达.     

奶牛原代乳腺上皮细胞的培养及β酪蛋白mRNA的表达

本试验旨在建立原代乳腺上皮细胞系的体外培养方法,并进行β酪蛋白mRNA的表达验证。取新鲜泌乳期的乳腺组织,采用组织块法培养纯化原代乳腺上皮细胞,利用显微镜观察细胞形态并进行细胞生长计数,采用实时荧光定量PCR技术检测β酪蛋白mRNA表达。结果显示,纯化培养的原代乳腺上皮细胞集聚成岛屿状生长,具有典型的铺路石和鹅卵石形状,细胞生长曲线呈"S"形,符合一般细胞的生长规律,并成功表达β酪蛋白mRNA。综上所述,本研究采用组织块法成功培养出具有正常生理功能的奶牛原代乳腺上皮细胞,为后续的乳腺上皮细胞功能研究提供了良好的细胞试验模型。     

Zum Bau der Milchdrüse des Rindes während der Trockenstehperiode unter besonderer Berücksichtigung der Involutionsprozesse

Light microscopical and histochemical investigations were performed on biopsies, which were obtained from the mammary glands of healthy pregnant cows during different stages of the nonlactating period. The results demonstrate characteristic morphological changes in the different phases of the nonlactating period. They can be interpreted as involution and regeneration processes, which occur in the alveoli and interalveolar tissue of the bovine mammary gland during the nonlactating period.