不同生殖周期阶段对犬卵巢卵母细胞体外发育的影响

试验以屠宰场犬卵巢为材料,研究了不同生殖周期阶段(卵泡期、黄体期和乏情期)对犬卵母细胞体外发育的影响。结果表明,从卵泡期卵巢采集A类COCs的数量为22.67±11.02个,显著高于黄体期10.67±5.51个和乏情期7.25±4.92个(P＜0.05);体外培养48 h时,卵泡期、黄体期和乏情期卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率分别为19.2%±15.3%、26.8%±21.1%、9.8%±10.4%,卵泡期与黄体期之间差异不显著(P＞0.05),但两者均显著高于乏情期(P＜0.05);体外培养72 h时,卵泡期、黄体期和乏情期卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率分别为25.2%±13.5%、6.6%±6.7%、9.2%±5.5%,卵泡期显著高于黄体期和乏情期(P＜0.05)。同时,随体外培养时间延长,不同生殖周期阶段犬卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率存在不同变化。说明不同生殖周期阶段对犬卵巢卵母细胞体外发育有一定影响,且与培养时间有关。     

牦牛p38MAPK在雌性主要生殖器官中的表达

旨在研究p38MAPK在母牦牛主要生殖器官中的表达情况,了解其表达差异性,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。本研究采集卵泡期、黄体期、妊娠期成年健康母牦牛(各2头)主要生殖器官样品,免疫组化技术检测p38MAPK蛋白的表达部位;qRT-PCR和Western-blot技术对其基因和蛋白进行相对表达量测定。结果:1)免疫组化结果显示,p38MAPK蛋白在牦牛的卵巢、输卵管和子宫均呈阳性表达;2)qRT-PCR结果表明,p38MAPK基因在卵巢中的表达量卵泡期显著高于妊娠期(P0.05);在输卵管中的表达量黄体期显著高于卵泡期和妊娠期(P0.05);在子宫中的表达量妊娠期极显著高于卵泡期和黄体期(P0.01);3)Western-blot结果显示,p38MAPK蛋白在卵巢中的表达量卵泡期极显著高于黄体期和妊娠期(P0.01);在输卵管中的表达量黄体期极显著高于卵泡期和妊娠期(P0.01);在子宫中的表达量妊娠期极显著高于卵泡期和黄体期(P0.01)。结果表明,p38MAPK在母牦牛同一生殖器官的不同繁殖阶段其表达存在差异性,其可能参与了牦牛卵泡发育、黄体功能发挥以及胚胎着床和发育等一系列生殖过程,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。     

米糠替代部分玉米的高纤维日粮对后备母猪性成熟及卵泡发育的影响

为研究高纤维日粮对后备母猪性成熟和卵泡发育的影响,本试验选用48头体重、体况相近的苏淮小母猪,随机分为2组,每组24头,在体重(52.60±0.79)kg时分别饲喂含纤维5.41%和7.58%的日粮,自由采食,自由饮水。饲喂纤维含量5.41%的后备母猪组为对照组,日粮中不含米糠;纤维含量7.58%的为试验组,日粮中含有米糠。试验持续75天。试验结束后剔除部分不健康和子宫卵巢发育有问题的个体,剩余母猪按卵泡期、黄体期及性未成熟期取样分析。结果表明:试验组的试验末重(87.40±2.32)kg和体增重(35.65±1.89)kg显著低于对照组的试验末重(93.75±1.87)kg和体增重(41.00±1.37)kg(P0.05);试验组的性成熟率(40%)显著低于对照组的性成熟率(75%)(P0.05);无论对照组还是试验组,卵泡期和黄体期的子宫重均极显著高于性未成熟的子宫重(P0.01);对照组卵泡期和黄体期的卵巢重显著高于性未成熟的卵巢重(P0.05);试验组卵泡期和黄体期的卵巢重极显著高于性未成熟的卵巢重(P0.01);试验组和对照组同一时期(卵泡期、黄体期、性未成熟期)的原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、有腔卵泡、闭锁卵泡及黄体数差异不显著;无论对照组还是试验组,卵泡期、黄体期与性未成熟期之间各级卵泡差异不显著。我们的结果提示,高纤维日粮显著影响后备母猪的性成熟,对性成熟前后母猪的卵巢重具有一定促进作用,但对卵泡发育没有显著影响。     

促卵泡素受体和促黄体素受体在乏情期和怀孕期牦牛卵巢中的表达

应用免疫组织化学技术和图象分析方法对乏情期、怀孕期牦牛卵巢的促卵泡素受体(FSHR)、促黄体素受体(LHR)的表达特点进行了研究。结果表明,牦牛卵巢的皮质、髓质、颗粒层和膜内层、黄体中都分布有FSHR和LHR。且牦牛卵巢皮质、髓质中的FSHR光密度值在乏情期显著大于怀孕期(P0.05);怀孕期无黄体侧卵巢颗粒层和膜内层中FSHR光密度值均大于乏情期和怀孕期有黄体侧(P0.05)。怀孕期有黄体侧卵巢皮质处LHR光密度值最大,乏情期次之,怀孕期无黄体侧最小,各组间差异显著(P0.05);在怀孕期无黄体侧卵巢髓质处LHR光密度值显著小于怀孕期有黄体侧和乏情期(P0.05);在乏情期、怀孕期无黄体侧和怀孕期有黄体卵巢颗粒层和膜内层处LHR光密度值之间差异均不显著(P0.05)。表明牦牛卵巢中FSHR和LHR随着生殖阶段的不同而变化。     

Smad1基因在敖汉细毛羊发情不同时期卵巢中的表达规律研究

为了探索Smad1 mRNA及其蛋白在敖汉细毛羊不同发情时期卵巢中表达量的变化规律,试验采用实时荧光定量PCR、免疫组化方法分析绵羊不同繁殖状态下(乏情期、发情间期、发情前期、发情期)Smad1基因在卵巢中mRNA表达量的变化规律及卵巢中该基因蛋白的表达,并进行图像分析。结果表明:发情期Smad1基因表达量最高,极显著高于其他三个时期(P0.01);发情前期Smad1基因表达量显著高于乏情期和发情间期(P0.05)。在绵羊不同发情时期Smad1蛋白主要表达于乏情期原始卵泡、次级卵泡的颗粒细胞、发情间期次级卵泡的卵泡膜细胞,在发情前期与发情期卵泡中未见表达。卵巢中Smad1基因可能促进黄体溶解,对卵泡发育、卵子的成熟以及释放起作用,与绵羊发情的启动有一定关系。     

微滴单培养犬卵母细胞的体外成熟能力及直径、透明带变化规律的研究

为了完善犬卵母细胞体外培养体系,试验以犬卵巢为材料,研究微滴单培养犬卵母细胞的体外成熟能力及卵母细胞直径与透明带厚度的变化规律。结果表明:体外培养48 h后,卵泡期与黄体期犬卵母细胞达到第1次减数分裂中期-第2次减数分裂中期(MⅠ-MⅡ期)比率分别为(15.9±8.0)%、(17.1±4.9)%,两者差异不显著(P>0.05),但均显著高于乏情期[(6.1±5.5)%](P<0.05),可见微滴单培养犬卵母细胞具有一定的体外成熟能力;处于生发泡期(GV期)、生发泡破裂期(GVBD期)、MⅠ期和MⅡ期的犬卵母细胞直径分别为155.42,171.12,183.50,155.96μm,透明带厚度分别为29.20,33.70,33.91,30.31μm,均无显著性差异(P>0.05),但均存在由小变大再逐渐变小的趋势。     

小尾寒羊黄体期和卵泡期生殖轴凋亡基因的表达研究及其与发情的关系

旨在分析Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL基因在小尾寒羊黄体期和卵泡期下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异,并探究这些基因与绵羊常年发情性状的关系。以常年发情小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术,对比分析了Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL4个基因在不同繁殖状态下(黄体期和卵泡期)小尾寒羊下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达特征,采用放射免疫法(RIA)检测相应时期血清雌二醇和孕酮含量。结果表明,Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL4个基因在下丘脑、垂体、卵巢均有表达,Bad和Bcl-2在黄体期的垂体和卵巢中的表达量均显著高于卵泡期(P0.05),在下丘脑中2个时期表达量都没有显著差异(P0.05);Bax和Bcl-xL在黄体期下丘脑、垂体和卵巢中的表达量与卵泡期均无显著差异(P0.05)。黄体期血清中孕酮含量显著高于卵泡期(P0.05),而2个时期血清中雌二醇含量没有显著差异(P0.05)。Bad和Bcl-2基因在小尾寒羊黄体期和卵泡期的垂体和卵巢中差异表达,可能参与调控黄体期到卵泡期的发情状态转换,从而启动小尾寒羊发情。     

溶血磷脂酸受体1-3在牦牛不同时期卵巢中表达定位

为探究正常生理下条件下溶血磷脂酸受体(LPAR)1-3在牦牛不同时期卵巢(卵泡期、黄体期、妊娠期)表达及生物学作用,利用RT-qPCR检测LPAR1-3基因在不同时期卵巢上的表达,同时利用蛋白质免疫印迹、免疫组织化学(IHC)等方法对LPAR1-3基因和蛋白的表达进行分析和定位。结果显示,LPAR1-3在牦牛不同时期卵巢上均有表达,其中LPAR1-3的表达量在妊娠期显著高于卵泡期和黄体期(P0.05),卵泡期表达量最低;在卵泡期、黄体期、妊娠期LPAR3的表达量均显著高于LPAR1和LPAR2(P0.05),LPAR2的表达量最低;IHC结果显示,LPAR1-3在卵巢生殖上皮、颗粒细胞、卵泡液、卵泡膜和黄体细胞均有表达。研究结果提示LPAR1-3可能在卵泡生长、发育、排卵以及维持妊娠等一系列生殖过程中发挥重要的作用,其中LPAR3可能在这一过程中起主要作用,该结果有助于对牦牛繁殖机能的进一步研究,可为高原哺乳动物生殖生理的研究提供理论依据。     

神经生长因子(NGF)在母牛性腺及性腺外生殖器官中的表达研究

本研究旨在探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在母牛卵泡期及黄体期子宫、卵巢、输卵管3种组织中的表达情况。采用FQ-PCR方法和Western blotting技术对成年母牛卵泡期及黄体期的子宫、卵巢、输卵管中的NGF mRNA和蛋白质表达进行了检测。结果表明,NGF mRNA和蛋白质在卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中均有表达,且卵泡期子宫中NGF mRNA表达量显著高于卵泡期卵巢和黄体期输卵管中NGF mRNA表达量(P0.05),其它组织间无显著差异。     

共轭亚油酸对小鼠血清瘦素、内脂素水平及生殖的影响

本试验旨在探讨共轭亚油酸对小鼠生殖的影响及其机理。购入60只6~7周龄的KM雌性小鼠,随机分为2组。对照组饲喂添加了1.5%花生油的繁殖颗粒料,试验组饲喂添加了1.5%花生油和1.5%共轭亚油酸的繁殖颗粒料。酶联免疫法测定不同生殖周期血清瘦素和内脂素浓度,常规石蜡切片法制备卵巢切片,观察卵巢的组织学结构并计数次级卵泡数量。每组各6只妊娠后饲养至产仔。结果显示:共轭亚油酸极显著降低了间情期、发情期、妊娠5d小鼠的血清瘦素浓度(P0.01),显著降低了妊娠9d瘦素浓度(P0.05);共轭亚油酸极显著降低了间情期、发情期、妊娠9d的血清内脂素浓度(P0.01),显著降低了妊娠5d时血清内脂素浓度(P0.05);共轭亚油酸极显著增加发情期次级卵泡的数量和产仔数(P0.01)。由此可见,共轭亚油酸可能通过调节血清瘦素和内脂素水平,增加发情期次级卵泡数量和胚胎数量,提高小鼠的生殖能力。     

Expression and localisation of Bcl-2 and Bax proteins in developing rat ovary

Bcl-2 and Bax proteins localised mainly in granulosa cells. Primordial and primary follicles of new born rat ovary showed an intensive nuclear staining for Bax but faint staining for Bcl-2. In terms of staining intensity, no remarkable difference was observed within the same stage of developing follicle. Compared to new born rats, granulosa cells of adult and one month old rat ovary showed an increased staining both for Bcl-2 and Bax proteins. No staining was observed in primordial follicles of one month old and adult rats. However, granulosa cells of primary follicles, granulosa cells and theca cells in tertiary follicles of adult rat ovary also showed a strong staining for Bcl-2 and Bax proteins. Oocytes of follicles from different developmental stages revealed an apparent staining both for Bcl-2 and Bax proteins. However, in the more mature follicles oocytes stained more intensively. In developing corpus luteum a remarkable staining was observed for Bax. However, the staining was more prominent in regressing corpus luteum. Contrary to this, Bcl-2 stained the luteal cells in developing corpus luteum strongly, while in the fully developed corpus luteum no staining for Bcl-2 was observed. In conclusion, there was an apparent relation between the expression of the apoptosis regulating protein Bcl-2 and Bax and follicular development. Thus, during the follicular development Bcl-2 and Bax may be involved in granulosa cell demise in rat ovary. Furthermore, increased levels of Bax and decreased levels of Bcl-2 in the fully developed corpus luteum suggest that Bax plays a role in apoptosis of luteal cells in rat ovary.     

Relationships among the corpus luteum,follicles and conceptus in sheep

This study aimed to investigate the intra- and interovarian relationships among the corpus luteum (CL), the largest follicle (LF) and follicular population in non-pregnant and between the conceptus and ovarian structures in pregnant ewes. In experiment 1, the follicular and luteal structures were examined in 538 reproductive systems of non-pregnant Awassi ewes. The follicular population was categorised into small (SF), medium (MF) and large (LF) groups. Inter-relationships between CL and follicular population and between LF and subordinate follicles were determined. In experiment 2, the location and number of conceptuses were identified and correlated with the ovarian structures in 58 reproductive systems of pregnant ewes. Effects of pregnancy status, stage of pregnancy, pregnancy side and conceptual number on follicular population were determined. The results showed that the right ovary was more active than the left ovary. CL had intraovarian positive effect on the number of medium and large follicles. LF had no local suppressive effect on the subordinate follicles. Side and stage of pregnancy and the conceptual number did not affect the follicular population. Accordingly, it can be concluded that the LF has no local suppressive effect on the subordinate follicles. The CL has intraovarian positive effect on the follicular population. Follicular population does not show remarkable changes during the first term of pregnancy. The present study probably provides information which may help in the understanding of the ovarian dynamics during pregnancy in sheep.     

6月龄和成年牦牛卵巢及卵泡发育状况研究

为了研究6月龄牦牛和成年牦牛卵巢及表面卵泡发育状况,试验比较了6月龄和成年牦牛卵巢长度、宽度、厚度、重量、卵泡数量以及卵母细胞体外成熟培养效果。结果表明:成年牦牛卵巢长度(2.29±0.43)cm、宽度(1.91±1.31)cm和厚度(1.60±1.90)cm均显著大于6月龄牦牛[(1.65±0.30)cm、(1.14±0.25)cm、(0.79±0.26)cm](P<0.05),成年牦牛卵巢体积(6.92±7.00)cm3和重量(3.19±1.58)g极显著大于6月龄牦牛体积(1.63±0.93)cm3和重量(0.87±0.44)g(P<0.01)。6月龄牦牛Ⅰ级卵泡数(14.47±8.74)枚和平均总卵泡数(15.17±8.87)枚极显著高于成年牦牛Ⅰ级卵泡数(7.97±3.72)枚和平均总卵泡数(8.98±3.87)枚(P<0.01),Ⅱ级卵泡数差异不显著(P>0.05),成年牦牛平均每头含(0.02±0.15)枚Ⅲ级卵泡,而6月龄牦牛无Ⅲ级卵泡。成年牦牛有黄体卵巢重量显著大于无黄体卵巢重量(P<0.05),有黄体卵巢含(0.06±0.24)枚Ⅲ级卵泡,而无黄体卵巢不含Ⅲ级卵泡。6月龄和成年牦牛A、B级卵母细胞体外培养成熟率分别为(81.39±3.53)%、(80.44±4.50)%,差异不显著(P>0.05),而6月龄牦牛卵巢的平均卵母细胞数和平均A、B级卵母细胞数均显著高于成年牦牛(P<0.05)。     

The localization and expression of epidermal growth factor and epidermal growth factor receptor in bovine ovary during oestrous cycle

Epidermal growth factor (EGF) is one of the important regulatory factors of EGF family. EGF has been indicated to effectively inhibit the apoptosis of follicular cells, to promote the proliferation of granulosa cells and the maturation of oocytes, and to induce ovulation process via binding to epidermal growth factor receptor (EGFR). However, little is known about the distribution and expression of EGF and EGFR in cattle ovary especially during oestrous cycle. In this study, the localization and expression rule of EGF and EGFR in cattle ovaries of follicular phase and luteal phase at different time points in oestrous cycle were investigated by using IHC and real-time qPCR. The results showed that EGF and EGFR in cattle ovary were mainly expressed in granulosa cells, cumulus cells, oocytes, zona pellucida, follicular fluid and theca folliculi externa of follicles. The protein and mRNA expression of EGF/EGFR in follicles changed regularly with the follicular growth wave both in follicular and in luteal phase ovaries. In follicular phase ovaries, the protein expression of EGF and EGFR was higher in antral follicles than that of those in other follicles during follicular growth stage, and the mRNA expression of EGFR was also increased in stage of dominant follicle selection. However, in luteal phase ovaries, the growth of follicles was impeded during corpus luteum development under the action of progesterone secreted by granular lutein cell. The mRNA and protein expressions of EGF and EGFR in ovarian follicles during oestrous cycle indicate that they play a role in promoting follicular development in follicular growth waves and mediating the selection process of dominant follicles.     

卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系

用简单机械分离法处理了 12 7枚成年牛卵巢。结果显示 ,在外观正常的卵巢中 ,腔前卵泡的采集数量与卵巢的大小成正相关关系 ,而有无黄体与腔前卵泡的采集数量无明显关系 ;卵巢上不同大小的可见卵泡的数量和分布与腔前卵泡的采集量有关。卵巢上可见卵泡分布均衡 ,大、中、小卵泡均有分布 ,小卵泡不过多以及无大卵泡 ,但中、小卵泡较多的 ,无论是否有黄体存在 ,均可获得较多腔前卵泡。而卵巢表面脂肪化、卵巢充血、有弥散性片状黄体及幼稚卵巢的 ,则腔前卵泡分离很少或几乎分离不到     

藏绵羊卵巢组织学及卵泡超微形态的观察

旨在通过观察藏绵羊卵泡、黄体的组织学特征及卵泡的超微形态,探讨其与生理功能的关系。本研究运用大体解剖、常规组织切片和H.E染色及透射电镜技术对藏绵羊卵巢卵泡和黄体的组织结构特点以及卵泡的超微形态进行观察和分析。结果发现,藏绵羊黄体期和卵泡期卵巢的宽度和厚度存在显著差异（P<0.05）,而重量和长度无显著差异（P>0.05）;卵巢上的大多数卵泡通过颗粒细胞萎缩和纤维化而闭锁;黄体中膜黄体细胞（直径22 μm）和颗粒黄体细胞（直径50 μm）结构特征明显且分界清晰,其内部分布着丰富的毛细血管;通过观察卵泡的超微形态发现,随着卵泡的发育,卵泡细胞的形状由椭圆形变为多边形,数量增多且被膜细胞包围;细胞器数量和种类也增多且之间联系紧密,胞质可见分泌的皮质颗粒。结果表明,藏绵羊卵泡系统和黄体的组织学特点以及卵泡的超微形态与其他绵、山羊类似,随着卵泡的发育,血管增生较快,卵泡结构特征变化明显和细胞器致密化程度增加且卵泡在不同时期均会闭锁;黄体内部在毛细血管滋生下使两种黄体细胞结构更加完整且特征明显,这可能是藏绵羊在高原低氧环境下仍然能够发挥卵巢机能的重要基础保障。     

猪黄体不同发育时期活性氧水平及多种抗氧化酶mRNA表达量变化规律的研究

试验旨在研究活性氧(ROS)及抗氧化酶基因表达在猪黄体组织发育及退化过程中的变化规律,为诠释猪黄体抗氧化机制补充理论基础并提供新的思路。试验所用卵巢采自延吉屠宰场,将黄体从卵巢剥离后,通过其形态大小将黄体初步分为初期、中期、后期以及白体,然后通过检测孕酮水平准确区分中期及后期黄体;通过冰冻切片及DHE荧光染色技术检测各时期黄体ROS水平,通过实时荧光定量PCR对各时期黄体内锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及谷胱甘肽过氧化氢酶(GPx)的mRNA表达量进行检测。结果表明:猪黄体内ROS水平随猪黄体周期性发育进程出现规律性升高,即后期ROS水平显著高于其他时期(P<0.05);中期显著高于初期与白体(P<0.05);而初期与白体间差异不显著(P>0.05)。Mn-SOD、GPx1及GPx4基因的表达水平随黄体的发育进程则出现规律性的下降:初期及白体中这几个基因的表达水平显著高于中期与后期(P<0.05),中期显著高于后期(P<0.05)。对于GPx3基因,其在白体的表达量显著高于其他时期(P<0.05),初期表达水平显著高于中期与后期(P<0.05),中期显著高于后期(P<0.05)。CAT基因表达量不随黄体的发育而变化(P>0.05)。综合上述试验结果,ROS、Mn-SOD及GPx与猪黄体发育及退化有关;而ROS水平与Mn-SOD及GPx的表达水平呈现出相反的规律。     

绵羊发情周期中VEGF在卵巢中的表达

应用免疫组化方法结合计算机图像分析技术,分析同期发情后0、5、9、12、15d的绵羊卵巢中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）表达强度变化,以期了解VEGF在绵羊卵巢发情周期不同时期的表达规律。结果显示：VEGF阳性目标主要出现于卵泡膜与颗粒细胞。原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡VEGF表达依次增强（P〈0．05）。发情周期0～5d,大窦腔卵泡（颗粒细胞4～8层）VEGF表达量骤然上升（P〈0．05）,而9d开始显著下降,与5d比较差异显著（P〈0．05）。12d继续下降（P〈0．05）且为最低值,15d又明显上升（P〈0．05）。VEGF在卵巢间质呈弱表达,各个时期之间差异不显著（P〉0．05）。结果表明,绵羊卵巢存在着血管周期性新生的变化特点,而VEGF在这种周期性血管新生过程中起着重要的调控作用。