旋毛虫ES抗原对小鼠腹腔巨噬细胞NOD1受体通路影响的研究

为了解旋毛虫ES抗原对宿主巨噬细胞NOD1受体通路的影响,本研究通过体外实验将旋毛虫ES抗原作用于小鼠腹腔巨噬细胞,观察NOD1受体及其信号通路中关键分子及相关细胞因子的表达动态。应用荧光定量PCR监测细胞内NOD1、RIP2和NF-κB m RNA的转录水平,western blot测定NOD1、RIP2、NF-κBp65、NF-κB p-p65蛋白表达量,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量变化。结果显示,在一定的ES抗原作用浓度和时间范围内,巨噬细胞中各目的基因的转录水平均先增高,当作用时间和作用浓度超过一定值时则开始下降,作用24 h时NOD1 m RNA转录水平显著低于对照组(p0.01);ES抗原浓度15μg/mL作用时间9 h时,巨噬细胞中NOD1、RIP2和NF-κB p-p65蛋白量显著增加(p0.01),此时巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著增高(p0.01)。结果表明,旋毛虫ES抗原在一定的作用时间和浓度范围内,可以激活并调节小鼠腹腔巨噬细胞中NOD1受体通路,上调NOD1受体通路中关键分子RIP2和下游分子NF-κB的表达,可以促进细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌;并且超过一定时间和浓度的ES抗原刺激可以导致小鼠腹腔巨噬细胞出现免疫耐受。本研究证明了宿主NOD1受体参与了旋毛虫引起的宿主免疫应答,为旋毛虫病防治和理解旋毛虫对宿主的感染机制提供新的思路。     

高精料日粮对奶山羊乳腺组织NOD1炎性信号通路的影响

本试验旨在研究高精料日粮对奶山羊乳腺组织NOD1炎性信号通路的影响与调控。选取18头泌乳中期的健康萨能奶山羊,试验前分别安装瘤胃瘘管和乳静脉血管插管,随机分成3组:饲喂精粗比为4∶6的低精料日粮作为对照组(LC);饲喂精粗比为6∶4的高精料日粮作为处理组(HC);饲喂高精料日粮并添加丁酸钠作为调控组(BHC),试验时间为20周。试验结束后采集瘤胃液、乳静脉血和乳腺组织样品用于后续的瘤胃pH值、乳静脉血中炎性因子浓度、乳腺组织中炎症相关基因m RNA和蛋白水平的检测。结果显示:一天内HC组的瘤胃pH值小于5.8持续4 h且显著低于LC组,表明亚急性瘤胃酸中毒(SARA)诱导成功;饲喂4 h后BHC组瘤胃pH值显著高于HC组而与LC组差异不显著,表明丁酸钠能够缓解瘤胃pH的持续降低。HC组乳静脉血中炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度显著高于LC组,而BHC组的炎性细胞因子溶度显著低于HC组并与LC组无显著差异;与LC组和BHC组相比,HC组奶山羊乳腺组织炎症相关基因NOD1、RIP2、NF-κB、IL-1β、IL-6的表达量显著上调;NOD1、NF-κBp65、NF-κBpp65的蛋白表达水平和m RNA水平变化一致。结果表明,长期饲喂高精料日粮能够激活奶山羊乳腺组织的NOD1-NF-κB炎性信号通路,诱导乳腺炎症应答,日粮中添加丁酸钠可以一定程度地缓解乳腺组织的炎症反应。     

胞壁酰二肽对小鼠乳腺组织和乳腺细胞NOD2表达的影响

细菌感染是引起奶牛乳腺炎的主要原因,而胞壁酰二肽(MDP)几乎存在于所有细菌中,核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)受体是天然免疫中对病原微生物的病原体相关分子模式识别的一类感受器,在机体天然免疫应答中发挥重要作用。为了研究MDP对小鼠乳腺组织和乳腺细胞NOD2表达的影响,试验以小鼠为模型,采用不同浓度的MDP在体乳腺内灌注和对体外小鼠乳腺上皮细胞用不同浓度的MDP刺激,观察小鼠乳腺组织的病理组织学变化,乳腺组织及细胞中NOD2、下游的受体作用蛋白2(RIP2)表达的变化,以及炎性细胞因子TNF-α、IL-6的表达变化。结果表明:从乳腺灌注不同浓度MDP后可引起急性乳腺炎,乳腺组织中炎性细胞增多;MDP刺激后乳腺组织及细胞中NOD2、RIP2、TNF-αmRNA表达水平明显升高,细胞IL-6 mRNA表达水平没有明显升高。说明NOD2介导信号途径促使炎性细胞因子的表达。     

利用牛乳腺细胞和小鼠乳腺组织分析异绿原酸C通过NF-κB信号通路对乳腺炎症反应的抑制效应

旨在探究异绿原酸C(ICAC)对乳腺炎及NF-κB炎性通路的抑制作用。本研究以脂多糖(LPS)分别刺激牛乳腺上皮细胞(MAC-T)和小鼠乳腺组织建立体外和体内炎性模型，采用MTT方法筛选ICAC处理MAC-T细胞的适宜浓度，ELISA检测炎性因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)和炎性介导因子(COX-2和iNOS)的表达水平，Western blot方法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IκB和p65)的表达水平和磷酸化水平。结果发现：1)ICAC在20～100 mg·L^-1的浓度下对MAC-T细胞没有显著的生长抑制作用(P>0.05);2)1 mg·L^-1的LPS处理引起MAC-T细胞中IL-1β、IL-6的蛋白质表达量极显著高于对照组(P<0.01),ICAC处理(20、50、80 mg·L^-1)极显著下调了MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2和iNOS的表达量(P<0.01);3)小鼠腹腔注射的ICAC(60、80、100 mg·kg^-1)均降低了L...     

脂多糖刺激对仔猪肠道、肝脏和肌肉组织NODs信号通路关键基因及其负调控因子mRNA表达的影响

本试验旨在研究脂多糖(LPS)刺激对仔猪核苷酸结合寡聚化结构域蛋白(NODs)信号通路关键基因及其负调控因子m RNA表达的影响。选取12头杜×长×大断奶仔猪,分成2个处理组,每个处理组6个重复。试验组注射100μg/kg体重的LPS,对照组注射等量的生理盐水。注射LPS或生理盐水4 h后,屠宰仔猪,取空肠、回肠、肝脏、背最长肌和腓肠肌,应用实时荧光定量PCR技术测定NODs信号通路关键基因及其负调控因子m RNA表达水平,包括NOD1、NOD2、受体相互作用蛋白激酶2(RIPK2)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、矢车菊苷β1(ACAP1)和Erbb2相互作用蛋白(ERBB2IP)m RNA表达水平。结果表明:与对照组相比,LPS刺激显著提高了肝脏NOD1、NOD2、RIPK2、NF-κB和TNF-α,背最长肌NOD2、RIPK2和TNF-α,腓肠肌NOD2、RIPK2、NF-κB和TNF-α,空肠RIPK2和TNF-α的m RNA表达量(P0.05),LPS刺激有提高回肠RIPK2和NF-κB m RNA表达量的趋势(P0.10);同时,LPS刺激显著降低了空肠ACAP1和ERBB2IP,回肠和肝脏ACAP1的m RNA的表达量(P0.05)。这表明,LPS激活仔猪肠道、肝脏和肌肉组织中NODs信号通路关键基因的表达,而抑制其负调控因子ACAP1和ERBB2IP的表达。     

木犀草素对LPS诱导的小鼠乳腺炎保护作用研究

为了观察木犀草素对LPS诱导的小鼠乳腺炎症的保护机制,试验采用LPS乳导管灌注方式建立小鼠乳腺炎动物模型,并通过ELISA法、H.E.染色、髓过氧化物酶(MPO)活性测定和Westernblot分析等检测了小鼠乳腺组织的相关指标。结果表明:与对照组相比,LPS能够明显导致乳腺组织病理学损伤,增加组织MPO活性,促进肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的产生以及NF-κB信号通路蛋白的表达,而木犀草素能够抑制LPS诱导的小鼠乳腺组织的炎症变化。说明木犀草素对小鼠乳腺炎症的发生具有一定保护作用。     

根皮素对LPS诱导的小鼠乳腺炎保护作用

为了研究根皮素对LPS诱导的小鼠乳腺组织的炎症变化,并证明根皮素对乳腺炎具有保护作用,试验应用乳导管内灌注LPS建立小鼠乳腺炎模型,进行H.E.染色、ELISA检测、Western-blott检测和髓过氧化物酶(MPO)检测等研究根皮素对乳腺组织的保护作用。结果表明:LPS能使乳腺组织产生病理学损伤,促进白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生,增加组织MPO活性,增强NF-κB信号通路蛋白的表达,而根皮素能够抑制LPS诱导的小鼠乳腺组织的炎症变化。说明根皮素对LPS诱导的小鼠乳腺炎具有一定保护作用。     

副猪嗜血杆菌OmpP2刺激猪肺泡巨噬细胞炎性因子mRNA转录及致炎机制初步分析

为了研究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)弱毒株11型H465株OmpP2刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs)炎性因子mRNA的转录和对NF-κB和MAPKs信号通路的影响,提取并纯化HPS血清11型H465株的OmpP2,分别用5、10μg·mL-1 OmpP2刺激PAMs 6、12h后收集细胞,提取总RNA和蛋白质。将提取的RNA反转录成cDNA,运用RT-PCR检测炎性因子(IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α)mRNA转录水平。利用Western blot方法检测ERK1/2、JNK、P38、P65和IκBα蛋白表达量的变化。结果表明:HPS H465株的OmpP2能够显著地诱导IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA转录水平上调(P0.05),同时能够引起JNK、P65蛋白表达水平显著升高和IκBα蛋白表达水平显著降低(P0.05)。上述结果证实了HPS血清11型H465株的OmpP2能够通过调节MAPKs信号通路中JNK蛋白以及NF-κB信号通路中P65蛋白和IκBα蛋白降解促进炎性因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的转录。     

干酪乳杆菌对细菌性肠炎NF-κB通路及其介导的炎性介质的影响

为分析干酪乳杆菌(L.casei)对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88引起的细菌性肠炎NF-kB信号通路及炎性介质的影响,本研究将90只BALB/c小鼠随机分成肠炎组(ETEC K88灌胃)、干预组(ETEC K88+L.casei灌胃)及对照组。对临床症状进行观察,利用荧光定量PCR方法检测肠系膜淋巴结中NF-κB、IL-1β及TNF-αm RNA水平,western blot方法检测肠系膜淋巴结中NF-κB蛋白表达量,ELISA方法检测外周血NO、PGE2含量。结果显示:肠炎组NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平、NF-κB蛋白表达量及NO、PGE2含量较高,与对照组相比差异显著(p0.05)。经L.casei干预后,人工感染ETEC的小鼠临床症状好转,NF-κB、IL-1β、TNF-αm RNA表达水平、NF-κB蛋白表达量及NO、PGE2含量均显著下降(p0.05)。表明L.casei可以通过抑制NF-κB的活化,降低IL-1β、TNF-α mRNA的表达,减少NO、PGE2的分泌,抑制肠道炎症的进一步发生。为L.casei的抑菌机制的深入研究奠定了基础。     

伪狂犬病病毒(PRV)感染小鼠三叉神经节对NF-κB信号通路的影响及其调控炎症因子分泌

为了探究伪狂犬病病毒(PRV)感染小鼠三叉神经节对NF-κB信号通路的影响及其调控炎症因子分泌的情况，本试验用10⁵ TCID₅₀ PRV滴鼻感染小鼠后使用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测不同时间段MyD88、TRIF、NF-κB p65、IL-1β、IL-6和TNF-α基因的转录情况，Western blot检测不同时间段MyD88、TRIF、IκBα、NF-κB p65、p-IκBα和NF-κB p-p65的表达情况，ELISA检测不同时间段IL-1β、IL-6和TNF-α的表达情况。结果显示，PRV感染小鼠三叉神经节后在早期会下调MyD88、TRIF和NF-κB p65基因mRNA转录(P<0.01),晚期会上调MyD88、TRIF和NF-κB p65基因mRNA转录(P<0.01),总体来说呈现先下调后上调的总趋势；Western blot结果显示，PRV感染小鼠三叉神经节后诱导IκBα和NF-κB p65的磷酸化，而对MyD88和TRIF的蛋白表达呈现先下调后上调的趋势，IκBα和NF-κB p65的蛋白表达呈现先下...     

细胞内模式识别受体NOD2研究进展

NOD2蛋白是一种新发现的细胞内模式识别受体,可识别细菌细胞壁的肽聚糖及其裂解产物胞壁酰二肽,广泛参与宿主对病原体的免疫应答,是联系天然免疫与特异性免疫的重要桥梁。本文在查阅、总结近年来NOD2相关研究报道的基础上,介绍了NOD2识别的配体及识别方式、NOD2信号转导通路及信号转导调控,及与NOD2相关的肠道免疫损伤等方面的研究进展。     

Inductive expression of the NOD1 signalling pathway in chickens infected with Salmonella pullorum

1. The aim of this study was to describe the role of Nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 1 (NOD1) receptor signalling in chicken.

2. Tissue-specific expression analysis of NOD1, receptor-interacting serine-threonine kinase 2 (RIPK2), nuclear factor kappa B (NF-κB) and mitogen-activated protein kinase 11 (MAPK11 or p38) by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) revealed their wide distribution in various organs and tissues.

3. Salmonella pullorum infection activated NOD1 receptor signalling in vivo and in vitro, resulting in significant induction of downstream signalling molecules RIPK2, NF-κB/p65, MAPK11/p38 and the effector molecules IL-1b and IL-8.

4. Activation of NOD1 by its agonist bacterial γ-D-glutamyl-meso-diaminopimelic acid (iE-DAP) in HD11 cells induced the adapter molecular RIPK2 and activated the NF-κB/p65 and MAPK11/p38 pathways, resulting in an increase in IL-8 but not IL-1β. Additionally, inhibition of NOD1 using NOD1-shRNA resulted in downregulation of RIPK2, MAPK11 and IL-8, while NF-κB/p65 and IL-1β were unaltered.

5. These results highlight the important role of NOD1 receptors in eliciting the innate immune response following pathogenic invasion in chicken.     

雏鸡烟曲霉感染NOD1信号通路关键分子mRNA水平的变化

为明确烟曲霉菌感染雏鸡后肺组织内核苷酸结合寡聚化结构域1(nucleotide-binding oligomerisation domain1,NOD1)信号通路中关键分子mRNA水平的变化情况,取10日龄雏鸡40只,随机分为2组。感染组(Aspergillus fuigatus,Af)雏鸡滴鼻烟曲霉菌孢子悬液,50μL/只;对照组雏鸡滴鼻等量生理盐水。分别于感染后12、24、48 h处死雏鸡。无菌取肺组织,菌落计数法测定肺组织中烟曲霉菌的负荷;实时定量PCR方法检测肺组织中NOD1、Rip2、NF-kBp65 mRNA的表达情况。结果表明,Af组0 h未见烟曲霉菌生长,其他各时间点均有霉菌生长,且霉菌负荷量逐渐增加。对照组未见烟曲霉菌生长。在烟曲霉菌感染后24、48 h肺组织中NOD1和NFkBp65 mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。感染后12、24 h肺组织中Rip25 mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。由此说明,NOD1信号通路在烟曲霉菌感染后被激活,其在抗烟曲霉菌感染免疫中必定扮演重要作用,详细机制有待进一步研究。     

脂多糖对仔猪下丘脑-垂体-肾上腺轴内应激基因和NOD信号通路关键基因表达的影响

本试验旨在研究免疫应激对仔猪下丘脑垂体肾上腺(HPA)轴应激基因和核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)信号通路关键基因表达的影响。选取12头杜×长×大仔猪,分成2个处理,每个处理6个重复。试验组注射100μg/kg体重的脂多糖(LPS)建立免疫应激模型,对照组注射等量的生理盐水。于注射LPS或生理盐水4 h后屠宰,取下丘脑、垂体和肾上腺。应用实时荧光定量PCR技术测定HPA轴应激基因和NOD信号通路关键基因在HPA轴中的mRNA 表达水平。结果表明:LPS导致下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素、垂体黑素皮质激素肽和肾上腺类固醇合成急性调节蛋白mRNA 表达量显著升高(P0.05);LPS导致HPA轴中NOD信号通路关键基因NOD1、NOD2、受体互作蛋白2和肿瘤坏死因子-α mRNA 表达量显著升高(P0.05)。综上所述,LPS促进了HPA轴应激基因和NOD信号通路关键基因的表达。     

口蹄疫病毒抑制NOD2蛋白表达及其抗病毒功能的机制

天然免疫系统在病毒感染早期识别和诱发抗病毒反应中发挥重要作用,宿主模式识别受体(PRRs,如RIG-I、Toll和NOD样等受体)识别病原微生物结构上保守组分病原相关分子模式(PAMPs),进而激活下游级联信号通路,诱导干扰素、细胞因子和促炎性因子等产生,激发抗病毒天然免疫。而病毒通过降解天然免疫信号通路分子或抑制其激活,从而抑制抗病毒应答。口蹄疫病毒(FMDV)通过多种蛋白抑制天然免疫,肖少波团队和杜以军团队鉴定了非结构蛋白Lpro和3Cpro,作为水解酶蛋白,抑制RIG-I通路分子的激活,并阐明其抑制天然免疫的机制;郑海学团队鉴定了结构蛋白VP3和非结构蛋白2B和3A等抑制干扰素产生。     

Up-regulation of NOD1 and NOD2 through TLR4 and TNF-alpha in LPS-treated murine macrophages

NOD1 (Card4) and NOD2 (Card15) are thought to be responsible for cytoplasmic defense against bacterial entry. To gain further knowledge about how their expressions are regulated in murine macrophages, we investigated the expression of NOD1 and NOD2 mRNAs after stimulation with various endotoxins, lipopolysaccharide, lipoteichoic acid and peptidoglycan. In macrophage RAW264.7 cells, the first and second rises in NOD1 and NOD2 mRNAs were observed at 2 hr and at 8-12 hr after endotoxin treatment. Increases in NOD1 and NOD2 mRNAs at 2 hr in lipopolysaccharide-treated RAW264.7 cells were reduced with the use of NF-kappaB inhibitor, caffeic acid phenethyl ester. In RAW264.7 cells, lipopolysaccharide-induced increases in NOD1 and NOD2 mRNAs were inhibited with anti-TLR4 antibody, and partially reduced in peritoneal macrophages obtained from TLR4-deficient mice. Furthermore, NOD1 and NOD2 mRNA expressions in RAW264.7 cells were increased by the treatment with proinflammatory cytokines, tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), interleukin-1beta (IL-1beta), or IL-6. In TNF-alpha deficient macrophages, the expression of NOD molecules was minimal at 12 hr, and the second rise in NOD mRNA seen in lipopolysaccharide-treated RAW264.7 cells was inhibited with anti-TNF-alpha, but not with anti-IL-1beta or anti-IL-6 antibody. These observations suggest that immediate response of NODs to endotoxins could result from NF-kappaB activation via TLR signaling, whereas the second rise in NOD mRNAs might have resulted from TNF-alpha production possibly through NF-kappaB, TLR, and/or NOD signalings.     

Dimethylnitrosamine-induced liver fibrosis and recovery in NOD/SCID mice

There is a need for a new liver fibrosis model of immunodeficient mice to study the effects of cell therapy on liver disease because there are not many animal models available to study the effects of cell therapy. In this study, we induced liver fibrosis using dimethylnitrosamine (DMN) in NOD/SCID mice to create an animal model for liver disease. DMN (5 mg/kg, i.p.) was injected intraperitoneally for three consecutive days per week for 6 or 8 weeks, and the mice were sacrificed at weeks 0, 4 and 8 after the last DMN injection. The 6-week DMN-treated group gradually recovered from serum biochemical changes, histopathological toxic effects and lesions in the liver at weeks 4 and 8 after the last DMN injection. However, the progression of liver fibrosis and toxic levels were maintained in the 8-week DMN-treated group at week 4 after the last DMN injection. The increases in iron and extracellular matrix (collagen) in the DMN-treated group were confirmed by Prussian blue (PB) and Masson's trichrome (MT) staining, respectively. Additionally, activation of hepatic stellate cells was observed by alpha smooth muscle actin (α-SMA) immunostaining and western blot. In conclusion, treatment of NOD/SCID mice with 5 mg/kg of DMN for 8 weeks can be used to induce an appropriate animal model of disease for liver fibrosis. This model may be useful for evaluation of the efficacy and safety of cell therapies such as human mesenchymal stem cell therapy.     

功能性低聚糖对断奶仔猪腹泻的防治及生产性能的影响

在仔猪饲粮中分别添加低聚果糖(FOS)、异麦芽低聚糖(GOS)和甘露寡糖(MOS),用48头35日龄杜×长断奶仔猪进行了为期28 d的饲养试验,观察了功能性低聚糖对断奶仔猪腹泻的防治作用及生产性能的影响.将试验猪随机分为4组,即在基础日粮中分别添加FOS 3 g/kg、GOS 2 g/kg和MOS 3 g/kg的3个处理组和1个对照组,观察了仔猪的生长发育情况,记录了各组耗料量和体重,采集血清和全血以及粪样进行了分析测试.结果表明,FOS组仔猪腹泻频率降低了66%;GOS组降低了25%;MOS组降低了54%;FOS、GOS和MOS组的血清SOD、GSH-Px活性均较对照组显著提高(P＜0.05或P＜0.01);3种低聚糖组仔猪的外周血T淋巴细胞数(CD3)、IgG水平均较对照组显著提高(P＜0.05或P＜0.01);3种低聚糖组仔猪的日增重和饲料报酬均有明显的提高.