柔嫩艾美耳球虫卵囊免疫后鸡盲肠扁桃体IL-2基因表达的动态变化

为检测和评价鸡白细胞介素2(ChIL-2)在抗球虫免疫过程中的作用,以RT-PCR技术从鸡盲肠扁桃体中克隆获得了长度为391 bp的ChIL-2.将实验鸡随机分为对照组和试验组,试验组于12日龄和22日龄时用E.tenella孢子化卵囊进行免疫,分别于设定时间每组取5只鸡的盲肠扁桃体,以鸡β-Actin为参照建立半定量RT-PCR方法检测ChIL-2的表达动态变化.结果表明,试验组在第一次免疫后的第几天和第二次免疫后的第七天ChIL-2的表达量明显升高,提示ChIL-2参与了鸡体的抗球虫感染过程,为进一步探讨ChIL-2的生物学活性及作为鸡球虫病基因工程疫苗佐剂的研究奠定基础.     

不同日龄雏鸡对柔嫩艾美球虫早熟株卵囊的易感性及免疫力

对１,７和２５日龄鸡分别感染１０００个早熟柔嫩艾美球虫孢子化卵囊、感染１２０ｈ后,每２４ｈ收集粪便１次,进行卵脏数,连续７ｄ,３种日龄鸡排卵囊总数分别为４６０．９,８０２．０和１４１７．７万个／只。感染后１４ｄ对７日龄鸡的免疫组及相对应的２个不免疫对照组每只鸡攻击１００个柔嫩艾美球虫亲本株孢子化卵囊。攻毒１４４ｈ后,每２４ｈ收集粪便１次,进行卵囊计数,连续５ｄ,各组鸡的囊总量分别为４１．４,５．８     

柔嫩艾美尔球虫和巨形艾美尔球虫混合感染致病性研究

材料和方法１．试验动物ＡＡ肉鸡，购自江苏省家禽研究所，出壳后运回实验室饲养在杀灭卵囊的笼具中至１５日龄，经数次粪检未见卵囊后供试验。２．球虫卵囊为本教研室分离鉴定的纯种柔嫩艾美尔球虫和巨形艾美尔球虫孢子化卵囊，４℃保存。３．试验分组挑选体况相近的１５日龄ＡＡ肉鸡５０羽，分成５组。第１组为不感染对照组；第２组为单种球虫感染组，每羽经口接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊１万个；第３、４和５组为混合感染组，每羽分别同时感染柔嫩艾美尔球虫和巨形艾美尔球虫孢子化卵囊：０．５＋５万、１＋１０万和２＋２０万个。４．…     

青蒿散抗鸡球虫药效研究

为探讨青蒿散对鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的防治效果,本试验选取90只健康黄羽肉鸡,分为6组,除空白对照组外,其余各组(感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组)试验鸡均经口感染6×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,各试验组在接种前一天开始用药至试验结束。记录各组试验鸡的眼观病变、组织病理学检查、相对增重率、盲肠病变记分、血便记分、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊值及抗球虫指数(ACI)指标,评价青蒿散不同给药浓度的抗球虫效果。结果显示,空白对照组、感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组的抗球虫指数分别为200.00、72.23、157.19、82.89、125.32和137.06,与感染对照组相比,药物对照组和青蒿散各剂量组的眼观病变、组织病理学检查均有所缓解,青蒿散能减轻病鸡盲肠的肿胀和出血等症状,且病鸡精神状态较感染对照组好;与感染对照组相比,各给药组的平均增重均有所升高,盲肠病变、卵囊值及血便情况减少。综上所述,青蒿散能缓解柔嫩艾美耳球虫侵染鸡盲肠所致的病理症状和组织病变,减少粪便中卵囊的排出数量,有一定的抗球虫效果,且给药浓度越高抗球虫效果越好,具有剂量依赖性。     

免疫增强剂促进鸡球细胞免疫的研究

艾维茵雏鸡分别于７日龄和１４日龄时以１０００、５０００个Ｅ．Ｔｅｎｅｌｌａ卵囊／只免疫２次,并于首免时注射卡介苗（ＢＣＧ）或黄芪多糖（ＡＰＳ）１次,２１日龄以５万和２５万卵囊攻击。试验鸡采血时间为７、１４、２１和２８日龄。细胞免疫测定指标为淋巴细胞转化水平、Ｅ－玫瑰花环形成率、血清溶菌酶含量。结果表明：ＢＣＧ和ＡＰＳ能显著提高球虫免疫鸡的淋巴细胞转化水平和Ｅ－玫瑰花环形成率：是鸡体单核－巨噬细胞系统的有效激活剂。     

雏鸡实验感染柔嫩艾美尔球虫的病理学研究

１１４只２３日龄无球虫罗斯小公鸡，分为三组，第１和第２每只鸡分别口服１．０８×１０＾５和５．４２×１０＾４个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊，第３组对照。结果，第１、２组在感染后第４天呈现血便，第５天发性死亡，其死亡率分别为１３．６％５０和５．４％。尸体剖检，盲肠明显肿大，肠壁出血；后期，盲肠萎缩，并出现干酪样肠 芯。病理组织学变化特点，为出血一坏死性或出血一卡地他性盲肠炎，以及出血一卡他性直肠炎。第８天     

不同感染剂量对毒害艾美耳球虫繁殖力的影响

为研究不同感染剂量对毒害艾美耳球虫繁殖力的影响,设4个感染剂量组:500、2 500、5 000和10 000个孢子化卵囊/鸡,每组5只23日龄雏鸡,经鸡嗉囊接种卵囊。感染后鸡粪便中出现卵囊起至第16天,每天用麦克马斯特氏法对各组粪便中卵囊进行计数;在感染后第16天扑杀鸡,取盲肠进行卵囊计数。结果显示,各试验组鸡均无发生死亡,但10 000个卵囊感染组的临床症状最为严重;感染后144 h粪便中查见卵囊,500、2 500和5 000个卵囊感染组均出现2个排卵囊峰值,10 000个卵囊感染组只出现1个峰值,在第7～13天产出的卵囊量均占总产量的94.74%以上;每鸡粪便中排出的卵囊数随感染剂量的增加而增多,但单个卵囊的产量随感染剂量的增加而减少;感染后第16天盲肠中卵囊数不到总卵囊量的1%。结论:在疫苗生产或增殖传代时,感染剂量可选择10 000个卵囊/鸡,在感染后第7～13天收集粪便中卵囊。     

青蒿散抗鸡球虫药效研究

为探讨青蒿散对鸡柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）的防治效果,本试验选取90只健康黄羽肉鸡,分为6组,除空白对照组外,其余各组（感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组）试验鸡均经口感染6×10⁴个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,各试验组在接种前一天开始用药至试验结束。记录各组试验鸡的眼观病变、组织病理学检查、相对增重率、盲肠病变记分、血便记分、每克粪便中的卵囊数（OPG）、卵囊值及抗球虫指数（ACI）指标,评价青蒿散不同给药浓度的抗球虫效果。结果显示,空白对照组、感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组的抗球虫指数分别为200.00、72.23、157.19、82.89、125.32和137.06,与感染对照组相比,药物对照组和青蒿散各剂量组的眼观病变、组织病理学检查均有所缓解,青蒿散能减轻病鸡盲肠的肿胀和出血等症状,且病鸡精神状态较感染对照组好;与感染对照组相比,各给药组的平均增重均有所升高,盲肠病变、卵囊值及血便情况减少。综上所述,青蒿散能缓解柔嫩艾美耳球虫侵染鸡盲肠所致的病理症状和组织病变,减少粪便中卵囊的排出数量,有一定的抗球虫效果,且给药浓度越高抗球虫效果越好,具有剂量依赖性。     

纯中草药散剂对鸡球虫病的疗效试验

250只海蓝灰雏鸡，饲养至15日龄，随机分为5组，分别为试验组（1％纯中药散剂组、0.5％纯中药散剂组、0.25％纯中药散剂组）、阳性对照组（只感染球虫卵囊不给药）及药物（三字球虫粉）对照组，每组50只。试验鸡全部经口感染鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，试验组及药物对照组连续给药5 d。在第8 d将鸡全部扑杀剖检。试验期间统计每组鸡的死亡率、增重率、粪便记分、病变记分、病变值、卵囊计数、卵囊比数、卵囊值、鸡抗球虫指数等指标。结果表明：0.5％～1％的纯中药散剂抗球虫指数在160～180之间，为中效抗球虫药。     

海南霉素对鸡球虫病的预防和治疗效果评价

为评价海南霉素对鸡球虫病的防治效果 ,作者用海南霉素和马杜拉霉素分别进行了抗鸡球虫病的预防和治疗试验。二个试验各设 7个组 ,每组 12羽 17日龄 AA肉鸡 ;在 18日龄 ,除不感染组外 ,每羽鸡接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 6万 ;药物组分别在感染前 1天和感染后第 4天 ,开始投服含药饲料 ;感染后第 8天结束试验 ,以抗球虫指数、病变记分、卵囊数、粪便记分等作为试验指标。结果在预防试验中 ,海南霉素的平均抗球虫指数为 182 ,病变记分减少 96 % ,粪便和盲肠卵囊数减少 98% ,粪便记分为 0 ;在治疗试验中 ,海南霉素的平均抗球虫指数为 14 6 ,病变记分减少 33% ,粪便和盲肠卵囊数减少 5 3%。海南霉素是一种高效抗鸡球虫病药物 ,其预防效果明显优于治疗效果     

雏鸡感染E．maxima球虫后淋巴组织与外用血T细胞变化的观察

本试验对１５日龄雏鸡感染３０００Ｅ．ｍａｘｉｍａ球虫卵囊后外周淋巴组织与血液中Ｔ细胞的变化进行了观察．试验结果证实，感染球虫鸡的脾，盲肠扁桃体以及外周血中Ｔ淋巴细胞数量均显著增加．外周血Ｔ细胞的消长曲线远表现出与球虫内生性发育的相关性．     

不同品种地方鸡感染柔嫩艾美耳球虫后组织总超氧化物歧化酶活性的比较

选择30日龄无球虫感染的鹿苑鸡与油鸡各60只、大骨鸡与固始鸡各50只,分别随机分成感染组和对照组,感染组每只鸡经嗉囊接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊1×105个.感染后第2、4、6、8、12天分别扑杀感染组和对照组,采集心脏、肝脏、脾脏、肾脏和盲肠,测定组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性.结果显示,与对照组相比,T-SOD的活性在4个品种感染鸡的脾脏、肝脏、心脏和盲肠组织中下降,而在肾脏组织中增高;具体为,在鹿苑鸡的脾脏和大骨鸡的肝脏与心脏先增高后下降,而在鹿苑鸡的肝脏与盲肠、油鸡的肾脏和固始鸡的肓肠中未发生显著变化.研究表明,球虫感染引起的T-SOD活性变化在不同品种鸡和同一品种鸡的不同组织中是不一致的;4个品种鸡组织中T-SOD活性变化与其对柔嫩艾美耳球虫的敏感性程度之间关系不十分明晰,但球虫感染引起油鸡的盲肠组织内T-SOD活性持续下降.     

抗菌肽Cecropin AD抗肉鸡柔嫩艾美耳球虫效果的研究

180只16日龄粤黄公鸡,随机分为6组（无球虫组NO、无敌球素组ND、敌球素组D、低剂量抗菌肽组CAD900、中剂量抗茵肽组CAD4500和高剂量抗菌肽组CAD9000）,每组3个重复,每重复（栏）10只。D组饲喂含敌球素（Deccox）的饲粮,而其它5组饲喂不合敌球素的基础饲粮;CAD900、CAD4500和CAD9000等3组分别经饮水喂给抗茵肽Cecropin AD（每日摄入剂量分别为900、4500和9000u／kg体重）。在各组饲喂对应试验饲粮1天后,分别对ND、D、CAD900、CAD4500和CAD9000等5组鸡接种柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）卵囊（5万／鸡）,并在接种球虫后的第5天观察各组血粪情况,第6天剖检观察盲肠病变情况,第7天计粪便卵囊数,第10天称体重。试验结果表明,Cecropin AD可降低接种柔嫩艾美耳球虫肉鸡的死亡率、盲肠病变值和粪便卵囊数,对肉鸡具有一定的保护作用。     

抗球虫药在鸡胚球虫感染中活性峰期测定方法的研究

用鸡胚感染柔嫩艾美耳球虫子孢子作为抗球虫药活性峰期测定的模型。每一鸡胚在接种５０００个子孢子后，分别于感染的当天、第２天、第３天和第４天注入测试药物，以不同注药时间对鸡胚卵囊所产生的抑制率的差异，判定药物的活性峰期。结果表明，氯甲吡啶酚和丁氧喹啉的活性峰期是球虫生活史的第１天，卵囊抑制率分别为１００％和９８％；莫能菌素、盐霉素、球Ｒ和加福的作用峰期是第２天，卵囊抑制率均为１００％；氨丙啉的峰期是第３天，卵囊抑制率为１００％；尼卡巴嗪的峰期是第４天，卵囊抑制率为１００％；速丹则在球虫生活史的整个无性阶段均呈现活性作用。加福＋氨丙体＋乙氧乙胺苯甲酯、球Ｒ＋氨丙啉＋乙氧乙胺苯甲酯、加福＋速丹、加福＋尼卡巴嗪及加福＋乙氧乙胺苯甲酯等合剂亦在球虫生活史的整个无性阶段发挥高峰作用，其印囊的抑制率均为１００％；尼卡巴嗪＋氨丙啉合剂则在球虫生活史的第２～４天发挥最大作用，卵囊抑制率为１００％。作者认为，本方法具有操作简单，结果可信及成本低廉的特点，可作为抗球虫药的筛选方法。     

鸡IL—15基因的分子克隆及其有关特性的研究

实验应用聚合酶链式反应技术从鸡脾淋巴细胞中克隆得到了白细胞介素-15基因，序列分析表明与已发表的鸡白细胞介素-15基因完全一致，核苷酸序列和推导的氨基酸序列与牛的最接近，同源性分别为46%和31%，与哺乳动物白细胞介素-15序列类似，有4个高度保守的半胱氨酸残基，同时本研究也用此方法对鸡脾脏、法氏囊、胸腺、哈德氏腺和盲肠扁桃体等淋巴器官的淋巴细胞中鸡白细胞介素-15mRNA的表达进行了研究，结果表明这些器官的淋巴细胞均表达mRNA。在实验还用有丝分裂原ConA对鸡脾淋巴细胞进行活化，观察活化的淋巴细胞表达白细胞介素-15mRNA的情况，结果发现白细胞介素-15mRNA在活化的脾淋巴细胞中表达量升高。     

柔嫩艾美球虫不同剂量感染对鸡的影响及抗攻击试验研究

挑选120羽体况相近的15日龄罗斯(Ross)公鸡,均分为5组,用柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)实验室保种天山株,分50、500、5000、50000个孢子化卵囊进行感染,另设不感染球虫组。观察用不同剂量感染,对鸡生长的影响程度;并于感染后96小时起,收集各组每天排出的粪便,进行虫卵计数;感染后13天,各组称重,并抽取6羽剖杀,进行盲肠病变记分。剩余鸡进行抗攻击试验,每羽攻击10万个孢子化卵囊,攻击后8天剖杀,结束试验。结果为:①感染50、500个卵囊的组,鸡平均增重与不感染组无差异;感染5000、50000个卵囊的组,增重则明显低于不感染组(P<0.05);各组盲肠病变和血便记分随感染量增加而增高。②各组在感染后5天之内的粪便中均未检出卵囊;感染50、500个卵囊组,在感染后6～7天的粪便中查出卵囊;感染5000、50000个卵囊组,则在5～6天的粪便中发现卵囊;50000个卵囊组,排卵高峰集中在感染后6～7天(占排出总量的62.23％),而另三个组的排卵高峰不集中;所有感染组在第13天的粪便中,卵囊量已降到很低(仅占总量的0.07～7.37％)。③各组的抗攻击能力随感染剂量增加而提高;各感染攻击组的平均增重均与不感染攻击组差异达极显著(P<0.01),感染5000个卵囊攻击组的增重最好;各组的盲肠卵囊计数、血便记分、盲肠病变记分均随原感染量的增加而降低。     

柔嫩艾美尔球虫郑州株对鸡致病性试验

通过用孢子化球虫卵囊感染豫州褐壳蛋鸡913系35日龄公雏,测定了柔嫩艾美尔球虫郑州株的致病力。结果表明:该球虫株毒力较强,每只鸡接种5000～50000个卵囊均引起严重的临床盲肠球虫病和典型病变,增重率和饲料转化率显著低于对照组,每只鸡接种3～5万个卵囊引起严重死亡(60％),接种5000～1万个卵囊引起部分死亡(20％)。建议在应用该球虫株进行鸡球虫病药物防治和免疫防治效果评价时,攻虫剂量以2万个卵囊为宜。     

细菌CpG DNA对鸡球虫弱毒苗Immucox的免疫增强效应

采用细菌CpG DNA作鸡球虫弱毒苗Immucox佐剂以探索其应用的可行性。将制备的细菌CpG DNA和球虫疫苗Immuncox单独或联合免疫接种肉鸡,第2次免疫后7d进行攻虫,口服接种柔嫩艾美儿球虫孢子化卵囊105个/只。感染后第7天,对试验动物进行称重并屠杀,分别观察盲肠病变积分、每克粪便卵囊排出数和体增重情况。结果:在相对增重方面,细菌CpG DNA+疫苗组高于感染非免疫组、疫苗组和CpG组,且与它们均差异显著(P<0.05);在卵囊排出总数和盲肠病变平均记分方面,细菌CpG DNA+疫苗组低于感染非免疫组、疫苗组和CpG组,且与之比较差异显著(P<0.05);在抗球虫综合指数方面,疫苗+细菌CpGDNA组达到172。结果表明用细菌CpG作鸡球虫弱毒苗Immucox的佐剂可提高该疫苗免疫保护效果。     

ETMIC-2基因表达产物对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护及病理学研究

采用大肠杆菌表达鸡艾美耳球虫微线蛋白(ETMIC—2)，对石歧杂小公雏在1、2周龄按分组以不同剂量分别肌注免疫，3周龄人工感染强毒柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，4周龄全部捕杀，进行增重、盲肠病变和免疫淋巴器官病理组织学观察。结果表明，全部试验组增重率均高于红对照组，其中两组超过白对照组；盲肠病变均低于红对照组；免疫淋巴器官发生不同程度的增生，尤其是胸腺，盲肠扁桃体及脾脏，淋巴滤泡增大，淋巴细胞明显增殖。此结果可以提示，适量的ETMIC—2基因表达产物免疫雏鸡后，再进行柔嫩艾美耳球虫的强毒攻击，能刺激机体的免疫淋巴组织器官产生免疫应答反应，对机体具有较好的保护力。     

球虫感染对羔羊生长的影响观察

思茅地区３、４月产晚春羔羊生长缓慢，死亡率亦高。经观察发现与寄生蠕虫有关外，与球虫感染亦有密切关系。经对两批３０和６０日龄检出卵囊阳性并呈生长趋缓的羔羊，进行抗球虫药治疗实验，用药后３０天，羔羊体重增加２．１￣２．５ｋｇ／只，而不用药对照组仅增０．５￣１．７ｋｇ／只。