中国部分棉区大丽轮枝菌营养体亲和性的测定

对于棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)的致病力分化，国内外学者进行了大量研究。自从20世纪60年代在美国发现棉花落叶型黄萎病以来，致病力强的落叶型菌系一直为广大植物保护工作者所关注［1～3］。Puhalla利用颜色突变体将世界范围的96个大丽轮枝菌菌株划分为16个营养体亲和群(vegetative compatibility groups，VCGs)，其中落叶型菌系为一单独的VCG，并初步证明用营养体亲和群进行种内归类有其遗传基础，可以反映菌株间的亲缘关系［1,2］。其后研究者又用硝酸还原酶缺陷型突变体(nit)技术测定大丽轮枝菌的营养体亲和群［4,5］。     

棉花枯萎病菌的营养体亲和性

利用氯酸钾毒性，诱变棉花枯萎病菌产生砂酸盐利用缺陷型突变体（ｎｉｔ）。在４８５个ｎｉｔ突变体中，生理表现型以ｎｉｔＡ为最多，ｎｉｔＢ和ｎｉｔＣ次之，ｎｉｔＤ极少。不同生理表现型之间的互补关系复杂，对１０７个菌株的突变体间进行营养体亲和性的结果表明，９５个菌株属于同一个营养体亲和群ＶＣＧ１，６个菌株属于ＶＣＧ２，另有２个菌株为单菌株亲和群。     

棉花红腐病菌营养体亲和性研究

采用nit突变体互补型配对技术,测定了分离自棉花铃期红腐病菌的营养体亲和群。结果表明,获得nit突变体互补型的125个菌株可分为66个营养体亲和群;不同分离地点间的菌株只有周庄祁东和老圩肖家群体中各有一个菌株,茅山东冯和老圩肖家群体中各有一个菌株属于同一个亲和群。菌株ZH18经抗药性诱变后,营养体亲和性可发生改变;菌株的单孢后代也可发生营养体亲和性改变。     

水稻恶苗病菌的遗传多样性研究

从浙江省、黑龙江省和上海市分别采集分离到的水稻恶苗病菌菌株分别为３４个、２个和１个，用生物学种（配合群）和营养体亲和群方法分析其遗传多样性。结果表明，有３５个菌株分属于Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ四个配合群，其中以Ｄ配合群为主，加有２个菌株不能归属于已知的配合群。在这３５个配合群的菌株中，２５个菌株是异核体自身亲和的，且可分为２０个营养体亲和群。其中１７个营养体亲和群分别只含１个菌株，有１个营养体亲和群含４个菌     

串珠镰刀菌的营养体亲和性

利用氯酸盐对串珠镰刀菌菌株进行诱变并获得ｎｉｔ突变体,所获得突变体中,以ｎｉｔＡ比例最高。采用ｎｉｔ突变体互补型配对技术,测定分离自水稻、玉米、棉花及大豆植物上串珠镰刀菌的营养体亲和群。结果显示,１５７个菌株分属于７１个营养体亲和群;不同群体间的菌株仅测出玉米田群体内的一个菌株和大豆田群体内的两个菌株属于同一个营养体亲和群,其它群体间的菌株则分属不同的营养技术亲和群。菌株ＳＡ１８经抗药性诱变、连续     

尖孢镰刀菌致病菌营养体亲和群研究

在分离、鉴定侵染黄瓜的尖孢镰刀菌的基础上，测定30个尖孢镰刀菌菌株（包括6个专化型）对黄瓜的致病性和营养体亲和性。研究结果表明，侵染我国黄瓜的尖孢镰刀菌至少有5个以上的营养体亲和群（VCGs)，除来自黑龙江的9909－1菌株与膜的黄瓜根茎腐专化型（Fusarium axysporum f.sp.radicis-cucmeinun,FOCS)菌株属同一亲和群外，其它菌株均与希腊的尖孢镰刀菌黄瓜专化型（F.o.f.sp.cucumerinum,FOC)和FORC不亲和，本文所测定的尖孢镰刀非致病菌株均与致闰 株不亲和，不同专化型的尖孢镰刀菌菌株归属于不同的营养体亲和群。研究结果初步显示了应用营养体亲和性区分菌的致病性及专化型的可能性。     

新疆棉花枯萎病菌群体变异监测研究

利用鉴别寄主法对40个新疆棉花枯萎病菌菌系进行了生理小种测定,同时采用nit硝酸还原酶缺陷型突变体技术对棉花枯萎病菌菌系进行了营养亲和性测定。结果表明,28个供试菌系高度侵染海岛棉、陆地棉及K102,属典型的7号生理小种,其余12个菌系在鉴别寄主上的反应与7号生理小种略有差异;供试菌系属于一个营养亲合群,且与7号生理小种的标准菌系相亲和,与3号、8号小种的标准菌系不相亲和;新疆棉花枯萎病菌依旧以7号生理小种为主。与以往的研究结果相比,新疆棉花枯萎病菌的群体组成基本没有发生变化。     

水稻恶苗病菌的遗传多样性研究

从浙江省、黑龙江省和上海市分别采集分离到的水稻恶苗病菌菌株分别为３４个、２个和１个,用生物学种（配合群）和营养体亲和群方法分析其遗传多样性．结果表明,有３５个菌株分属于Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ四个配合群,其中以Ｄ配合群为主,另有２个菌株不能归属于已知的配合群．在这３５个配合群的菌株中,２５个菌株是异核体自身亲和的,且可分为２０个营养体亲和群．其中１７个营养体亲和群分别只含１个菌株,有１个营养体亲和群含４个菌株,有２个营养体亲和群分别含２个菌株．Ｄ、Ｅ、Ｆ三个配合群的遗传多样性指数分别为０．７、０．８和１．０．由此可见水稻恶苗病菌在遗传上的多样性．     

新疆棉花黄萎病菌营养体亲和性的量化评估及其营养体亲和群体研究

从 16个采自新疆不同棉区的棉花黄萎病菌 (Verticilliumdahliae)菌株和 3个落叶型与非落叶型对照菌株上共获得 2 2 5个不能利用硝酸盐的营养体突变株 (nitmutants)。经不同氮源利用的鉴定 ,89 33%属于nitA ,9 33%属于nitB ,1 33%属于nitC ,其中nitC在以NaNO2 作为唯一氮源的MO2 培养基上被完全抑制致死。nitA配nitB的营养体亲和性测定结果 ,16个新疆菌株均与非落叶型对照菌株亲和———属于同一营养体亲和群 (VCG) ,未发现新疆有与落叶型对照菌株亲和的棉花黄萎病菌。以互补指数作为营养体亲和性量化评估指标 ,反映出不同突变类型间亲和性差异较大 ;同一VCG内不同菌株间互补指数也有差异 ,但无明显规律     

大丽轮枝菌Nit突变体产生及其营养亲和性测定

从DNA限制性酶切多态性(RFLPs)的A组和B组中选用了具代表性的7个大丽轮枝菌菌系作营养亲和性测定.病菌分别接种在含氯酸钾15～25g/l的基本培养基(MM)、梅干培养基(PLA)、玉米粉琼脂培养基(CMA)和马铃薯葡萄糖培养基(PDA)上,从中获得了41个不能还原利用硝酸钠作为唯一氮源正常生长的突变体(Nit).Nit突变体以PDA和PLA含氯酸钾20～25g/l的两种培养基上发生频率较高.根据对不同氮源利用生长情况,获得了Nit突变体5种生理表现型.以Nit1居多(50%～100%),其次为NitM(0～50%).表现型互补的Nit1与NitM突变体营养亲和性测定结果表明,测试菌系可划分为VCG01和VCG02两个营养亲和群,分别含RFLPsA组的4个菌系和B组的3个菌系.     

棉花黄萎病菌营养亲和性研究

为给进一步研究病原菌的变异规律提供理论依据,采用营养体亲和性方法,于2006年11月对从陕西三原棉花黄萎病圃中分离得到的26株代表菌系及陕西省植保所提供新疆菌株和泾阳菌株进行了研究。结果表明：经在KPS培养基上诱发培养,28个菌株共获得295个nit突变株,且不同菌株的突变率差异较大。经鉴定：nit1 235个,占总量的79.66%;nitM 59个,占总量的20.00%;nit3仅有1个。营养体亲和性配对测试表明：28个菌株可分为2个营养亲合群（VCGs）,26个代表菌株都与泾阳菌株亲和,同属于亲合群VCG1,新疆菌系属于亲和群VCG2。     

新疆棉花黄萎病菌病原种群监测研究

采用致病性测定、营养亲和群测定及PCR特异性扩增3种方法,对新疆棉区采集的35个棉花黄萎病菌代表性菌系进行致病型鉴定。结果表明,新疆棉花黄萎病菌存在强、中、弱3种不同的致病类型,其中以中等致病类型居多。利用营养亲和群方法将新疆棉花黄萎病菌分为2个亲和群,其中1个亲和群中的所有菌系均与标准落叶型菌系相亲和,另1个亲和群中的所有菌系均与标准非落叶型菌系相亲和。利用棉花黄萎病菌落叶型特异引物进行PCR特异性扩增,有3个菌系扩增出550bp的落叶型黄萎病菌特异性片段。用营养亲和群及PCR特异性扩增均进一步证实目前新疆存在落叶型黄萎病菌菌系。     

新疆棉花黄萎病菌致病性分化监测研究

对新疆棉区采集的35个棉花黄萎病菌代表性菌系进行了生物学特性研究、鉴别寄主法测定及营养亲和群研究.依据鉴别寄主法测定结果,新疆棉花黄萎病菌可分为强、中、弱三种致病型,其中以中等致病类型居多.营养亲和群测定将新疆棉花黄萎病菌分为2个亲合群,其中一个亲合群中的所有菌系均与标准落叶型菌系相亲和,另一亲和群中的所有菌系与标准非落叶型菌系相亲和,从而证实在新疆存在落叶型黄萎菌系.     

利用Nit突变体和RAPD标记研究玉米弯孢叶斑病菌的营养体亲和性

分别利用Nit突变体技术和RAPD标记,对来自河南省不同地区的10个新月弯孢菌株的营养体亲和性进行了研究。结果显示:利用Nit突变体技术将供试菌株分为3个VCGs;利用RAPD标记,以0.5为阈值将供试菌株分为3个遗传类型;来自同一个VCGs的菌株属于同一个遗传类型,表明Nit突变体技术可用于玉米弯孢叶斑病菌菌株间亲缘关系的研究。     

新疆棉花枯萎病菌营养亲和群的初步研究

从新疆各植棉区采集棉花枯萎病病株,经分离纯化获４９个单胞菌株。接种试验表明：４９个菌株均使棉花产生枯萎病症状。利用氯酸钾诱变棉花枯萎病菌,产生抗氯酸盐的硝酸盐营养突变株,４９个菌株共诱发获得３３６个ｎｉｔ突变株,将获得的ｎｉｔ突变株作营养亲和性配对反应,可将４９个菌株分为４个亲和群,其中４６个菌株属同一亲和群,它们均与７号小种的ｎｉｔ突变株相亲和,其余３个菌株分别属于其它亲和群。     

陕西棉花黄萎病菌致病力分化及其营养亲和性

为了揭示陕西棉花黄萎病菌遗传变异,对采自陕西关中棉区17个棉花黄萎病菌株以及西北农林科技大学植保学院棉病实验室保存的T-9菌株、VD-8菌株、泾阳菌株和安阳菌株进行培养特性、致病力和营养亲和性测定。结果表明,21个供试菌株存在强、中、弱的致病力分化,其中强致病力类型11个,占52.38%;中等致病力类型6个,占28.57%;弱致病力类型4个,占19.05%。营养亲和性测定表明,21个菌株可划分为3个营养亲和群(Vegetative compatibility groups,VCGs),其中T-9菌株与VD-8菌株属于营养亲和群Ⅱ(VCG2),安阳菌株属于营养亲和群Ⅲ(VCG3),其余18个菌株属于营养亲和群Ⅰ(VCG1)。根据Nit突变体互补测定,供试菌株的营养亲和群与其致病力强弱具有一定相关性。在测试的陕西关中棉区17个棉花黄萎病菌株中,未发现落叶型菌株。     

新疆西瓜枯萎病菌营养体亲和性的初步研究

选用１５个采自新疆不同地区的西瓜枯萎病菌株,在含ＫＣｌＯ３培养基上诱导出抗氯酸盐的不能利用硝酸盐营养体突变株（ｎｉｔｍｕｔａｎｔ）,在不同氮源培养基上划分出ｎｉｔ１,ｎｉｔ２,ｎｉｔ８,ｎｉｔＭ和ｎｉｔＸ５种突变类型,其中ｎｉｔ１出现频率最高。将各菌株的ｎｉｔ突变株和测试菌株的ｎｉｔＭ或ｎｉｔ８配对,结果１５个菌株分为６个不同的营养体亲和群（ＶＣＧｓ）,其中１号小种的菌株划为ＶＣＧ１亲和群,０号小种划为ＶＣＧ２,２株非致病菌株分别为ＶＣＧ３和ＶＣＧ４,２株只出现ｎｉｔＸ突变类型的菌株分别为ＶＣＧ５和ＶＣＧ６。表明营养体亲和群与生理小种存在一致关系,营养体亲和性可以作为西瓜枯萎病菌生理小种鉴定和病原菌种群遗传结构研究的有效手段之一。     

西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)营养体亲和群研究

从浙江各地、江苏南部和上海等地采集的西瓜枯萎病株和其他瓜类植株上,分离纯化尖孢镰孢霉(Fusarium oxysporum)菌种23个(每个菌种来自一个植株样本).接种试验表明:酉瓜植株上分离的19个菌种,有16个对长蜜、新红宝和圳宝等3个酉瓜品种表现为致病性,而其他菌种表现为非致病性.所有23个菌种均获得抗氯酸盐的硝酸盐营养突变株(nit mutant).根据来自同一菌种nit突变株的营养体亲和性与突变类型鉴定,选择3个西瓜致病菌的Nit M类型突变株(W 024～5,W 072～4和W 014～9)为营养体亲和性测试株.各菌种上获得的nit突变株分别与测试株作营养体亲和性配对反应,23个菌种可划分成8个营养体亲和群(VCG)和1个营养体自身非亲和类型.16个西瓜致病菌中,除一个为营养体自身非亲和类型外,其余均属同一亲和群(M1001),而与西瓜非致病菌不存在营养体亲和反应.由此显示:营养体亲和群与西瓜枯萎病菌存在相关性,而与地理分布无关.     

棉花黄萎病菌的遗传多样性

阐明了棉花黄萎病的病原菌为大丽轮枝菌及其分类依据。从致病力分化、营养体亲和性分析、DNA分子指纹图谱比对等3个方面,对棉花黄萎病菌遗传多样性的研究进展进行了较为全面的综述。并对棉花黄萎病致病型与DNA分子标记多态性之间不存在显著相关性的原因进行了讨论。