甜菜坏死黄脉病毒新疆分离物外壳蛋白基因的序列分析

用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ     

马铃薯Y病毒普通株系外壳蛋白基因的克隆与原核表达载体的构建

本研究报道马铃薯Ｙ病毒普通株系外壳蛋白基因ｃＤＮＡ克隆,全序列分析及其原核表达载体构建的结果。从感染ＰＶＹ的烟草叶片中提取病毒粒体,ＳＤＳ－酚法提取病毒核酸。以所提核酸为模板,用一对ＰＶＰＣＰ基因引物进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增了０．８０ｋｂ的特异性核苷酸片段。该片段大小五国外报道的ＰＶＹ ＣＰ基因一致,将ＰＤＲ产物插入到克隆载体ｐＧＥＭ７Ｚｆ（＋）中转化大肠杆菌ＤＨ５α。     

传染性支气管炎病毒S1纤突糖蛋白基因的克隆及部分序列分析

大纤突Ｓ糖蛋白是传染性支气管炎病毒重要的免疫相关性蛋白之一，参考已发表的ＩＢＶ－Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因ＤＮＡ序列，合成一对特异性引物，以ＩＢＶ－ＲＮＡ为模板，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，获得传染性支气管炎病毒上海分离株Ｓ２Ｔ２－Ｓ１纤突糖蛋白基因，长度１．６５ｋｂ，利用引物设计中的ＢａｍＨ和ＨｉｎｄⅢ位点将其克隆到载体ｐＳＩ（＋）中。对该基因进行限制性酶发分析，结果与已报道的相一致。     

新城疫北京强毒株融合糖蛋白（F）基因的克隆及序列分析

ＮＤＶ北京强毒株Ｆ４８Ｅ９经ＳＰＦ鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒ＮＡ后,用ＲＴ－ＰＣＲ扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与ｐＧＥＭ＾Ｒ－Ｔ载体相连接转化,经过ＡｍｐＩＰＴＧ－Ｘｇａｌ（ＡＩＸ）平板筛选,ＨｉｎｄⅢ酶切及ＰＣＲ鉴定,初步获得了含Ｆ基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长１７４４个核苷酸的ＮＤＶ Ｆ蛋白基因。     

传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及其重组鸡痘病毒转移载…

根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列设计并合成一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２ｃＤＮＡ的引物，以纯化的ＩＢＤＶ－Ｄ７８弱毒疫苗株基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出约１．５ｋｂ产物。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点，经酶切图谱分析等方法鉴定出重组ＶＰ２ｃＤＮＡ质粒（ｐＶＰ２）。将ＶＰ２基因正向插入ＦＰＶ启动子ＬＰ２３Ｐ２下游，连同痘苗病毒启动子Ｐ１１启动的ＬａｃＺ报告基因盒插入ＦＰＶ转移载体中     

甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及特异抗血清的制备

根据已报道的甘薯羽状斑驳病毒（ＳＰＦＭＶ）外壳蛋白（ＣＰ）基因的核苷酸序列合成引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ的方法获得ＣＰ基因后,再将其克隆到原核表达载体ｐＥＴ３０ａ（＋）中。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,经ＩＰＴＧ诱导,ＣＰ基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得了高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原,免疫家兔,制备了ＳＰＦＭＶ外壳蛋白的特异性抗血清。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和点免疫（Ｄｏｔｂｏ     

性连锁矮小鸡（dwdw）生长激素受体（cGHR）基因突变的精确定位

本研究根据已知正常鸡的ＧＨＲ第１０个外显子和３’ＵＴＲ区的ＤＮＡ序列，设计一对引物，分别对正常农大褐鸡和矮小型农大褐鸡进行了ＰＣＲ扩增。结果正常鸡扩增片段为２０２６ｂｐ，矮小鸡为２５５ｂｐ。将矮小鸡ＰＣＲ产物克隆在ｐＧＥＭ－Ｔ载体上进行测序，精确定位了农大褐矮小鸡ＧＨＲ基因缺失突变位点。     

马哈利樱桃PGIP基因克隆及全序列测定

以马哈利樱桃（Ｐｒｕｎｕｓ ｍａｈａｌｅｂＬ．）基因组ＤＮＡ为模板,用ＰＧＩＰ（多聚半乳糖醛酸酶抵制蛋白）基因保守序列为引物进行ＰＣＲ扩增,得到长度约为１．２ｋｂ的目的片段,将其克隆到ｐＵＣｍ－Ｔ载体上,进行序列测定,结果表明,目的片段全长１１９２ｂｐ,由２个外显子和１个内含子构成,外显子总长９９６ｂｐ,编码３３０个氨基酸,与杏的ＰＧＩＰ基因ｍＲＮＡ序列、编码的氨基酸序殓同源性分别达到９４．１％、     

核酸探针检测人工感染猪及死胎的猪繁殖与呼吸综合症病毒

利用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术扩增出猪繁殖与呼吸综合症病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２ＯＲＦ６及部分ＯＲＦ７５８６ｂｐ的ｃＤＮＡ。将ＰＣＲ产物连接进线状克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ后获阳性重组质粒。用ＥｃｏＲＩ及ＳｍａＩ双酶切阳性重组质粒ＤＮＡ,回收４６３ｂｐ的小片段并以此制备出地高辛标记的核酸探针。应用该探针对４头鼻内人工感染ＡＴＣＣＶＲ－２３３２的     

花生条纹病毒外壳蛋白基因cDNA的合成、克隆及全序列测定

自田间采集的花生病叶中提取花生条纺病毒（ＰＳｔＶ）总ＲＮＡ,人工合成引物Ｐ１、Ｐ２,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增合成ＰＳｔＶ－ｃｐ的ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上。经限制酶谱分析后进行全序列测定,结果表明：该布１０８４个核苷酸组成,包含了ＰＳｔＶ－ｃｐ ｃＤＮＡ完整的８６１ｂｐ编码序列（编码２８７个氮基酸）以及３＇端２２３ｂｐ非编码序列,与文献报道的４个ＰＳｔＶ－ｃｐ基因具有较高的保守性。