青岛百合包埋-玻璃化法超低温保存技术研究

以青岛百合茎尖为试材,研究了外植体的选择、预培养的蔗糖浓度、预培养时间、包埋预处理方法、PVS2处理时间对百合存活率的影响。结果表明:小鳞茎在4℃冷锻炼培养28d后,剥取2～3mm的茎尖为试验材料,在蔗糖浓度0.4mol/L的MS+100g/L海藻糖+1mg/LABA的培养基上,预培养3d,然后加0.4mol/L蔗糖和2mol/L甘油、3%褐藻酸钠进行包埋预处理,在0℃条件下用PVS2处理60min,投入液氮保存1h,38℃解冻2min、洗涤后转接至恢复培养基上暗培养7d,用TTC检测存活率最高可达到67.5%。     

番木瓜茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 研究了番木瓜( Carica papaya L. ) 茎尖玻璃化法超低温保存的一些影响因素。结果表明: 无菌试管苗在MS + BA 0.5 mg/L + NAA 0.1 mg/L + GA₃ 1.0 mg/L 的培养基上生长较好。番木瓜茎尖超低温保存较佳体系是: 3～5 cm的茎尖在含有5 %二甲基亚砜(DMSO) 培养基上预培养3 d , 解剖镜下剥取含1～2 个叶原基的茎尖(1.5～2.5 mm长) , 先在室温下于60 %的玻璃化溶液(PVS2) 中装载40～50 min , 再用PVS2于0 ℃下处理30 min , 换1 次PVS2 溶液后迅速投入液氮。保存24 h 后, 在40 ℃水浴中化冻, 用1.2 mol/L 的蔗糖培养液洗涤两次, 转入继代培养基上再培养, 成活率和再生率分别达53.7 %和52.6 %。再生植株生根后可移栽成活。     

香蕉茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 以香蕉(Musa spp. ) 为试材, 对其离体培养茎尖玻璃化法超低温保存影响因素进行研究。结果表明, 不定芽在MS + 3.0～5.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA的培养基上分化较好。香蕉茎尖超低温保存较佳体系是: 2.0～3.0 cm的茎尖在含0.4 mol/L蔗糖培养基上预培养2 d, 剥取带1～2个叶原基的茎尖(长1.0～1.5 mm) , 室温(25℃) 下装载液(MS + 2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖) 装载20～30 min, 然后用玻璃化溶液( PVS2 ) 于0℃下处理40 min, 换1次PVS2后迅速投入液氮。保存至少1 h后, 在40℃水浴中化冻90 s, 用1.2 mol/L蔗糖培养液洗涤2次, 每次10 min, 然后转入含0.3 mol /L蔗糖的MS培养基上,暗培养10～15 h后转移到含0.5 mg/L 62BA的MS培养基中, 暗培养1周后转移到正常光下, 3个香蕉品种(巴西蕉、广东香蕉2 号、广东粉蕉1 号) 的成活率分别为75.9%、40.0%和69.6% , 再生率分别为63.4%、35.0%和63.4%。再生植株生长和分化正常, 生根后可移栽成活。     

食用百合种质的玻璃化法超低温保存技术初探

以离体茎尖为试材 ,采用玻璃化法 ,对食用百合离体超低温保存技术进行了初步研究。结果表明 ,用2～ 3mm茎尖 ,在MS +0 .5mol·L-1蔗糖浓度的培养基上预培养 1～ 2d ,室温下植物玻璃化溶液 (PVS2 )处理 2 0min ,换入新鲜的PVS2 ,迅速投入液氮中 ,2d后取出 ,在 4 0℃水浴中解冻 2min ,再在 2 5℃水浴中解冻 10min ,用1.2mol·L-1蔗糖液体培养基洗涤 2 0min ,接种在 6 -BA 0 .5mg·L-1+NAA 0 .1mg·L-1+GA3 0 .3mg·L-1+蔗糖 30 g·L-1+琼脂 7g·L-1的MS培养基上 ,2 5℃弱光培养 1周后转为正常光下培养 ,2周后再生率达到 5 2 .6 %。     

玻璃化法超低温保存猕猴桃离体茎尖及其植株再生

 以中华猕猴桃矮型种质为离体培养材料, 建立试管无性系, 对其离体茎尖的玻璃化法超低温保存技术进行研究, 探讨猕猴桃种质长期保存的适宜途径。结果表明, 含1～2个叶原基(1.5～2.5 mm) 的茎尖, 在5%二甲基亚砜(DMSO) + 5%蔗糖+MS培养基上预培养4 d后, 于室温下用2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖预处理30 min, 再在0℃下用玻璃化液(PVS2 ) 脱水处理40 min并迅速投入液氮中, 保存24 h后接种至继代培养基上再培养, 成活率和再生率分别为56.7%和51.6%。再生植株生根后可移栽成活。     

玻璃化法超低温保存柑桔茎尖及植株再生

 采用玻璃化法对柑桔茎尖的离体超低温保存进行了研究。约10 mm 长的柑桔茎尖于含5 %二甲基亚砜(DMSO) 的培养基上预培养3 d , 切取2～2. 5 mm 长的茎尖, 室温下60 %玻璃化溶液2 (PVS2) 装载20～30 min , 然后用PVS2 于0 ℃处理50～60 min , 换入新鲜的PVS2 , 迅速投入液氮中, 24 h 后在40 ℃水浴中迅速化冻, 再用1. 2 mol/L 蔗糖培养基洗涤2次, 接种于含BA 1. 0 mg/L 的MT培养基上, 26 ℃暗培养1 周后转于正常光下培养。枳壳茎尖超低温保存后用氯化三苯基四氮唑(TTC) 法检测, 成活率为100 % , 培养再生率达到90 % ,再生后的苗能正常生根, 与对照没有形态上的变异, 移栽可成活。     

生姜玻璃化法超低温保存技术

以生姜的脱病毒试管苗在繁殖培养基上培养25d获得的丛生芽为试材,探讨生姜超低温玻璃化法保存的最优程序。结果表明:采用继代培养45d的丛生芽,切取2~3mm,于0.5mol/L蔗糖浓度的MS培养基内预培养2d,60%PVS2室温处理5min,100%PVS2 0℃下处理30min,迅速投入液氮,48h后,37~40℃水浴快速化冻2min,1.2mol/L蔗糖的MS培养液洗涤20min,在MS+0.5mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.3mg/L GA3+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基上恢复培养的成活率最高,为57.7%。     

“矮丰”扁桃休眠芽玻璃化超低温保存条件优化

以扁桃休眠芽为试材,采用玻璃化超低温保存的方法,研究了休眠芽大小、蔗糖预处理浓度/时间、装载处理时间、PVS2脱水处理时间对扁桃休眠芽超低温保存后的影响,以期为扁桃种质资源的保存提供参考依据。结果表明:从健康的扁桃植株上剥取0.6~1.5mm(含有1~2个叶原基)休眠芽茎尖,放入含MS的0.5mol·L~(-1)蔗糖预处理液中预培养1d后,室温下用装载液(含2mol·L~(-1)甘油和0.4mol·L~(-1)蔗糖)装载20min,0℃下用PVS2处理70min,加入少量新鲜的PVS2后迅速投入液氮罐,保存15d后取出,在40℃水浴锅中化冻2~3min,用1.2mol·L~(-1)蔗糖+MS的洗涤液卸载30min,无菌纸吸干洗涤液后转至恢复培养基中,在24℃条件下暗培养7d后进行正常光照培养,2周后成活率可达61.01%。     

马铃薯茎尖小滴玻璃化法超低温保存及其再生植株的遗传稳定性

以马铃薯试管苗为试材,对其茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究,并对再生植株进行了遗传稳定性检测。结果表明,马铃薯茎尖依次在含有0.3 mol · L-1和0.5 mol · L-1蔗糖的液体MS培养基中预培养各1 d后,在0 ℃下PVS2处理30 min,转到铝箔条上PVS2小滴上（约15 μL）,将粘有茎尖的铝箔条在液氮里蘸一下,然后直接装入盛满液氮的冷冻管中,投入液氮至少保持1 h。室温下用含有1.2 mol · L-1蔗糖的MS液体培养基解冻并洗涤30 min后,接种到MS + 0.5 mg · L-1 Zeatin + 0.1 mg · L-1 NAA＋1.0 mg · L-1 GA3恢复培养基上,存活率和再生率最高达79.91%和62.52%。通过SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性没有发生改变。     

桃离体茎尖的超低温保存及植株再生

 以简单玻璃化法为基本方法, 研究了影响桃离体茎尖超低温保存后存活率的因子———低温驯化时间、蔗糖预培养时间、玻璃化液处理时间及化冻后植株再生条件; 建立了较为适宜的超低温保存技术程序———选择继代培养30 d的试管材料, 5℃低温驯化3～4周, 在含017 mol/L蔗糖的固体培养基预培养2 d, 再经玻璃化液PVS3处理100 min后浸入液氮, 化冻后茎尖存活率可达60%以上。     

大蒜离体快繁及脱毒

利用0.2—0.9mm的茎尖离体培养获得了‘紫皮’和‘白皮’大蒜的无病毒苗。无病毒苗移植大田可100％存活。茎尖培养以补加 2mg/l BA和0.6mg/l NAA的MS培养基为最佳。‘紫皮’蒜的繁殖效率可达600/200天,‘白皮’蒜为524/200天,都较常规繁殖高。大蒜茎尖再生植株经形态比较观察和染色体压片检查未发现异常现象,证明其遗传性稳定。     

银条茎尖玻璃化法超低温保存及其植株再生

 为长期稳定保存银条种质, 建立了玻璃化法超低温保存其茎尖的技术体系。选择继代4次的 银条无菌壮苗, 5 ℃低温驯化14 d; 剥取5 mm的茎尖, 在含有0.5 mol·L ^{- 1}蔗糖的MS (无Ca^{2 +} ) 液体培养基预培养1 d; 25 ℃条件下经改良MS + 2PVS₂装载20 min; 在- 20 ℃, 95%乙醇浴中以PVS₂脱水处理4h; 更换新鲜的PVS₃后投入液氮, 保存24 h后取出冷冻管在40 ℃水浴中化冻1 min; 以含有1.2 mol·L ^{- 1}蔗糖的改良MS (无Ca^{2 +} ) 溶液洗涤2 次, 每次10 min; 冻存后的茎尖相对存活率超过70%。将冻存后的茎尖转接到再生培养基上, 暗培养20 d后转入正常光照条件下培养, 存活率达63.7%; 继续培养得到正常分化和生长的再生植株, 生根后可移栽成活。     

通过玻璃化超低温处理脱除草莓轻型黄边病毒(SMYEV)研究

以草莓品种明宝为材料,取茎尖做初代培养,继代扩繁5次后,取2mm左右的茎尖,利用玻璃化超低温技术对SMYEV进行脱除,并利用结合内标的多重RT-PCR技术对再生植株进行病毒检测。结果表明,在病毒脱除过程中,预培养蔗糖浓度为0.5mol/L,处理3d;装载处理为25℃,60min;玻璃化处理为0℃,120min;液氮处理60min后,进行40℃水浴2min,草莓茎尖的存活率为76%,而草莓轻型黄边病毒的脱除率为95%。只有通过液氮处理才可以脱除该病毒,液氮处理前的玻璃化处理脱毒率为0。利用超低温脱毒法可以简便有效地脱除SMYEV。