我国肉牛胚胎“工厂化生产”技术获得成功

2000年10月11日科技日报讯：我国科学家利用体外受精再长期冷冻后的牛胚胎,规模化植入母牛腹,经“借腹怀胎”降生试管牛的高新技术,日前通过专家技术鉴定。这标志着我国肉牛胚胎“工厂化生产”技术获得成功。 　　这项牛胚胎生物技术由河北农业大学与中国农业大学等单位联合完成,是国家“九五”科技攻关课题“肉牛规模化养殖及产业化技术研究与开发”中的子课题。这个项目今年年初在河北邯郸市两家养牛厂相继诞生了5头玻璃化冷冻“试管牛”,这也是我国首例玻璃化冷冻试管牛犊。在实验中,专家们还在西门塔尔、夏洛来纯种牛上引种,突破性地实现了牛冻胚洲际引种的成功。据技术人员介绍,专家们从屠宰后的牛卵巢上抽取了卵母细胞后,经培养成熟,与在实验室获取的公牛冷冻精液进行体外受精,并继续培养6d到7d,使其发育成桑椹胚或囊胚,进行玻璃化冷冻后保存在－196℃液氮中。11个月后,再将胚胎解冻,专家用非手术方法移入母牛子宫内,经200多天的妊娠期后,成功产下了玻璃化冷冻试管牛。 　　玻璃化冷冻试管牛是把牛体外受精和牛胚胎玻璃化冷冻保存两项技术结合起来的新技术。专家说,这是我国首次研制成功牛胚胎玻璃化冷冻液和简便易行的快速冷冻法,冷冻时间由过去的几小时缩短为几分钟,不再需要价格昂贵的胚胎冷冻仪,生产现场就能操作,使牛胚胎移植不受时间、地域的限制,便于推广应用。这对于我国牛胚胎移植技术的商品化、产业化以及推广牛胚胎克隆等高新技术有十分重要的意义。     

胚胎分割研究进展

胚胎分割是研究细胞分化、早期胚胎发育、胚胎细胞全能性的有力手段。采用不同的分割方法可对不同时期的胚胎进行分割。有多方面因素影响分割胚胎的成活率。将胚胎分割技术与细胞核移植、临床诊断等相结合,将具有更为广阔的应用前景。文章介绍了可对胚胎进行分割的几种方法,综述了国内外对影响分割胚胎移植后的妊娠和产仔因素的一些研究进展。     

相关链接--胚胎移植概述

跨入21世纪,我国在生物技术领域掀起了一个又一个浪潮,在克隆牛、克隆羊相继问世的同时,不断有牛、羊胚胎移植成功的喜讯传遍大江南北.人们为之欢呼:家畜繁殖生产的第二次技术革命已经到来.于是,从中央到地方申请"胚胎移植技术应用研究与推广"的课题报告,像雪片似地飞向各级科技管理部门.在此情势下,笔者认为很有必要将胚胎移植这一并不新奇但在我国确有其利用价值的技术作一介绍.     

牛胚胎生产和移植实验方案

该方案通过超排和体外受精两种方式来生产牛胚胎,并采用非手术方法将胚胎植入本地黄牛、西杂牛子宫内,完成妊娠过程.同时结合胚胎保存、胚胎分割等技术手段,扩大资源和胚胎利用的时空局限.所有这些实施程序同样可以用于其他品种牛的胚胎生产和移植.其实施步骤包括以下内容. 1.超数排卵生产胚胎 1.1.供体、受体的选择 选择身体健康,无生殖道疾患,发情正常的纯血优良母牛作为供体.所选母牛最好为4-6岁的经产母牛,有三代系谱记录.体重在500kg以上.选择后的供体母牛最好转群饲养. 选择经产的、无生殖道疾患和无习惯性难产的本地黄牛和西杂母牛作为受体牛,选择的体型应适度.受体牛群同样要进行检疫,防疫和驱除体内外寄生虫,并进行生殖器官检查. 供体、受体牛均应有一个情期的发情记录,如果尚无,最好将供、受体母牛转群、作一个自然情期观察和记录.     

鱼卵和胚胎冷冻保存研究进展

<正> 一、前言自Polge等(1949)成功地用甘油冷冻保存动物精子以来,低温生物学的原理很快被应用于动物卵子和胚胎的冷冻保存。目前,冷冻配子和胚胎已在医学和畜牧业中得到广泛应用。低温生物学在畜牧业生产和种群管理中的成功应用极大地鼓舞了鱼类生理学者们,并使其对鱼类卵子和胚胎的低温保存进行实验研究。由于鱼类卵子体积很大,具有二层     

玻璃化液对泥鳅胚胎成活率的影响

玻璃化液作为一种比较理想的低温保护剂 ,对鼠胚胎和牛胚胎保存已获成功 ,但对适合于鱼类胚胎保存的至今未看到报道。为了研究玻璃化液对鱼类胚胎的低温保存效果 ,使鱼类胚胎低温冷冻保存获得成功 ,作者开展了利用不同的低温保护剂 ,采用不同浓度的组合 ,经超低温冷冻筛选后找出了能形成玻璃化的最低浓度 ,并利用这些能形成玻璃化的抗冻剂对泥鳅胚胎进行了毒性实验 (1998) ,但还没有找出对胚胎保存效果好、毒性小、“高渗”损伤小的最佳玻璃化液。本文进一步利用这些玻璃化液对在不同条件下 ,对不同发育时期的泥鳅胚胎延长玻璃化对胚胎的作…     

淡水养殖鱼类胚胎低温保存的初步研究

以低温冰箱和液氮作为冷源,对四种淡水养殖鱼类的胚胎进行低温保存试验。采用10%二甲亚砜(DMSO)为抗冻剂,鲤鱼胚胎冷冻至-5℃、-10℃和-20℃,复温后的最高成活率分别为96%、90%和31%;团头鲂胚胎冷冻至-10℃、-15℃和-20℃,复温后的最高成活率分别为43%、20%和12.5%;青鱼胚胎冷冻至-5℃、-10℃和-11℃,复温后的最高成活率分别为100%、40%和0%;白鲢胚眙冷冻至-7℃,复温后的最高成活率为19.6%。造成胚胎损伤、致死的主要原因是胚胎在降温过程中细胞严重失水。     

哺乳动物 胚胎冷冻研究进展

哺乳动物胚胎冷冻研究始于50年代。该方法的研究进展速度很快。部分家畜的冷冻胚胎已走向商品化阶段。本文着重阐述了胚胎冷冻的方法及其研究进展。     

牛体外授精技术的研究与展望

本文阐述了体外受精技术在牛胚胎工程和育种研究中的意义,介绍了牛体外受精技术的研究历史和目前的研究进展,并就牛的体外受精技术当前研究存在的问题作了评述,对其前景做了展望。     

牛体外授精技术的研究与展望

本文阐述了体外受精技术在牛胚胎工程和育种研究中的意义，介绍了牛体外受精技术的研究历史和目前的研究进展，并就牛的体外受精技术当前研究存在的问题作了评述，对其前景做了展望。     

家畜繁殖试验室存在的问题及改进措施

家畜繁殖试验室,就是在牛、羊胚胎移植等繁殖工作中,蒸馏水的制取,冲胚液、保存液的配制,各种激素的稀释,配伍、保存,胚胎的制备等工作所设立的工作场所。试验室规范与否直接影响繁殖工作效果。对试验存在的问题进行分析,并提出改进措施。     

海洋贝类配子及胚胎的低温冷冻保存

综述了海产贝类配子及胚胎的低温冷冻保存技术的发展现状,对目前的文献进行了汇总和分析,讨论了冷冻保存的降温程序、抗冻剂配方以及评价保存效果的指标等方面的问题,并对目前在海产贝类配子和胚胎的低温冷冻研究方面存在的问题和解决的途径进行了探讨。     

超低温冷冻对中华绒螯蟹胚胎形态结构的影响

为了解超低温冷冻对胚胎形态结构的影响,以中华绒螯蟹为研究对象,运用石蜡切片、扫描电镜和透射电镜观察细胞分裂期、原肠期和原溞状幼体期胚胎,分别用玻璃化液处理和经超低温冷冻后外部形态和内部结构的变化。结果发现:(1)显微观察表明,细胞分裂期胚胎在玻璃化液中用二步平衡法处理后吸水膨胀明显,三步平衡后胚胎形态无明显变化,超低温冷冻后,卵黄物质从细胞中溢出,细胞破损严重;原肠期胚胎在玻璃化液中用二步平衡法处理后,外部形态与鲜胚无明显差异,经过冷冻后,所有胚胎内部变成粉红色,胚体由原来的透明变成不透明状,细胞膜边缘模糊似绒毛状;(2)扫描电镜观察,玻璃化液处理后的所有原肠期胚胎表面褶皱呈沟壑状,形成一层网状结构;透射电镜观察,处理后胚胎细胞内出现白色团块,细胞边缘变得粗糙有突起,细胞内冰腔清晰可见,空泡形成,80%以上线粒体解体,细胞破裂明显;(3)组织切片观察,原肠期胚胎细胞外面的膜脱落破损,胚层内有大小不一的冰腔,细胞内出现明显的空泡。原溞状幼体期胚胎经过玻璃化液处理后,外部形态与鲜胚间无明显区别,但经过超低温冷冻后,95%以上胚胎组织呈弥散状,部分卵黄物质碎裂成颗粒状,胚胎的细胞膜脱落,胚层内出现大量冰腔和空泡,90%胚胎表面皱缩凹陷,但仍有10%的胚胎表面保持光滑完整,表明原溞状幼体期胚胎是适合进行冷冻保存的时期。     

利用显微注射技术冷冻保存牙鲆胚胎

在鱼类胚胎的冷冻保存中,需要抗冻剂有效地渗入胚胎,才能对胚胎起到保护作用.本研究采用显微注射技术将抗冻剂直接注射到牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎内,以实现牙鲆胚胎的玻璃化低温冷冻保存.研究中,首先对抗冻剂种类进行了选择,将抗冻剂的毒性由大到小依次排列为:乙二醇(EG)、甘油(Gly)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2丙二醇(PG)、PM21(PG:MeOH=2:1);对胚胎发育时期和注射剂量进行了筛选.实验结果显示,注射600pL(1 pL=10-6mL)抗冻剂PM21后,牙鲆的心跳期胚胎成活率显著高于尾芽期胚胎(P＜0.05),成活率为(64.04 2.05)%;对卵黄囊、卵膜与卵黄膜间隙作为注射部位进行了选择,发现采用卵黄囊内注射的胚胎成活率高于"五步平衡法",并显著高于通过卵黄膜间隙注射(P＜0.05),其成活率为(44.24±7.88)%.结果表明,注射600pL 35%PM21至牙鲆心跳期胚胎卵黄囊内,平衡10min,然后进行玻璃化冷冻保存,取得了68.2y.4%透明胚胎,能够对牙鲆胚胎提供很好的保护.说明显微注射方法可以成功地将抗冻剂注射入牙鲆胚胎,并在牙鲆胚胎的冷冻及胚胎的完整性方面发挥有效的保护作用.     

奶牛胚胎移植试验初报

2001年6～12月毫州市家畜胚胎移植中心首次与加拿大IND公司北京爱德育生科技发展公司成功开展了四批“万公斤级”高产奶牛胚胎移植工作,该移植是在农村饲养条件下的西杂黄牛和荷斯坦杂交牛作为受体,胚胎是由IND公司直接提供的冻胚。共选受体牛120头,第一批移植47头;第二批移植31头,第三批移植10头,第四批移植5头,共移植96头次,直接受孕38头,已产下6头(3公3母),移植率为77.5%,受胎率为39.5%。结果表明:利用西杂黄牛开展高产奶牛胚胎移植是可行的,只是由于技术操作成熟度不高,受胎率较低,有待进一步探索提高。     

鱼类冷冻胚胎结构变异的研究

本文以草鱼胚胎为材料，研究了鱼类胚胎冷冻保存前后的结构变异。观察结果表明，草鱼胚胎冷冻到－19696℃后，外部形态和内部结构都有不同程度的损伤。其主要表现在：1）冷冻后的受精卵，卵表收缩开裂，表面的膜褶结构被破坏，卵膜上出现大量的絮状物；2）卵黄颗粒破裂，成为均     

漠斑牙鲆胚胎细胞系的建立与鉴定

漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)是中国近年新开发的重要海水养殖鱼类,本研究以漠斑牙鲆囊胚期胚胎为材料,探索了鱼类胚胎细胞分离和培养的条件,建立了漠斑牙鲆胚胎细胞培养技术。建立的漠斑牙鲆胚胎细胞系(SFEC)至今已经培养了240多天,传至80多代。SFEC的完全培养基采用添加抗生素、胎牛血清(FBS)、花鲈血清(SPS)、成纤维生长因子(bFGF)的DMEM。SFEC形态小而呈圆形、多边形,在培养基中生长迅速。本实验检测了温度、胎牛血清浓度、成纤维生长因子对SFEC生长的影响。在24~30℃之间SFEC生长良好,但当温度低于18℃时细胞生长速度明显减慢。在含15?S的培养基中,SFEC生长速度明显比在含7.5?S的培养基中快,在培养基中添加bFGF可以使细胞生长速度显著提高。SFEC的二倍体核型为2n=6st 42t。将GFP报告基因通过脂质体介导的方法转入SFEC中并成功地获得了表达,转化率为20%。     

科技短波

日本开发出牛受精卵分割技术 日本东北农业试验场日前开发出牛受精卵分割技术,可有效地提高双胞胎牛的出生率。 该技术首先通过体外受精制造出受精卵,利用8天的时间将其培育成胚胎,然后在覆盖受精卵的透明膜上打开直径为30um,的小孔,受精卵产生细胞分裂,一半从小孔中冒出,形如葫芦,用细针在摵珨最细的部分扎一下,冒出的部分就会分离出来,形成受精卵,最后将受精卵分别置入两个代理母牛的子宫里,就可生出孪生牛。 以前制造孪生牛的方法是将受精卵培育成胚胎之后,用刀子将受精卵切成两半,由于包裹受精卵的透明膜富有弹性,受精卵容易受伤。新技术的特点是不损伤卵细胞,提高了孪生牛出生率。 日本东北农业试验场利用该技术已经将分成两半的8个受精卵移植到代理母牛的体内,其中一头母牛已经成功产下小牛。该试验场的研究员盐谷康先生说,如果在受精卵的培育条件方面再下些工夫,制造孪生牛的成功率可提高到40%～50%。     

几种鲤科鱼类精子和胚胎冷冻损伤的扫描电镜研究

精子低温保存中引起的损伤主要由于胞内冰形成,细胞体积增大,造成精子头部及尾部的质膜破裂致死。而胚胎的冷冻损伤则由于出现严重的胞内失水,引起胚胎表皮细胞皱缩,细胞间相互分离,使胚胎致死。     

超低温冷冻对中华绒螯蟹胚胎线粒体DNA的影响

为了解超低温冷冻对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)胚胎线粒体DNA影响,选取细胞分裂期胚胎为研究对象,研究了4种玻璃化液处理和超低温冷冻对胚胎线粒体DNA的影响。结果表明:经过玻璃化液处理和冷冻后,胚胎线粒体上的Cytb基因能被稳定扩增,PCR电泳产物大小约1 600 bp,产物经回收后进行双向测序、比对和校正,获得10条Cytb基因全序列,长度为1 135 bp,其中有5个核苷酸变异位点,1 135 bp的Cytb基因序列一共编码378个氨基酸残基,从ATG第一位起始密码子开始到1 140位终止。经过玻璃化液处理和冷冻后,胚胎线粒体上的COI基因也能被稳定扩增,PCR电泳产物大小约1 600 bp,产物经回收后进行双向测序、比对和校正,获得10条COI基因全序列,长度为1 534 bp,其中有6个核苷酸变异位点,1 534 bp的COI基因序列一共编码511个氨基酸残基,从ATG第一位密码子开始到1 533位终止。经过玻璃化液处理和冷冻后,中华绒螯蟹胚胎线粒体上Cytb和COI基因共有11个位点发生了变异,但不同的玻璃化液处理和冷冻对碱基变异没有影响,发生的碱基变异中存在4种类型,即G→A、A→G、C→T、T→C,变异间只有转换发生,没有颠换发生,这些变异均未引起相应氨基酸残基的变异。