疫苗失效导致发生猪瘟的因素及防疫措施

一、免疫猪发生猪瘟的原因1.疫苗方面的问题①疫苗本身质量差近年来在实际工作中发现厂家生产的猪瘟冻干苗有失真空现象。基层兽医人员临用前对疫苗不进行物理检查,导致免疫失败。②疫苗保存的方法不得当猪瘟冻干苗要求低温保存,而且在不同温度条件下保存的日期也不同。按规定,保存期从制造日期起,于-15℃冷冻条件下保存,有效期为1年;0～8℃冷暗干燥处保存的有效期为6个月;8～25℃阴暗干燥处保存,有效期为10日。兽医人员在购买或取用疫苗时,不带保温箱     

猪细小病毒病灭活疫苗稳定性研究报告

为了研究猪细小病毒病灭活疫苗(L株,悬浮培养)的稳定性(保存期),将3批猪细小病毒病灭活疫苗实验室制品(批号为201401、201402和201403)于2～8℃保存3、6、9、12、18、24个月后分别进行性状、无菌性和效力等检验。结果显示:3批实验室制品在2～8℃保存24个月,性状、无菌性和效力等检验结果均符合标准。根据试验结果并确保猪细小病毒病灭活疫苗的质量,暂定产品2～8℃保存有效期为18个月。     

H9亚型禽流感病毒毒种保存期试验

将H9亚型禽流感病毒TJ株检验和基础种子批冻干毒存放于-70℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9、12、18和24个月,随机抽样,分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验;将检验和生产种子批湿毒于-20℃保存,并于保存当日和保存后3、6、9和12个月,随机抽样分别进行病毒含量测定、血凝价测定、毒力测定和无菌检验。结果表明,检验种子和基础种子冻干毒保存24个月病毒含量和血凝价与保存当日无显著差异,无细菌、霉菌污染;检验用冻干强毒对42和56日龄鸡的毒力与保存当日无明显变化,无细菌、霉菌污染。检验用强毒与生产种子批湿毒保存9个月,毒力和病毒含量、血凝价无明显变化,无细菌、霉菌污染。冻干毒种更长时间的保存期正在进行中,所以将H9亚型禽流感病毒TJ株冻干毒于-70℃保存的有效期暂定为21个月;将湿毒于-20℃保存的有效期定为6个月。     

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗的安全性和体液免疫研究

采用转瓶生产技术,在MARC-145细胞中增殖PRRSV克隆20株,经过条件的优化选择,得到TCID50≥10^-7．55／mL的高滴度PRRSV溶液,为生产疫苗打下基础,所生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全无致病性,能刺激猪产生特异性抗体应答,接种后第14天可检测出特异性中和抗体。疫苗内的PRRSV滴度在冻干前后变化不大,冻干疫苗在4～8℃保存有效期为6个月,-20℃保存有效期达18个月,表明生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全且能刺激猪产生体液免疫应答,可用于PRRS的预防接种。     

越橘离体茎尖包埋玻璃化超低温保存

为越橘种质资源保存提供新途径，试验研究了越橘组培苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存方法。结果显示适宜的条件包括：剥取顶芽茎尖（长1.0～1.5 mm），在（25±2）℃黑暗条件下预培养1 d；使用移液枪吸取茎尖与藻酸盐溶液，滴入氯化钙溶液中形成包埋球（直径4 mm）；包埋球在加载液中加载1.5 h（室温）；包埋球转入PVS2溶液处理4 h(0℃)；将装有包埋球的冷冻管投入液氮保存1 h；取出液氮中的冷冻管迅速转入37℃水浴锅中解冻1～2 min，在室温下取出包埋球，在卸载液中卸载20 min；卸载的茎尖在再生培养基上（25±2）℃黑暗培养5 d；之后在正常光照条件下培养30 d。所测试的8个越橘基因型平均再生率为57.9%，最高再生率为78.5%，最低为41.7%。     

密花石斛花粉的保存方法研究

研究了密花石斛花粉不同保存方法下的花粉寿命,并对密花石斛花粉的超低温保存技术程序进行了研究。 结果表明:1)密花石斛花粉采用室温（(27±2)℃）、冷藏（4℃）、冷冻（-20℃）保存,花粉寿命分别为5、23、17 d,超低温保存(-196℃)的花粉120 d后仍可检测到花粉萌发,且萌发率与新鲜花粉相同,超低温保存方法至少可以保存密花石斛花粉4个月;2)密花石斛花粉超低温保存的程序为新鲜花粉（含水量43.26%）直接投入液氮（LN）保存,需用时采用室温、自来水或水浴化冻即可。      

猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗保存期试验

猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗现行规定在2～8℃贮存期为7个月.为了探究该疫苗能否在2～8℃贮存1年仍符合〈中华人民共和国兽用生物制品质量标准〉中猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗质量标准（以下简称质量标准）,本试验将3批猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗在2～8℃贮存至8、10、12、14个月,然后按质量标准抽样做物理性状检验、无菌检验、安全检验和效力检验.结果表明,猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗在2～8℃保存1年后,各项检测均符合质量标准.     

猪细小病毒病弱毒疫苗的保存期试验

将2批猪细小病毒病弱毒疫苗分别在2—8℃保存11个月、12个月、13个月,-20℃保存22个月、24个月、26个月,进行物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全试验及免疫效力试验,探讨不同保存条件和保存期对疫苗的影响。结果表明:物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验均符合《中国兽药典》的要求。安全试验每批次疫苗接种乳鼠全部健活;以10头份/头的剂量接种PPV HI抗体阴性猪,接种后定期采集血样和鼻肛分泌物进行病毒分离,结果均为阴性。疫苗在2—8℃保存至13个月,-20℃保存至26个月TCID_(50)均≥10~(6.25)笛/头份;接种PPV HI抗体阴性豚鼠抗体全部转为阳性;疫苗免疫PPV HI抗体阴性猪,免疫后1个月、7个月分别用PPV强毒攻击获得100%保护。     

不同低温保存对雪花梨花粉萌发的影响

针对梨树生产与科研中各品种间存在花期不遇和授粉树配置不合理,从而影响梨树授粉的问题,研究了不同低温保存方法对雪花梨花粉萌发率和萌发速度的影响。结果表明：2002～2004年雪花梨花粉萌发率3 a平均为84.1%,与胎黄梨（91.0%）无显著差异,但显著〉鸭梨（66.3%）和金坠梨（44.7%）。雪花梨花粉在室温（20～22℃）条件下保存1个月,萌发率迅速降为5%,保存5个月后萌发率降为0;在冰箱（2～3℃）条件下只能保存5个月,保存1 a后萌发率（11.2%）降低明显;在冰柜（-18℃）条件下保存3 a仍能保持较高的萌发率（56.3%）,冰柜保存是雪花梨花粉较适宜的保存方法。雪花梨花粉在23～25℃发芽培养基中4 h即全部萌发,低温保存1 a后萌发时间较新鲜花粉增加1倍,生产上授粉时应先对贮存花粉进行加湿处理,使花粉充分吸水,以保证花粉迅速发芽,确保授粉效果。     

禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究Ⅱ报——疫苗的免疫持续期及保存期试验

采用新城疫病毒(NDV)Lasota株感染鸡胚尿囊液毒和多杀性巴氏杆菌(禽A型)接种固体培养基收获茵液,经灭活后制备成5批油乳剂灭活苗(批号2001-1～2001-5),用于免疫2月龄以上的青年鸡,试验分一次免疫组和二次免疫组,分别在免疫后1个月、3个月、6个月、9个月进行ND和FC强毒攻击保护试验,结果表明,相同剂量分两次免疫,近期效果差异不明显.一次免疫组,6个月攻毒ND的保护为100%、FC保护为80%;8个月攻毒ND的保护为95%、FC保护为52.5%.二次免疫组.6个月攻毒ND的保护为100%,HI抗体1:64以上;FC攻毒保护87.5%;8个月攻毒ND的保护为100%,FC保护为77.5%.疫苗保存期试验证明,4～8℃冰箱保存可达18个月,10～20℃保存的有效期为4个月.     

甘露醇抑制马铃薯脱毒瓶苗生长效果试验

以MS全脱水培养基粉剂制备基本培养基,以庄薯3号脱毒试管苗为供试材料,研究甘露醇在马铃薯脱毒瓶苗生长及保存中的抑制作用。结果表明,在每升培养基中加入30g甘露醇,能有效抑制瓶苗生长,常温下可以保存2个月,如果给予较低温度（10℃＋1）,则可以保存3-4个月。     

朱顶红花粉萌发和花粉贮藏性研究

采用正交设计筛选适宜朱顶红花粉萌发的最佳培养基,并通过萌发试验了解其贮藏性。研究表明,适宜朱顶红花粉萌发的培养条件为20℃、5％蔗糖、0．01％硼酸、0．05％钙和5％PEG-4000,培养时间为2h。室温贮藏朱顶红花粉1个月之后完全丧失萌发能力,冷藏（4℃）和冷冻（-18℃）有利于保存花粉生活力：短期贮藏（1个月、2个月和3个月）,冷藏和冷冻处理的效果由于品种的不同而有变化,长期贮藏（1年）则几乎都表现为冷冻比冷藏具有更高的花粉萌发率。     

朱顶红花粉萌发和花粉贮藏性研究

采用正交设计筛选适宜朱顶红花粉萌发的最佳培养基,并通过萌发试验了解其贮藏性。研究表明,适宜朱顶红花粉萌发的培养条件为20℃、5％蔗糖、0．01％硼酸、0．05％钙和5％PEG-4000,培养时间为2h。室温贮藏朱顶红花粉1个月之后完全丧失萌发能力,冷藏（4℃）和冷冻（-18℃）有利于保存花粉生活力：短期贮藏（1个月、2个月和3个月）,冷藏和冷冻处理的效果由于品种的不同而有变化,长期贮藏（1年）则几乎都表现为冷冻比冷藏具有更高的花粉萌发率。     

黑鲷幼鱼高脂配合饲料适宜保存条件研究

通过测定不同条件下饲料酸价的变化,探讨黑鲷幼鱼高脂配合饲料的适宜保存条件。结果表明,与对照组相比,室温保存365d、高温高湿条件下保存7d和14d均能显著提高饲料的酸价（P〈0．05）,而低温保存（-20℃）365d饲料的样品酸价值则变化不大（P〉0．05）。不同条件下饲料酸价的高低顺序表现为：T-8（50℃,水分16％,14d）〉T-7（50℃,水分16％,7d）〉T-1（常温,365d）〉T-6（50℃,水分12％,14d）〉T-5（50℃,水分12％,7d）〉T-4（50℃,水分8％,14d）〉T-3（50℃,水分8％,7d）〉T-2（-20℃,365d）〉CK（新鲜配制）;试验说明,黑鲷幼鱼高脂配合饲料适宜在-20℃条件下保存,且365d内不会发生酸败现象。     

鸡新城疫V4克隆株疫苗研究与应用Ⅱ.疫苗安全性免疫效力、免疫持续期及保存期试验

用克隆株NDV4HB92接种鸡胚,制备5批活疫苗,经无菌检验合格后用于试验。安全试验表明:用10倍使用量含毒胚液,接种7日龄雏鸡,无不良反应;疫苗最小免疫量试验表明,用104EID500.1mL免疫18日龄易感雏鸡,14d后攻毒保护力达9/10以上;免疫持续期试验证明,用106EID50免疫18日龄易感雏鸡,有效抗体(HI≥1∶16)可持续4个月以上;保存期试验证明:湿苗-15℃保存有效期为18个月,4～8℃保存为4个月。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅱ、稳症性、保存条件及保存期的测定

本文报道了鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的稳定性、保存条件和保存期。稳定性的测定是采用了不同保存条件、不同保存期（月）的二联苗，用抗鸭瘟高免血清或抗鸭病毒性肝炎高免血清中和掉二联苗中的相应弱毒后，测定剩下的鸭病毒性肝炎弱毒和鸭瘟弱毒（满度）分别对9日龄鸡压的半数致死置（LD60）和对鸡胚成纤维细胞（CEF）的半数感染量（TCID60）来判定二联苗的稳定性．保存期的测定是采用不同保存条件（℃）不同保存期（月）的二联苗免疫成年鸭，10天后采血测定抗鸭肝炎病毒中和抗体效价及抵抗1万倍最小致死量鸭瘟强毒攻击的能力．试验结果表明：非冻干二联苗子－15—25℃条件下可保存18个月，0℃冻冻结态下可保存1年，4－10℃可保存半年，15－25℃保存10天。疫苗冻干后，－15—25℃条件下可保存20个月，0℃保存问个月，4－10℃保存12个月，15－25℃保存20天．     

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征三联灭活疫苗保存期试验

将生产的3批鸡新城疫(ND)、传染性支气管炎(IB)、减蛋综合征(EDS76)三联灭活疫苗,分别置于室温和2～8℃保存,间隔不同时间后,分别取出做物理性状、安全性、免疫效力试验。结果经保存后,物理性状良好,符合现行《中国兽药典》标准。室温保存9个月或2～8℃保存15个月,免疫效力未发生明显变化,证明该疫苗具有良好的保护效力。在临床应用中,受外界条件等不利因素的影响,将保存期暂定为室温保存6个月或2～8℃保存12个月。     

保存温度对黄颡鱼肝组织总RNA质量的影响

以黄颡鱼肝脏为试验材料,用TRIzol法提取肝脏组织总RNA,将试验样品置于不同温度下保存,在1%琼脂糖凝胶中电泳检测RNA的质量。结果显示:在低温没有密封储存的情况下,RNA保存较长时间,完整性好;-70℃下RNA可以保存8个月,-20℃下RNA可以保存4个月;在其他温度条件下,若密封保存,4℃下可保存2周,10℃下可保存4 d以上,20℃下保存3 d时条带清晰,保存4 d时条带模糊,30℃下保存2.5 d时条带变得模糊,到3 d时全部降解,40℃下保存1 d条带清晰,保存2 d条带变得模糊,保存2.5 d时完全降解。此外应注意的是,RNA如果暴露于空气中,5 h内所有试验组的RNA大多数降解。     

耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响.结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显.但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果.另外,25℃、2～8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求.因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2～8℃下长期保存.     

鸽新城疫油乳剂灭活疫苗的研制

鸽新城疫(PND)是一种高度接触性、败血性传染病,对养鸽业有巨大威胁.为了控制本病的发生,利用从当地鸽群分离的鸽新城疫病毒,研制了鸽新城疫油乳剂灭活疫苗,并对该疫苗的安全性、免疫效力、免疫期及保存期等进行了研究.结果表明:该疫苗使用安全,无不良反应;具有良好的免疫原性,免疫21 d攻毒保护率达100%;免疫期可持续6个月,免疫7个月攻毒保护率达80%以上;在2～8 ℃条件下保存有效期可达12个月,保存15个月进行效力检验,攻毒保护率仍达80%以上.