水芋体细胞胚胎发生及植株再生休系的建立

以水芋幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基,建立了水芋体细胞胚胎发生体系.对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观察证明了水芋体细胞胚胎的发育过程.结果表明:水芋叶片胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜培养基为:LS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率为98.5%;体胚发育及植株再生最适宜的培养基为:LS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.5mg/L+IAA 1.0 mg/L,体胚萌发率为96%,萌发的体胚在发育培养基上继续培养25 d后全部发育成完整植株.     

‘过山香’香蕉多芽体的诱导及其体细胞胚的发生

 以我国重要香蕉种质‘过山香’ (AAB) 为材料, 研究了香蕉多芽体诱导、多芽体茎尖薄切片即分生组织性的表层结构物( scalp) 愈伤组织诱导和体细胞胚发生的合适条件。结果表明, 该品种单个不定芽茎尖在P4培养基(含BAP 100 μmol·L ^{- 1}和IAA 1 μmol·L ^{- 1} ) 中继代5个周期后可诱导获得类似花椰菜结构的多芽体。从30 μmol· m ^{- 2} ·s^{- 1}光强, 光/暗周期(16 h /8 h) 培养的多芽体所获得的scalp在添加2,4-D 5μmol·L ^{- 1}和Zeatin 1 μmol·L ^{- 1}的愈伤组织诱导培养基中黑暗培养, 45 d后愈伤组织诱导率可达97.6%。诱导20 d后黄色分生小球体类结节状愈伤组织开始发生, 90～120 d后在分生小球体局部可获得白色或浅黄色松散的胚性愈伤组织(诱导率为17.5% ) 。从胚性愈伤组织诱导的体细胞胚在成熟培养基上培养60 d后体胚萌发率和植株转化率分别为14.5%和11.1%。     

香榧体细胞胚发生的研究

 以香榧胚为外植体进行体细胞胚的诱导, 在SH + 6-BA 0.1 mg/ L + 2,4-D 0.5 mg/ L 的培养基上愈伤组织诱导率可达到69.8 %; 愈伤组织经过数次继代后转移至1/ 2 SH + 6-BA 0.1 mg/ L + NAA 0.1mg/ L 培养基上可诱导体细胞胚的形成, 诱导率可达70.3 % , 体细胞胚在合适的培养基上可继续生长和增殖。这是国内外首次通过组织培养成功获得香榧体细胞胚的报道。     

华山松胚性愈伤组织的诱导研究

以华山松的成熟胚为试材,采用正交实验设计方法,研究培养基类型及所需激素浓度对胚性愈伤组织诱导的影响,寻求其形成条件。结果表明:培养基成分为LM+2,4-D 2 mg/L+BA 2 mg/L+CH 1000 mg/L+肌醇1000 mg/L+Gln 500 mg/L可诱导华山松成熟胚愈伤组织的形成,其中类似胚性愈伤组织的诱导率达60%。培养30 d后将愈伤组织转接至与诱导培养基组分相同的新鲜培养基,可观察到愈伤组织生长良好并发生体积上的扩增,但没发生分化。     

“爱神玫瑰”葡萄杂交胚胚性愈伤组织诱导与保持的研究

以无核葡萄“爱神玫瑰”的杂交胚为试材,通过试验筛选出了胚性愈伤诱导基本培养基:NN69;胚性愈伤组织诱导培养基:NN69 +TDZ 0.05 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L;胚性愈伤组织长期保持与增殖培养基:NN69 +6-BA 0.2 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L和NN69+2,4-D 0.2 mg/L+TDZ 0.1 mg/L为“爱神玫瑰”较适宜的培养基.     

番木瓜均质胚性细胞悬浮系的建立和高效植株再生

【目的】提高番木瓜体细胞胚发生的同步性及其植株再生率,为番木瓜大量快繁、细胞工程和分子育种技术研发提供技术基础。【方法】以紫晖110～120 d果实的未成熟合子胚为外植体,经胚性愈伤组织诱导、液体悬浮培养和体细胞胚发生过程,建立均质胚性细胞悬浮系和高效植株再生技术体系,重点比较了不同质量浓度2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)对胚性愈伤组织诱导、不同质量浓度6-苄基氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine,6-BA)+萘乙酸(1-naphthlcetic acid,NAA)组合和活性炭(activated carbon,AC)对子叶期体细胞胚萌发与生根的影响。【结果】4 mg·L^-12,4-D可诱导62.86%未成熟合子胚形成胚性愈伤组织。经5个继代周期的筛选培养,可建立由单细胞和小细胞团组成的均质胚性细胞悬浮系。采用液体培养方式能诱导大量球形胚的形成,被转移至含5 g·L^-1AC的半固定培养基成熟培养30 d后,可获得大量子叶期体细胞胚。在含0.4 mg·L^-1<...     

侧柏胚性愈伤组织的诱导研究

以侧柏未成熟合子胚、胚根为试材,研究了基本培养基、不同外植体、植物激素、合子胚发育阶段等因素对侧柏愈伤组织诱导的影响.结果表明:未成熟合子胚、胚根在适宜的培养基上都能诱导出愈伤组织,DCR+2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+0.5 g/L谷氨酰胺是未成熟合子胚诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率高达96.67％.DCR+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 g/L谷氨酰胺是胚根诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率高达93.33％.最佳采样时期为7月3日前后.     

结缕草愈伤组织诱导及植株再生

 以日本结缕草种子为外植体，2份材料在附加2,4-D 2.0 mg/L水平的Ms培养基上愈伤组织诱导率较高；在含不同水平2,4-D的培养基中添加6-BA对非胚性愈伤组织转变成胚性愈伤组织起重要作用，其中2,4-D 2.0 mg/L配合6-BA 0.1mg/L的Ms培养基诱导出的胚性愈伤组织比例较高；胚性愈伤组织在2,4-D为0.1mg/L的分化培养基上分化率和生根率最高，为46.8％~ 48.1％。     

白象牙杧幼胚愈伤组织诱导研究初报

以白象牙杧幼胚为外植体,研究不同植物生长调节剂配比培养基对其胚性愈伤组织的诱导。结果表明,2,4-D对白象牙杧幼胚愈伤组织诱导作用显著。诱导愈伤组织的最佳培养基为B5+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,出愈率达到75.00%。     

红姜花胚性细胞悬浮体系的建立和原生质体培养

以红姜花(Hedychium coccineum)未成熟花丝和花药为试材,研究了红姜花胚性愈伤组织的诱导、细胞悬浮体系的建立以及原生质体的培养。结果表明:在MS+4mg/L 2,4-D+4mg/L NAA+1mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上经过120d培养诱导出了愈伤组织,愈伤组织在增殖培养基上经过继代筛选获得浅黄色、松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织通过3个月的悬浮培养,得到均质稳定的胚性细胞悬浮系。以胚性悬浮细胞(ECS)为起始材料分离原生质体,酶解试验表明,在原生质体分离过程中,用于原生质体分离的酶液需要保持一定的渗透压以保护原生质体不被破坏。当甘露醇的浓度为0.14mol/L时,原生质体产量最高,达到2.25×105个/mL PCV ECS(packed cell volume,PCV)。在看护培养系统中,原生质体经过7d的培养,细胞第一次分裂,经过14d培养,细胞分裂频率达到12.3%,28d时,细胞团形成频率达到4.2%。所形成的细胞团具有典型的胚性细胞特征。     

Effect of sucrose concentrations on somatic embryogenesis in carnation (Dianthus caryophyllus L.)

The effect of sucrose concentration on callus induction followed by differentiation of embryogenic callus derived from petal explants of four carnation cultivars (Nelson, Sagres, Spirit and Impulse) was investigated. Embryogenic calli were produced on Murashige and Skoog [Murashige, T., Skoog, F.A., 1962. Revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant 154, 73–479] basal medium (MS) culture medium containing six concentrations of sucrose (3, 6, 9, 12, 15 and 18%, w/v) all supplemented with 9 μM 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and 0.8 μM 6-benzyladenine (BA). Maximum frequency of embryogenic callus was obtained from the media containing 9 and 12% sucrose. Somatic embryos were induced on a hormone-free MS media containing the seven concentrations of sucrose. Development of somatic embryos was enhanced by increasing sucrose concentration from 1.5 to 12%, while it was reduced in higher concentrations of 15 and 18%. However, normal embryos were not developed in the media containing 1.5 and 3% sucrose. Ninety-five percent of somatic embryos were regenerated to form the entire plantlets when they transferred onto the half-strength hormone-free MS culture medium containing 3% sucrose. Plantlets were also continued to grow normally under greenhouse condition.     

狗枣猕猴桃叶片离体培养的器官、体细胞胚形成与植株再生(英文)

以狗枣猕猴桃试管苗的叶片为外植体,接种于含3%蔗糖和0.2%Gelrite的BW培养基上,外加2,4-D(0,0.1,1和10μmol/L)与玉米素(0,1和10μmol/L)的12种激素组合,置于25℃,光周期为16/8h,光照强度为4000lx的条件下培养。在含1或10μmol/L2,4-D与1或10μmol/L玉米素组合的BW培养基上,产生了体细胞胚,并分化出小植株。随着玉米素浓度的增加,每个外植体上的胚再生频率和体细胞胚的数量也随之增加。同时以叶片为外植体产生的狗枣猕猴桃试管苗的愈伤组织表层产生了不定芽,并抽长成枝。发枝率随着玉米素浓度的增加而增加,并受高浓度的2,4-D所抑制。枝芽转接到含1μmol/LNAA的BW培养基上生根,长成小植株。     

Picloram,ABA和TDZ对香蕉体细胞胚胎发生的影响

 研究Picloram、ABA和TDZ对贡蕉未成熟花序来源的胚性细胞悬浮系体细胞胚胎发生的影响。结果表明, 8.28 μmol/L Picloram替代2, 4-D可获得15.56%的胚性愈伤组织诱导率; 在体细胞胚诱导初期加入ABA则抑制体细胞胚的发生, 并造成其萌发时严重愈伤化; TDZ可有效地改善体胚萌发率和植株转换率, 其中0.2 μmol/L TDZ处理的体胚萌发率和植株转换率分别从对照的17.28%、16.49%提高到72.77%和67.05%。     

红姜花体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以红姜花（Hedychium coccineum）的花丝和花药为外植体,通过体细胞胚胎发生途径建立了植株再生体系。结果表明：外植体在MS + 4 mg ? L-1 2,4-D + 4 mg ? L-1 NAA + 1 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1 琼脂的培养基上经过120 d诱导出愈伤组织,愈伤组织在MS + 1 mg ? L-1 2,4-D + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0.25 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的培养基上经过继代筛选,获得浅黄色松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + B5维生素+ 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1 脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.02 mg ? L-1 NAA + 0.02 mg ? L-1 TDZ + 0.5 ~ 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 45 g ? L-1蔗糖的培养基中通过3个月的悬浮培养,可得到均质稳定的胚性细胞悬浮系（ECS）。胚性悬浮细胞在SH无机盐 + B5维生素 + 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0 ~ 0.20 mg ? L-1 TDZ + 45 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚诱导培养基中培养10 d,可见到白色半透明体胚发生,20 d后体胚发育成熟。当TDZ浓度为0.15 mg ? L-1时,体胚诱导率高达4 500个 ? mL-1 PCV ECS（PCV：细胞密实体积）。在SH无机盐 + B5维生素 + 0.20 mg ? L-1 IAA + 0.25 ~ 1.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚萌发培养基上,体胚萌发率高达100%。将萌发的体胚转移到1/2MS + 1 g ? L-1活性炭成苗培养基中,进一步发育成正常的再生植株,植株室外栽培成活率达90%。     

扁桃杧(Mangifera persiciformis)体胚发生及再生体系建立

以扁桃杧(Mangifera persiciformis Wu&Ming)未成熟珠心组织为外植体,建立体胚发生及再生体系,同时对幼苗进行茎尖染色体计数和胚根组织形态学观察。结果表明,在改良的B5基本培养基+2,4-D1.0mg·L-1+Gln400mg·L-1+6%蔗糖上培养4～5周后可诱导胚性愈伤组织分化。继代培养基与成熟培养基交替培养能有效降低胚性愈伤组织的褐化并保持旺盛的分化能力。培养3～4个月后,大部分体胚均能发育成熟,26.03%的体胚畸形。体胚在改良B5培养基+Gln400mg·L-1+4%蔗糖上的萌发率较低,仅为8.39%。次级体胚以直接体胚发生方式于萌发体胚的下胚轴产生。幼苗的生根不理想,生长极为缓慢;其茎尖染色体数目为2n=2x=40;胚根形态学上端内部维管组织解体,愈伤化,结构松散。     

荔枝组织培养中胚状体产生的类型及分析

以荔枝２０—３０ｄ龄幼胚为外植体诱导产生愈伤组织，并筛选建立了幼胚胚性愈伤组织系。胚性愈伤组织在附加２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上诱导胚状体分化，在附加ＮＡＡ和ＩＢＡ的培养基中促进胚状体的发育和成熟。在体外胚胎发生过程中，形成大量各种类型的胚状体，其中出现不少异常胚；胚性愈伤组织继代培养过程中存在大量的染色体变异，这可能是产生异常胚的重要原因之一。     

Somatic embryogenesis in cell suspension cultures of Prunus persica (L.)

Cell suspension cultures were derived from adventitious somatic embryos induced on cotyledons of rescued peach embryos. Embryogénie calli were induced and established on modified MS medium supplemented with 2,4-D, BAP, KN and inositol. Development of embryos during suspension cultures was identified by growth pattern and by histological and cytological examination, using acetocarmine stain. More embryogenic calli were produced using 2,4-D (5 (µM) than NAA. A gradual reduction of 2,4-D increased the recovery of globular embryos. Heart-stage embryos were developed on high-nitrogen salt medium, with added Ca(N03)2 (1000 mg I"1) and 6% sucrose. Somatic embryos turned green and sometimes red under white light. Embryo viability was highest when subculturing every 14 days. Viability of cells and differentiating embryos was assessed, microscopically, with Alexander’s stain. Viable embryos reacted pink to red while non- viable embryos reacted green to blue. Embryogenic cell suspension cultures were maintained for over ten months by regular subculturing after two weeks on modified MS medium with low 2,4-D, BAP and KN.     

Somatic embryogenesis in Cymbopogon pendulus and evaluation of clonal fidelity of regenerants using ISSR marker

An efficient plant propagation system through somatic embryogenesis was established in Cymbopogon pendulus, an aromatic grass followed by analysis of genetic status of regenerants using ISSR markers. Optimum embryogenic callus induction was observed on MS basal medium supplemented with 13.57 μM 2,4-dicholorophenoxyacetic acid (2,4-D) with 8.88 μM N⁶-benzyladenine (BA). Subsequent culturing of embryogenic calli on MS medium containing 4.52 μM 2,4-D and 8.88–13.32 μM BA gave maximum number of somatic embryos. Addition of coconut water (CW) promoted induction, growth and differentiation of callus and somatic embryogenesis. Further development of embryos into plantlets was achieved on MS medium supplemented with lower concentration of biotin and calcium pantothenate (CaP) along with BA (4.44–13.32 μM) and kinetin (2.32–4.65 μM). The root meristems were established on half strength MS medium containing 2% sucrose and 2.46–9.84 μM Indole3-butyric acid (IBA) and successfully established in soil with 77.8% survival rate in field condition. Thirteen randomly selected regenerated clones were screened using six ISSR primers. Nine clones produced similar monomorphic amplification profiles while remaining clones showed minor variation with absence of certain parental bands and appearance of unique band. Majority of the regenerants maintained genetic fidelity with the generation of few variants as evidenced from similarity matrix estimates using Nei Li's coefficient of similarity data.     

中国樱桃‘对樱桃’不定根离体再生植株的研究

 采用中国樱桃‘对樱桃’( Prunus pseudocerasus) 无菌生根苗的不定根作为外植体, 成功诱导了胚性愈伤组织, 实现了通过分化不定芽和诱导初生体细胞胚两种方式再生植株。根切段在MS + NAA1.0 mg/L + BA 0.05 mg/L + IBA 0.05 mg/L 培养基诱导获得胚性愈伤组织, 诱导频率达54.2 % , 该愈伤组织在MS + NAA 1.0 mg/L + BA 0.5 mg/L 培养基上不定芽分化率为100 % , 不定芽在MS + BA 0.5 mg/L + IBA 0.1mg/L 培养基上生长发育良好, 转入MS + NAA 0.02 mg/L + IBA 0.02 mg/L 生根培养基生根率达100 %; 整体不定根系统在MS 附加2 ,4-D 1.0～3.0 mg/L 和BA 0.5 mg/L 的培养基上同时诱导初生体细胞胚发生和单极不定芽发生, 每外植体上平均体细胞胚数5～25 个, 不定芽3～22 个。体细胞胚转到MS + BA 0.5 mg/L +IBA 0.1 mg/L 培养基上发育为完整植株, 植株再生率100 %。