黄麻和红麻脱胶细菌的分离和初步鉴定

自167个菌样中分离出312株脱胶细菌。它们均具芽孢,其中孢囊明显膨大的93株,孢囊不明显膨大的219株。通过进一步筛选,获得44个能在48小时内完成脱胶的优良菌株,它们都是孢囊膨大菌。选取孢囊膨大菌与不膨大菌各7株做了初鉴。结果表明,有6株似多粘芽孢杆菌(Bacilluspolymyxa)、4株似枯草芽孢杆菌(Bacillus subtitis)、3株似短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和1株似球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)。文中对脱胶菌的获得与样品来源和富集培养基的选择关系作了讨论。     

黄麻和红麻微生物脱胶研究 Ⅰ多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）T1163的分离、鉴定和脱胶试验

从红麻田土壤中分离到一株多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)T1163，这株菌可在36小时内使红麻脱胶，96小时内基本脱掉黄麻胶质。系统研究了这株菌的适宜培养条件，并采用湿润发酵方式进行了红麻接种T1163菌的小型脱胶试验。结果表明，在有杂菌干扰下，脱胶红麻干皮只需3天时间，比传统的天然脱胶法缩短7天以上，并大大减少纤维损失，使精洗率提高5．7％。文中还就T1163的分类、培养及发酵条件和湿润加菌脱胶法的经济、生态效益等问题进行了讨论。     

黄麻和红麻微生物脱胶研究 Ⅰ多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）T1163的分离、鉴定和脱胶试验

从红麻田土壤中分离到一株多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)T1163,这株菌可在36小时内使红麻脱胶,96小时内基本脱掉黄麻胶质。系统研究了这株菌的适宜培养条件,并采用湿润发酵方式进行了红麻接种T1163菌的小型脱胶试验。结果表明,在有杂菌干扰下,脱胶红麻干皮只需3天时间,比传统的天然脱胶法缩短7天以上,并大大减少纤维损失,使精洗率提高5.7％。文中还就T1163的分类、培养及发酵条件和湿润加菌脱胶法的经济、生态效益等问题进行了讨论。     

亚麻与黄麻沤麻池的细菌生物多样性分析

本研究以亚麻与黄麻两用沤麻池中的沤麻液为研究对象,取样后富集培养分离得到9株脱胶细菌,通过传统微生物学研究手段与分子生物学系统发育分析相结合的方法进行生物多样性研究。研究结果表明:9种细菌分别聚类为产碱菌属(Alcaligenes sp.)4株,芽孢杆菌属(Bacillus sp.)4株,寡氧单胞菌属(Stenotrophomonas sp.)1株。系统发育分析发现9种细菌从亲缘关系上较为接近单胞菌属Stenotrophomonas sp.,假单胞菌属Pseudomonas sp.和芽孢杆菌属Bacillus sp.。这三类菌属也是目前已知细菌中较为常见的脱胶菌属。说明该9种细菌与脱胶菌属关系较近,具有进一步研究的可能。     

水稻纹枯病菌拮抗芽孢杆菌的筛选及鉴定

为充分发掘利用水稻田已有的有益微生物资源,获得水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)的拮抗芽孢杆菌菌株,从四川农业大学水稻试验田中采集根际土样,采用稀释平板法在LB培养基上分离得到96株芽孢杆菌菌株。采用平板对峙法,将水稻纹枯病菌标准菌株R.solani AG1 IA与待测芽孢杆菌菌株共培养,得到1株对R.solani AG1 IA具有强拮抗作用的芽孢杆菌菌株Q9-0-1,并以形态学特征、生理生化特性为基础,结合gyr B基因序列分析,将其鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。     

大豆根腐病生防细菌优势菌株的筛选、鉴定及生防效果验证

根腐病是影响大豆产量的主要病害之一,镰刀菌(Fusarium sp.)是引起我国大豆根腐病的主要病原菌。以致病尖孢镰刀菌为研究对象,通过平板对峙法从实验室保存的237株芽孢杆菌筛选到一株对该尖孢镰刀菌具有明显抑菌活性的芽孢杆菌8-32。对芽孢杆菌8-32经菌落、菌体形态,16S rRNA基因序列及生理生化性质鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。温室盆栽结果表明:该生防菌对大豆根腐病具有很好的防治效果,其病情指数减少32.08%。     

枯草芽孢杆菌BS-2对脉孢菌的抑菌活性成分分析

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS-2对脉孢菌(Neurospora)有较强的抑制作用。本文通过对枯草芽孢杆菌BS-2进行紫外诱变,获得了抑菌活性比出发菌株增强的突变株BS-2-E和抑菌活性完全丧失的突变株BS-2-N。用LC-MS分析BS-2、BS-2-E及BS-2-N发酵液的盐酸粗提物,比较这3个菌株的质谱响应峰,初步认为BS-2的抑菌活性物质主要是伊枯草菌素(iturins)和芬枯草菌素B(fengycin B)。     

大麻沤麻液中细菌的分离和鉴定

为了解大麻沤麻液中细菌菌群构成,确立麻液分离菌的种属地位,本研究以大麻原茎沤麻液为菌种筛选的来源,利用传统可培养法分离得到24株细菌,并通过16S rDNA序列与细菌菌落形态、菌体的显微形态鉴定、生理生化鉴定相结合的方法对菌株进行鉴定,同时构建24株分离细菌与常规已知菌的系统发育树,初步确立菌株种属地位。研究结果表明：24株细菌共分11属,15种,其中主要以芽孢杆菌属居多,占25%,包括巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）,蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）,地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）和炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）。另有其他菌属,如宋内志贺菌（Shigella sonnei）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）,吉氏库特氏菌（Kurthia gibsoni-i）,肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种（Klebsiella pneumoniae subsp.）等。     

香蕉内在拮抗细菌研究Ⅰ——菌株B215的分离及分子鉴定

在香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC)重病园区,从生长正常的香蕉假茎内分离获得1株细菌,编号为B215.经对峙培养和孢子萌发抑制测定,B215对FOC和香焦其他几种主要病原菌的菌丝生长和孢子萌发具有良好抑制效果.对峙培养明显抑制香蕉枯萎病菌菌丝生长,抑菌带宽度0.5-0.6 cm.菌株B215培养液滤液使香蕉枯萎病菌孢子和菌丝生长点膨大成球状畸形,原生质外泄,细胞崩溃十瘪,其EC50为4.12%.形态学、生理生化试验显示B215为芽抱杆菌(Bacillus);进一步对该菌株做16srDNA序列测定与分析,表明其与已报道的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Strain KL-073)具有100%的同源性,二者所构建的系统发育树上处于同一个分支.将B215鉴定为枯草芽孢杆菌(B.subtilis).     

枯草芽孢杆菌HW201的亚麻生物脱胶条件优化

本项目研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HW201在亚麻沤麻过程中应用的基础条件与效果.结果表明,沤麻液中需要补充适量尿素以促进枯草芽孢杆菌HW201的生长和繁殖;纯HW201菌能够在沤麻过程中起到脱胶作用;在试验的沤麻条件中,固液比对沤麻有比较大的影响,降低固液比后沤麻液中的微生物生长更加旺盛;多聚磷酸钠和HW201联合使用,明显缩短了沤麻周期,处理后的麻纤维在化学成分上与传统生产工艺基本一致.     

一株抗根结线虫芽孢杆菌的分离筛选及鉴定

从海南省尖峰岭热带雨林土壤中分离获得143株芽孢杆菌。经松材线虫初筛,获得8株拮抗活性在80%以上的菌株;经南方根结线虫二龄幼虫(J2)复筛,获得4株拮抗活性在50%以上的菌株,其中菌株DB13184的发酵上清液稀释10倍后,校正死亡率仍有56.7%。基于16S rDNA系统发育分析,显示菌株DB13184属于芽孢杆菌属,与菌株Bacillus toyonensis BCT-7112T的序列相似度达100%,二者在系统发育树上亦处于同一分支;结合该菌的培养特征、形态特征及生理生化特征,将其鉴定为Bacillus toyonensis。     

玉米茎腐病病原禾谷镰孢拮抗菌筛选及分子鉴定

禾谷镰孢引起的玉米茎腐病会导致玉米产量锐减,筛选高效的拮抗菌株对防治玉米茎腐病尤为重要。采用稀释培养法从土壤中分离得到810株细菌,通过平板对峙法和16S rDNA分子测序方法进行拮抗菌的筛选和分子鉴定,共分离出禾谷镰孢拮抗菌23株,占分离细菌总数的2.84%,抑菌圈直径10.12～27.56 mm。拮抗细菌主要分布在厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria)3个门及芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、不动杆菌属(Acinetobacter)和节杆菌属(Arthrobacter)5个属中,其中,芽孢杆菌属细菌数量最多且拮抗能力较强,暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)的拮抗活性最强,具有较大的生防潜力。实验分离的23株菌株对禾谷镰孢有较好的拮抗活性,在玉米茎腐病防控中具有潜在的应用价值。     

甘蔗黑穗病菌拮抗菌HAS的筛选和鉴定

采用传统形态学鉴定及16S rRNA基因序列分析,筛选鉴定对甘蔗黑穗病菌具有拮抗作用的细菌的归属,并采用细菌的通用引物P0、P6扩增16S rRNA基因片段.结果表明:得到1 533 bp的DNA片段,其序列与枯草芽孢杆菌序列的同源性高达99％.其形态学特征:菌体为短杆状,能运动；革兰氏阳性反应；3％KOH溶解性实验呈阴性反应；有鞭毛,鞭毛周生；芽孢中生,椭圆形,孢囊稍膨大,初步将该菌株归属为枯草芽孢杆菌.与病原真菌对峙培养的结果表明,该菌对引起甘蔗和其它作物病害的多个植物病原真菌均具有很好的抑制作用.据此,可将分离的菌株HAS确定为对甘蔗黑穗病菌有较好防治效果的枯草芽孢杆菌.     

花生白绢病生防菌筛选及防控作用研究

为获得用于花生白绢病防控的生防菌,本研究通过培养皿对峙培养和田间防效试验,进行生防菌株的筛选。结果表明:从土壤中筛选的花生白绢病生防菌为木霉菌和芽孢杆菌,经形态学鉴定与分子生物学鉴定确定为棘孢木霉菌( Trichoderma asperellum)、拟康宁木霉菌(T.koningiopsis)、钩状木霉菌(T. hamatum)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus )。芽孢杆菌和木霉菌对花生白绢病均有一定的防控作用。生理生化测定结果显示,生防菌能提高花生叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)防御酶的活性,表明获得的生防菌木霉菌株及芽孢杆菌株能提高花生植株抗病性。     

木香薷精油抑菌活性研究

木香薷是一种典型的芳香植物。为了探讨木香薷精油的抑菌活性,本试验采用抑菌圈法,选取了金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、黑曲霉(Aspergillus niger)、沙门氏菌(Salmonella)和大肠埃希氏菌(Escherichia coli)5个菌种作为研究对象,对木香薷精油的抑菌活性进行了研究。实验结果表明,木香薷植物精油对金黄色葡萄球菌抑制效果最为明显,大肠埃希氏菌和枯草芽孢杆菌,对木香薷精油中度敏感,沙门氏菌和黑曲霉对木香薷精油低度敏感。     

同源重组整合vgb基因提升枯草芽孢杆菌亚麻脱胶能力

【目的】将透明颤菌血红蛋白(VHb)基因(vgb)在枯草芽孢杆菌中进行整合表达,以改善枯草芽孢杆菌的呼吸强度,通过高密度培养提高果胶酶的表达量,最终明显改善脱胶效果。【方法】构建含有vgb基因、amy E基因以及启动子P43的p SK-vgb(+)质粒,通过同源重组的方法,将vgb基因整合到枯草芽孢杆菌A5的染色体上,得到稳定表达透明颤菌血红蛋白的枯草芽孢杆菌A5-vgb(+)。分别采用PCR和CO差光谱分析法检测vgb基因的整合状态与血红蛋白的稳定表达,并通过发酵摇瓶试验研究VHb对菌株果胶酶产量的影响。将构建好的A5-vgb(+)菌株进行脱胶试验,通过XRD结晶度与电镜扫描分析鉴定脱胶效果。【结果】PCR与CO差光谱检测表明,vgb基因成功整合在A5菌株中,且正确表达的VHb具有生物学活性,在150 rpm,37℃,p H=8.0,16小时发酵的条件下,vgb基因的表达促使A5-vgb(+)菌株的果胶酶产量较不含vgb基因的菌株提升了29.5%。XRD与电镜扫描结果表明,构建的A5-vgb(+)菌株的脱胶效果相较于不含vgb的菌株,在结晶度上提高了0.55%,表面更光滑。【结论】将vgb基因整合至枯草芽孢杆菌A5菌株中,可提高A5菌株的脱胶效果。     

黄麻和红麻微生物脱胶研究——Ⅱ.多粘芽孢杆菌(B.polymyxa)T1163的扩大培养及人工接种脱胶试验

本文研究了多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)T1163的扩大培养方法和人工接种脱胶适宜条件,并进行了脱胶试验。结果表明,采用立式双层通气搅拌培养罐,装罐容70％的糠饼培养基,接种后在35℃下搅拌不通压缩空气,仅靠接种口(塞无菌棉花)与环境对流交换气体,培养6小时获最佳扩大培养效果;浸泡人工接种红麻干皮重10～15％的菌液,35℃下湿润发酵,36小时可完成脱胶,添加适量磷酸盐或尿素,24小时即能完成脱胶;还进行了0.5～50kg规模的红麻干皮脱胶试验,与天然脱胶比较,时间明显缩短,精洗率提高,纤维品质改善。文中还就人工接种脱胶的有关问题进行了讨论。     

1株广谱抗真菌芽孢杆菌TR21的鉴定

利用API50CH鉴定系统、16S rDNA、gyrA和gyrB基因序列分析法,对1株分离自石斛兰叶片的广谱抗真菌芽孢杆菌TR21进行生化和分子鉴定。通过API50CH系统测试,TR21菌株与枯草芽孢杆菌相似性为90.3%,被鉴定为枯草芽孢杆菌。利用16SrDNA序列分析发现TR21菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、B.subtilis subsp.subtilis、B.subtilis subsp.spizizenii和B.velezensis的相应核苷酸序列具有很高的同源性,其序列相似性皆为99%,而基于gyrA和gyrB基因序列构建的系统发育树显示,该菌株与枯草芽孢杆菌的相似性分别为96%和91%。结合16SrDNA、gyrA和gyrB基因序列分析,也确定该菌为枯草芽孢杆菌。比较API鉴定和基于不同基因的鉴定发现,分子鉴定更加快速、灵敏。     

应用枯草芽孢杆菌T66进行苎麻脱胶的研究

利用微生物进行麻类纤维脱胶有三种形式:天然浸渍、纯培养发酵和酶制剂脱胶。本项研究属于第二种形式。关于枯草芽孢杆菌 T_(66)的选育经过和培养条件,已在本刊今年第三期上报道。本文报告用该菌进行苎麻脱胶的试验结果。     

华重楼根际土芽胞杆菌多样性研究

为了解华重楼根际芽胞杆菌种群多样性信息，本研究采用稀释平板法分离福建省光泽县华重楼品种根际的芽胞杆菌，并对其进行16S rRNA序列分析。结果表明：从华重楼根际共分离到17个形态差异的芽胞杆菌菌株；16S rRNA序列分析表明，17个菌株鉴定为8个种，归属于4个属，芽胞杆菌属(Bacillus)、赖氨酸芽胞杆菌属(Lysinibacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)和绿芽胞杆菌属(Viridibacillus)，其中芽胞杆菌属的种类和数量最多。经抑菌试验分析，芽孢杆菌属的特基拉芽孢杆菌FJAT-43012对尖孢镰刀菌具有抑制作用。本研究结果表明，华重楼根际芽胞杆菌种群多样性较为丰富。本研究对芽胞杆菌资源的开发和利用提供良好的实验材料和理论基础。