皮质醇对中华绒螯蟹非特异性免疫的影响

分别以0(对照)、50、100和200 mg/kg体质量的剂量将皮质醇拌入基础饲料,制成颗粒饲料投喂中华绒螯蟹7d,在试验开始后第1天、第4天和第7天,分别采样测定中华绒螯蟹血清酚氧化酶(PO)、过氧化物酶(POD)、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性,并在试验开始后第7天,以0.2 CFU/kg体质量的剂量,体腔注射致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株,记录接种7d后中华绒螯蟹的累计病死率.结果表明:对中华绒螯蟹饲喂50、100和200 mg/kg体质量剂量的皮质醇7d后,3个试验组的血清AKP活性显著高于对照组;100和200 mg/kg组的血清LSZ和ACP活性显著低于对照组,3个试验组的血清PO和POD活性亦显著低于对照组;嗜水气单胞菌攻毒后,3个试验组的病死率均高于对照组,以200 mg/kg组的病死率最高,高出对照组26.67％.     

枯草芽孢杆菌微胶囊制剂对中华绒螯蟹免疫机能及抗病力的影响

在基础饲料中分别添加0(对照)、1、5 g/kg的枯草芽孢杆茵海藻酸钠微胶囊冻干粉(活菌含量为2.2×1011 CFU/g),制成颗粒饲料后投喂中华绒螯蟹7 d,然后将两个试验组改投喂对照组饲料.在停喂试验组饲料后第0、1、2、3周,分别测定中华绒螯蟹血细胞呼吸爆发活性、血清酚氧化酶(PO)、溶茵酶(LSZ)和酸性磷酸酶(ACP)活性,并在停喂试验组饲料后第2周,以1.2×107 CFU/kg体重的剂量,体腔注射致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株,记录接种10 d后中华绒螯蟹的累计死亡率.结果显示:在停喂试验组饲料后0周,5g /kg组的血细胞呼吸爆发活性显著高于对照组和1 g/kg组(P＜0.05);在多数采样时间点,5 g/kg组的血清PO和LSZ活性显著高于对照组(P＜0.05);在一些采样时间点.1 g/kg组的血清PO和LSZ活性也显著高于对照组(P＜0.05);两个试验组的血清ACP活性与对照组无显著差异(P＞0.05);试验组蟹对嗜水气单胞茵的抵抗力明显增强.本研究表明,饲喂5 g/kg饲料剂量的枯草芽孢杆茵微胶囊制剂可增强中华绒螯蟹的免疫力和抗病力.     

嗜水气单胞菌微胶囊疫苗对中华绒螯蟹免疫机能的影响

以0(对照组)、1、3、6g/kg的剂量将嗜水气单胞菌海藻酸钠微胶囊冻干疫苗(菌含量为1.5×1012cfu/g)添加于基础饲料中投喂中华绒螯蟹7d,然后投喂对照组饲料。在停喂含疫苗的饲料后第0、1、2、3周,采样测定中华绒螯蟹血细胞呼吸爆发活性、血清超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)和溶菌酶(LSZ)活性,并在停喂含疫苗的饲料后第1周,以每千克体重1.2×107cfu的剂量,体腔注射致病性嗜水气单胞菌CL99920菌株,记录接种7d后中华绒螯蟹的累计死亡率。结果显示:在停喂含疫苗的饲料后第0周和第3周,6g/kg组的血细胞呼吸爆发活性显著增加(P<0.05);在一些采样时段,3个试验组的血清SOD、PO及LSZ活性分别显著上升(P<0.05)。各试验组的蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。由此说明,投喂试验剂量的嗜水气单胞菌微胶囊疫苗能增强中华绒螯蟹的免疫机能。综合本试验结果并考虑添加成本,建议在生产中使用3g/kg的添加剂量。     

海藻酸钠对中华绒螯蟹免疫功能及抗病力的影响

以每千克体重10、30和90mg的剂量对中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)体腔(即在第3或第4步足基节膜处)注射海藻酸钠,对照组注射等量的0.85%生理盐水,在注射开始之前(第0d)和注射后的第1、3、5、8d采集血淋巴液,测定中华绒螯蟹的血细胞总量(THC)、不同血细胞数量(DHC)、吞噬活性、呼吸暴发(超氧阴离子的释放)、酚氧化酶(PO)及溶菌酶(LSZ)活性;在注射海藻酸钠后第3d,按每千克体重1.2×107cfu的剂量,体腔注射接种中华绒螯蟹致病性嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophi-la)CL99920菌株,记录接种7d后中华绒螯蟹的累积死亡率。结果显示,3个试验组的THC、大颗粒细胞(GC)数量、血细胞吞噬活性、呼吸暴发活性、PO活性和LSZ活性均显著地高于对照组(P<0.05);30mg/kg剂量组的透明细胞(HC)和小颗粒细胞(SGC)数量与对照组也有显著差异(P<0.05);海藻酸钠处理组的蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力明显增强。因此,体腔注射适量的海藻酸钠可增强中华绒螯蟹的免疫力和抗病力。     

竹笋多糖对免疫抑制中华绒螯蟹非特异性免疫的影响

为建立环磷酰胺诱导的中华绒螯蟹免疫抑制试验模型,以10 mg/kg体质量的环磷酰胺对试验组中华绒螯蟹进行体腔注射,每隔5 d注射1次,共注射3次,对照组注射等量的氯化钠注射液,试验组与对照组均投喂基础饲料。自最后一次注射环磷酰胺的次日开始,将试验组分为自然恢复组和竹笋多糖调节组2个组,分别投喂基础饲料和含2 g/kg竹笋多糖的饲料,对照组则继续投喂基础饲料。在竹笋多糖调节试验开始的第0天(最后一次注射环磷酰胺的次日)、第3天、第6天和第12天,采样测定中华绒螯蟹血清酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性及肝胰腺总抗氧化能力(T-AOC)与丙二醛(MDA)含量,以考察竹笋多糖对免疫抑制中华绒螯蟹非特异性免疫的影响。结果表明:投喂2 g/kg饲料的竹笋多糖能显著提高环磷酰胺诱导的免疫抑制中华绒螯蟹的血清ACP、AKP、SOD和POD活性及肝胰腺的T-AOC,降低肝胰腺MDA含量(P0.05)。由此表明,竹笋多糖能增强免疫抑制中华绒螯蟹的非特异性免疫反应,可作为中华绒螯蟹的免疫增强剂和饲料添加剂。     

竹笋多糖对免疫抑制中华绒螯蟹的免疫调节作用

为研究竹笋多糖(BSP)对免疫抑制中华绒螯蟹的免疫调节作用,试验设投喂基础饲料的对照组、免疫抑制模型组和投喂含2 g/kg竹笋多糖饲料的多糖调节组3个处理组,模型组和多糖组体腔注射10 mg/kg体重剂量的环磷酰胺,对照组注射生理盐水,每隔5 d注射1次,共3次。在竹笋多糖调节试验开始后的第0、3、6、12天,采样测定中华绒螯蟹的血细胞总数(THC)、血细胞呼吸爆发(RB)活性和血清酚氧化酶(PO)、溶菌酶(LSZ)、一氧化氮合酶(NOS)活性。结果表明,投喂2 g/kg饲料的竹笋多糖能显著提高环磷酰胺诱导的免疫抑制中华绒螯蟹的THC和血清PO、LSZ及NOS活性(P0.05),对血细胞RB活性无显著影响(P0.05)。由此可见,竹笋多糖对环磷酰胺诱导的免疫抑制中华绒螯蟹具有较好的免疫调节作用。     

CpG寡脱氧核苷酸对中华绒螯蟹3种血清酶活性的影响

以每千克体重1、5、25μg的剂量,对中华绒螯蟹分别注射“人最适免疫刺激序列(ODN-2006)”和“鱼合适免疫刺激序列(ODN-1670)”,在注射开始之前(即第0d)和注射后的第1、3、5、8d采集血清,对血清溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)活性进行测定。结果显示:剂量为每千克体重5、25μgODN-2006能使血清ACP和ALP活性显著增加(P<0.05),但对LSZ活性没有显著影响;与此同时,剂量为每千克体重5、25μgODN-1670对3种酶活性均有显著的促进作用(P<0.05)。由此表明,ODN-1670和ODN-2006能增强中华绒螯蟹的免疫功能,可作为甲壳动物潜在的免疫增强剂加以研发和利用。     

豆薯多糖对大鳞副泥鳅非特异性免疫的影响

实验组大鳞副泥鳅分别体腔注射5、10、20 g/L和40 g/L豆薯多糖溶液(0.2 m L/尾),对照组注射等体积的0.8%Na Cl溶液,在实验开始后第7、14、21 d和28 d,取样测定5个处理组的红细胞总数(RBC)和白细胞总数(WBC),血清酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)活性和补体C3含量;并在实验开始后第7 d,从每个处理组中随机采取大鳞副泥鳅15尾,每尾体腔注射1×108 CFU/m L的嗜水气单胞菌悬液0.1 m L,记录接种7 d后各组鱼的累积死亡率,然后计算免疫保护率。结果显示:与对照组相比,注射适量的豆薯多糖能显著增加大鳞副泥鳅的RBC和WBC(P0.05),显著增强血清ACP、AKP、LSZ活性和补体C3含量(P0.05);明显增强大鳞副泥鳅对嗜水气单胞菌感染的抵抗力。综合考虑各因素,以体腔注射10 g/L剂量较为适宜。     

蟹源益生芽孢杆菌的筛选

本试验根据菌体对高温和低pH的耐受性、产酶能力及对病原菌的抑菌效果,对中华绒螯蟹肠道中的芽孢杆菌进行了筛选.结果表明,在筛选到的3株芽孢杆菌中,ESB3菌株抑制中华绒螯蟹病原菌嗜水气单胞菌CL99920菌株的能力最强,产蛋白酶和淀粉酶的能力也较好,在肉汤培养基初始pH 3.0的条件下培养2 h时,其存活率为(32.56±2.87)%,90 ℃水浴处理10 min存活率为(68.54±8.28)%;浓度低于1×108CFU/mL对中华绒螯蟹无毒害作用,1×107 CFU/mL的ESB3能提高中华绒螯蟹对嗜水气单胞菌感染的抵抗力;经形态学和生理生化反应鉴定,ESB3为地衣芽孢杆菌.     

中华绒螯蟹对VC、VE、肌醇和胆碱需要量的研究

采用L9(34)正交设计法 ,配制9种不同VC、VE、肌醇、胆碱水平的配合饲料喂养中华绒螯蟹 ,测定蟹体的增重。试验结果表明 ,第1组～9组的瞬间生长率( %/d)分别为0.844、0.450、0.535、0.643、0.720、0.728、0.443、0.532和0.629 ,饲料系数分别为 :3.12、2.45、2.41、3.01、2.22、2.79、3.10、3.28和3.17。VC对中华绒螯蟹生长的影响最大。中华绒螯蟹配合饲料中VC的适宜量为100mg/kg,VE为45mg/kg,肌醇为400mg/kg,胆碱为400mg/kg。     

高活性干酵母对中华绒螯蟹育苗成活率的影响

为了探讨高活性干酵母对中华绒螯蟹(Eriocheri sinensis)蟹苗育苗成活率的影响，将安琪酵母股份有限公司生产的高活性干酵母添加在饲料中投喂中华绒螯蟹蟹苗40d后，统计和比较了各试验组与对照组中华绒螯蟹蟹苗的成活率。试验结果表明，在添加量为10．0g／kg．B．W．至200．0g／kg．B．W．的范围内，投喂添加有高活性干酵母饲料试验组中华绒螯蟹蟹苗的成活率较对照组提高1．3％至5．3％。各试验组中华绒螯蟹蟹苗总重量高于对照组，而个体生长速度与不同饲养池中蟹苗密度和饵料是否充足有关。     

蟹源地衣芽孢杆菌ESB3对中华绒螯蟹生长及部分免疫指标的影响研究

以初始质量为11.40 g的中华绒螯蟹为研究对象,在室内半循环水系统进行为期60 d的饲养试验,研究饲料中添加蟹源地衣芽孢杆菌ESB3活菌、灭活菌对中华绒螯蟹生长及部分免疫指标的影响。以基础饲料为对照组,在基础饲料中添加来源于中华绒螯蟹肠道的地衣芽孢杆菌ESB3活菌(命名为低、中、高剂量组,实际剂量分别约为1.3×107 CFU/g、1.4×108 CFU/g、0.9×109 CFU/g)、灭活菌冻干粉(剂量约为108 CFU/g),配制5种饲料。试验结果表明,与对照组相比,中、低剂量活菌可显著提高增重率(P<0.05),高剂量活菌提高增重率,但差异不显著(P>0.05)。ESB3活菌可不同程度提高血细胞总数、血细胞呼吸爆发活性、酚氧化酶活性、溶菌酶活性、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性,其中高剂量活菌效果最好。ESB3灭活菌仅能显著提高溶菌酶活性、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性(P<0.05)。本试验条件下,ESB3活菌能明显提高中华绒螯蟹对嗜水气单胞菌的抵抗力。上述结果表明,蟹源地衣芽孢杆菌ESB3活菌对中华绒螯蟹的生长和免疫均有一定促进作用,但适宜剂量有差异;灭活菌单纯菌体刺激效果不明显。     

纳米硒对中华绒螯蟹生长性能、硒含量和营养组成的影响

实验旨在研究纳米硒对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)生长性能、硒含量和营养组成的影响。在中华绒螯蟹基础饲料中分别添加0、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/kg和1.6 mg/kg 6个水平的纳米硒,另设1.0 mg/kg酵母硒作为阳性对照,将中华绒螯蟹[(4.5±0.4)g]随机分成7组并养殖于(25±1)℃循环水系统中,饲喂90 d后,采样测定生长指标、可食部分硒含量、全蟹营养组成。结果显示:①与0对照组相比,添加0.2 mg/kg纳米硒可显著增加特定生长率、存活率(P0.05);②与0对照组相比,纳米硒显著提高了肝胰腺中硒含量(P0.05),但肌肉中硒含量差异不显著(P0.05);③与0对照组相比,添加0.2 mg/kg纳米硒可显著增加粗蛋白和粗脂肪含量(P0.05),并且全蟹的总氨基酸、必需氨基酸和不饱和脂肪酸含量显著提高P0.05)。饲料中适量添加纳米硒可促进中华绒螯蟹的生长性能,提高肝胰腺中硒含量及其营养组成,且添加量为0.2 mg/kg时的养殖效果和营养成分与1.0 mg/kg酵母硒组基本一致。     

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)幼蟹对饲料中维生素B_2的适宜需求量

研究中华绒螯蟹幼蟹对饲料中维生素B2的适宜需求量。试验以酪蛋白为蛋白源,配制了维生素B2含量分别为0、3、6、12、24、48和96mg/kg的7种等氮等能的半精制饲料,在静水系统中投喂体重为(1.32±0.11)g的中华绒螯蟹幼蟹10周。结果表明,饲料中添加不同水平的维生素B2对中华绒螯蟹幼蟹的存活率、饲料系数、蛋白质效率及体水分、灰分和粗蛋白含量均没有显著影响,但是随着维生素B2含量的升高,幼蟹的增重率呈现先升高后降低的趋势,当饲料中维生素B2添加量达到12mg/kg时,其增重率达到最高(201.15%),显著高于0、3、48和96mg/kg试验组的151.97%、151.39%、155.83%和141.19%。幼蟹体内粗脂肪含量的变化趋势与增重率的变化趋势相反,当维生素B2水平达到12mg/kg时达到最低。另外,饲料中维生素B2含量的变化并不能显著影响幼蟹肝胰腺中维生素B2积累量,但饲料中缺乏维生素B2会显著抑制中华绒螯蟹幼蟹肝胰腺中D-氨基酸氧化酶的活力。根据中华绒螯蟹幼蟹增重率和肝胰腺中D-氨基酸氧化酶的活力,利用折线回归方法计算得出中华绒螯蟹幼蟹对饲料中维生素B2的适宜需求量为8.25～10.02mg/kg。     

环磷酰胺对大鳞副泥鳅免疫抑制的研究

为探讨环磷酰胺(CYP)对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)的免疫抑制作用,分别以100、200、300mg/kg体重的剂量对大鳞副泥鳅腹腔注射CYP,对照组注射等量的0.85%灭菌生理盐水,在注射CYP后第8天,测定泥鳅的红细胞数(RBC),白细胞数(WBC),血清一氧化氮(NO)含量,补体C3含量,溶菌酶(LSZ),酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、肝胰脏超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果显示:与对照组相比,300 mg/kg组的RBC、WBC、血清LSZ、ACP、AKP活性及补体C3含量分别显著降低73.5%、81.0%、52.2%、29.0%、47.9%和48.6%(P0.05);血清NO含量和肝胰脏MDA含量分别显著增加144.0%和50.8%(P0.05);肝胰脏SOD活性降低不显著(P0.05)。由此表明,CYP可抑制大鳞副泥鳅的免疫功能。     

茶多酚对草鱼免疫力及抗病力的影响

试验旨在探究饲料中添加茶多酚对草鱼免疫性能和抗病力的影响。5组草鱼分别饲喂基础饲料中添加0(对照组)、200、400、600、800 mg/kg茶多酚的试验饲料,连续投喂8周后对草鱼的血清免疫指标进行测定。试验首先测定茶多酚对嗜水气单胞菌、杀鲑气单胞菌和荧光假单胞菌鱼类常见病原菌的抑制作用。结果显示,嗜水气单胞菌和荧光假单胞菌的抑菌敏感性显著高于杀鲑气单胞菌(P0.05),筛选嗜水气单胞菌为攻毒试验所用菌种。饲养结束后,用嗜水气单胞菌对各组草鱼进行攻毒试验,对疾病感染情况下草鱼的存活率进行测定。结果显示:与对照组相比,饲料中添加400、600、800 mg/kg茶多酚,能显著提高SOD、CAT、AKP、LYZ的活性(P0.05),饲料中添加400、600、800 mg/kg茶多酚,能显著降低血清中MDA活性(P0.05);添加400、600、800 mg/kg茶多酚添加组的存活率较对照组差异显著(P0.05)。结果表明,饲料中添加茶多酚能促进强化草鱼天然免疫反应和抗病力,饲料中茶多酚的添加量以400 mg/kg为宜。     

虾青素和角黄素的配伍对中华绒螯蟹幼蟹生长和抗氧化能力的影响

以平均初始体重为(9.91±0.01)g的中华绒螯蟹幼蟹为研究对象,进行为期70 d的养殖试验,探讨在幼蟹基础饲料(D0)中添加50 mg/kg虾青素+50 mg/kg角黄素(D1)对蟹的生长和抗氧化能力的影响。结果显示:饲料中添加了虾青素和角黄素后对中华绒螯蟹幼蟹增重率、特定生长率、饲料系数、存活率以及肌肉和全蟹常规营养成分均无显著影响(P>0.05);虾青素和角黄素的添加显著提高了幼蟹肝胰腺总抗氧化能力和超氧化物歧化酶的水平(P<0.05),显著降低了丙二醛的水平(P<0.05),两组间过氧化氢酶的水平无显著差异(P>0.05)。综上所述,饲料中添加虾青素+角黄素混合物(11)可以有效提高中华绒螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化能力。     

河蟹种质的外观鉴别方法

河蟹又叫螃蟹、毛蟹,学名中华绒螯蟹,在我国分布较广。因栖息生态环境的不同,形成4个种群,即:长江水系种群、辽河水系种群、瓯江水系种群和闽江水系种群。在世界上,除中华绒螯蟹,还有日本绒螯蟹、直额绒螯蟹和狭额绒螯蟹3种。 一、中华绒螯蟹与日本绒螯蟹等其它蟹种的区别     

中华绒螯蟹点状产气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

为确定诱发中华绒螯蟹肠炎的病原菌,筛选潜在的防控药物,采用传统方法从患肠炎的中华绒螯蟹体内分离到一株病原菌(DD5),通过API 20E细菌鉴定系统和16SrDNA序列分析对菌株DD5进行了鉴定,并采用KB纸片扩散法对菌株DD5的抗菌药物敏感性进行了测定。结果表明,菌株DD5为点状产气单胞菌(GenBank登录号:KP260655),其16SrDNA序列与基因库中气单胞菌属菌株的16SrDNA序列有99%~100%的同源性,而且与点状产气单胞菌136c株(GenBank登录号:EU488688)的亲缘关系最近。此外,菌株DD5对四环素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、左氟沙星、复方新诺明等抗菌药物高度敏感。本研究证实点状产气单胞菌是中华绒螯蟹肠炎的病原菌,恩诺沙星、庆大霉素等常规渔药可作为点状产气单胞菌引起的中华绒螯蟹肠炎的防控用药。     

枯草芽孢杆菌对中华绒螯蟹的生长性能和体成分的影响

挑选体重为(10.49±0.13)g健康的中华绒螯蟹180只,平均分成6组,每组3个重复,分别饲喂含0、0.25×109、0.5×109、1×109、2×109、4×109 cfu/kg枯草芽孢杆菌的饲料,进行8周的生长试验,以探讨芽孢杆菌对中华绒螯蟹生长性能及体成分的影响。试验结果表明,随着枯草芽孢杆菌添加量的增加,中华绒螯蟹的生长呈现先上升后下降的趋势,当饲料中添加1×109 cfu/kg时增重和特定生长率最大,且显著高于其他各组(P<0.05);通过方差分析,各个组全蟹的水分、粗脂肪、粗蛋白、粗灰分差异不显著(P>0.05);添加枯草芽孢杆菌试验组能降低肝体指数,1×109cfu/kg组的肝体指数最小,且显著小于对照组(P<0.05)。由此可见,饲料中添加适宜的枯草芽孢杆菌可显著提高中华绒螯蟹的生长,且不会明显改变全蟹的营养成分组成,适宜添加量为1×109 cfu/kg。