荷斯坦奶牛耐热性状的RAPD标记研究

为了筛选出耐热荷斯坦奶牛的分子遗传标记，并应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育。从高产奶牛群中筛选出耐热性状差异显著的10头高产荷斯坦牛作为实验材料，采用RAPD作为分子标记筛选方法。优化奶牛RAPD反应最佳体系，并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。通过RAPD结果，并结合红细胞钾测定结果和生产性能进行分析，确定3个分子标记与奶牛耐热性状相关，并对其进行了测序与分析。     

荷斯坦奶牛耐热性状的分子遗传标记研究

选取高产荷斯坦牛10头，优化奶牛RAPD反应最佳体系，并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。结合红细胞钾测定结果和生产性能测定，通过RAPD分析并筛选出3个与奶牛耐热性状相关的分子标记，以期应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育工作。     

荷斯坦奶牛抗热应激SCAR标记的研究与应用

为能利用抗热应激SCAR标记应用于奶牛抗热应激新品种的选育,随机选取52头高产耐热荷斯坦奶牛和41头高产不耐热荷斯坦奶牛,利用RAPD技术对筛选出的耐热分子标记进行序列分析和SCAR转化,并以S441 SCAR标记对种公牛和核心群的母牛进行检测和分析。结果表明,随机引物S441和S463在高产耐热组中分别扩增了581 bp和680 bp的特异性片段,序列比较显示,前者与KCNN2基因的同源性达90%,后者与NW_001024067.1|BtUn_WGA9442_2同源性达99%;S441 SCAR标记在种牛的检出率为:母牛12.7%[27/213],公牛32.6%[15/46];数据统计分析表明:有无S441 SCAR标记的母牛产奶量差异不显著(P>0.05),但在热应激条件下产奶量下降率差异极显著(P<0.01)。研究初步确定S441标记作为荷斯坦奶牛抗热应激分子标记。     

荷斯坦奶牛抗热应激SCAR标记的研究与应用

为能利用抗热应激SCAR标记应用于奶牛抗热应激新品种的选育,随机选取52头高产耐热荷斯坦奶牛和41头高产不耐热荷斯坦奶牛,利用RAPD技术对筛选出的耐热分子标记进行序列分析和SCAR转化,并以S441 SCAR标记对种公牛和核心群的母牛进行检测和分析.结果表明,随机引物S441和S463在高产耐热组中分别扩增了581 bp和680 bp的特异性片段,序列比较显示,前者与KCNN2基因的同源性达90%,后者与NW-001024067.1|BtUn-WGA9442_2同源性达99%;S441 SCAR标记在种牛的检出率为:母牛12.7%[27/213],公牛32.6%[15/46];数据统计分析表明:有无S441 SCAR标记的母牛产奶量差异不显著(P>0.05),但在热应激条件下产奶量下降率差异极显著(P<0.01).研究初步确定S441标记作为荷斯坦奶牛抗热应激分子标记.     

用RAPD技术筛选中国荷斯坦牛产奶量性状遗传标记

选用320条10碱基随机引物在由36头高产（305d产奶量〉8500kg）和32头低产（305d产奶量〈5600kg）中国荷斯坦牛所组成的2个DNA池间进行RAPD-PCR扩增，从中筛选出稳定性好、带型清晰且在2个DNA池间有明显差异的RAPD引物24条。用筛选到的24条引物对所有个体进行PCR检测，得到了5个与奶牛产奶量性状相关的RAPD标记，并对其中4个进行了克隆测序和SCAR标记转化以及生物信息学分析。结果表明：SCAR标记yield—s139与产奶量密切相关，应用电子克隆方法已将该标记由921bp延伸到2141bp，经同源性比较发现，此标记对应于奶牛基因组中LINEs家族中的一个重复元件，推测该元件附近可能存在与产奶量性状相关的QTLs或主效基因。     

娟姗牛产奶量性状RAPD标记的研究与生物学分析

为了筛选出高产娟姗牛的分子遗传标记,并应用这些分子标记进行高产娟姗牛的选育,笔者选用250条10碱基随机引物在由20头高产(305 d产奶量4000 kg)和20头低产(305 d产奶量3200 kg)娟姗牛所组成的2个DNA池间进行RAPD-PCR扩分子标记筛选。用筛选到的200条引物对所有个体进行PCR检测,得到了3个与奶牛产奶量性状相关的RAPD标记,并对它们进行了克隆测序以及生物信息学分析。试验结果表明,S11、S1110和S120 3个DNA片段与产奶量有关,其中S11与产奶量性状正相关关系,S1110和S120与产奶量性状呈负相关关系。     

中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛的性别鉴定

根据中国黑白花奶牛的ZFX、ZFY基因序列设计引物ZFY1、ZFX2、ZFY3,对中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛ZFX、ZFY基因片段进行PCR体外扩增和性别鉴定.结果显示ZFY1、ZFX2引物对ZFX、ZFY都能扩增出一条652bp片段;ZFY基因特异性引物ZFX2、ZFY3只能对雄性扩增出一条359bp的片段;特异性引物ZFX2、ZFY3能对中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛进行性别鉴定.     

中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛的性别鉴定

根据中国黑白花奶牛的ZFX、ZFY基因序列设计引物ZFY1、ZFX2、ZFY3，对中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛ZFX、ZFY基因片段进行PCR体外扩增和性别鉴定。结果显示：ZFY1、ZFX2引物对ZFX、ZFY都能扩增出一条652bp片段；ZFY基因特异性引物ZFX2、ZFY3只能对雄性扩增出一条359bp的片段；特异性引物ZFX2、ZFY3能对中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛进行性别鉴定。     

紫花苜蓿品种鉴定的RAPD分子标记技术研究

试验分别以中苜一号(Medicago sativa L. cv.Zhongmu No.1)、肇东(M.sattva L. cv.Zhodong)、甘农三号(M.sativa L. cv.Gannong No.3)、公农一号(M.satzva L. cv.Gongnong No.1)紫花苜蓿品种的混合DNA(由各品种60个单株的DNA等量混合)为模板筛选RAPD特异性引物,分析比较品种鉴定的特异性谱带.结果表明:从120条随机引物中筛选出S1、S78、S89和S¨5共4条随机引物,可以通过特异性分子标记位点反映品种间的差异;另外,筛选出的RAPD标记引物对各品种60个单株DNA的测试显示品种内部存在特异性标记的单株比例较高;通过RAPD分子标记引物的筛选、标记程序的完善,确定品种特异性标记谱带,可以进行紫花苜蓿(Medicago sativa)品种的鉴定.     

采用四引物ARMS-PCR方法检测奶牛乳腺组织DGAT1基因单核苷酸多态性

试验旨在快速有效地检测泌乳奶牛的二酰甘油转酰基酶1（diacylgycerol acyltransferase 1,DGAT1）乳脂量性状的优势等位基因K232A单核苷酸多态性,确定DGAT1基因型进而确定泌乳性状,为中国荷斯坦奶牛分子标记辅助选择提供技术支持。选取6头泌乳初期（3头为高乳产量牛,3头为低乳产量牛）中国北方荷斯坦奶牛为研究对象,提取乳腺组织基因组DNA,分别设计1对外引物和1对内引物,建立一种四引物ARMS-PCR体系快速检测奶牛乳腺组织DGAT1基因单核苷酸多态性。结果发现,外引物扩增片段长度为512 bp,为PCR反应的阳性对照,基因型为232K扩增片段长度为369 bp,基因型为232A扩增片段长度为181 bp。PCR结果显示,6头牛的乳腺组织样本均由外部引物扩增出长度为512 bp的片段,泌乳期高乳产量奶牛和泌乳期低乳产量奶牛乳腺组织的特异性扩增片段长度均为181 bp。表明本研究选取的6头奶牛样本DGAT1基因K232A多态性均为232A型。提示该PCR鉴定方法能够快速有效地鉴定奶牛DGAT1基因型,可用于中国荷斯坦奶牛分子标记辅助选择。     

德系弗莱维赫与高产荷斯坦奶牛杂交一代（F1代）鲜乳DHI测定指标研究

在同一个牛场同时现场采集杂交代(F1代)奶牛和高产荷斯坦奶牛的鲜乳奶样,进行DHI奶牛生产性能测定。试验结果证实,杂交代泌乳牛(F1代)的鲜乳综合品质都优于高产荷斯坦奶牛。杂交一代(F1代)同时具有明显的乳肉兼用德系弗莱维赫牛高乳脂蛋白的特性和高产荷斯坦奶牛产奶性能的特性。     

荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征焦磷酸测序检测方法建立与应用

为建立一种快速高通量的荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征（complex vertebral malformation,CVM）的分子检测方法,根据CVM是由于SLC35A3基因第4外显子559位处发生G→T突变的遗传学基础,利用Assay Design SW软件设计了1对PCR引物和1条测序引物对三种不同基因型的基因材料进行测序分析,建立焦磷酸测序检测方法。对55份进境荷斯坦奶牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物进行测序,其DNA序列与焦磷酸测序检测结果一致。研究表明该方法是一种有效的新方法,可用于荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征的检测。     

荷斯坦牛耐热性RAPD和SCAR标记的研究

以52头高产耐热组和41头高产不耐热组中国荷斯坦牛的DNA为材料,选用200条RAPD引物,利用RAPD-PCR技术,对荷斯坦牛的耐热性进行研究。结果发现,使用S441引物和S463引物在高产耐热组中分别发现了581 bp（RAPD-S441标记）和680 bp（RAPD-S463标记）2条特异性片段。通过测序和序列比较显示：581 bp的片段与KCNN2基因的同源性达90%;680 bp片段与NW_001024067.1｜BtUn_WGA9442_2的同源性达99%。根据已知KCNN2基因的功能,初步判断KCNN2基因为影响耐热性能的候选基因。得到GenBank登录号EF123743和EF123744。利用NCBI的ORF finder在581 bp中没有发现ORF,与预测其是KCNN2基因内含子3的结论相符合。在680 bp中发现4个开放阅读框（ORF）,分别为ORF1、ORF2、ORF3、ORF4。这4个阅读框分别编码48AA、34AA、45AA、34AA。根据RAPD-S441、RAPD-S463标记的测序结果,利用Premier 5.0软件设计对应的SCAR引物。成功将RAPD-S441标记转化为耐热SCAR标记。     

荷斯坦奶牛耐热性RAPD分子标记的筛选

以耐热性不同的荷斯坦奶牛DNA样品为材料,用170条S系列随机引物对其进行PCR扩增,获得两条特异性条带,通过分析RAPD多态性结果与奶牛生产性能和血液指标的相关性,S275和S2011的差异片段与生产性能中的产奶量呈高度的负相关,与乳脂率呈中度的正相关,其中S275的差异片段还与乳蛋白率呈低度的显著正相关,S275和S2011的差异片段与血液生化指标中的T3、T4呈中度负相关。另外,S275的差异片段还与CK含量呈显著正相关,与钾离子含量呈显著负相关,S2011的差异片段与钠离子含量显著负相关;将特异性条带测序结果进行BLAST分析,表明S275和S2011两条随机引物可用于耐热性能优良奶牛的RAPD筛选。     

与多花黑麦草株高性状相关的RAPD标记分析

用4个多花黑麦草品种进行株高性状相关的RAPD标记分析。结果表明:用基因组DNA作为RAPD检测多花黑麦草株高性状位点的方法是可行的。从110条引物中筛选出23条引物对4个多花黑麦草品种的基因组DNA进行扩增,共扩增出174条带,其中166条带为多态性带,标记率为95.4%;检测出4个多花黑麦草品种基因组DNA的6个株高性状的标记(分布在5条引物中)。     

黑龙江吉田爱德生物工程有限公司成立

2004年1月10日,中加合资黑龙江吉田爱德生物工程有限公司在黑龙江省双城举行签约仪式。这是爱德现代牛业发展集团与黑龙江省吉田牧业有限公司为发展当地奶牛事业合资组成的把北美高产荷斯坦奶牛胚胎移植到黄牛体内,以“借腹生女”的方式生产纯种荷斯坦高产奶牛的生产基地。合资公司总投资3500万元,设计规模为年产高产奶牛3000头。爱德现代牛业发展集团在中国共成立了10家快速繁育高产荷斯坦奶牛的胚胎移植生产基地。吉田爱德是爱德牛业进军我国东北养牛大省的第一家合资公司。公司利用北美高产奶牛的种群资源生产出高品质奶牛胚胎,利用中国…     

利用SSR、ISSR和RAPD技术构建苜蓿基因组DNA指纹图谱

在建立可靠的苜蓿基因组DNA提取分离和PCR扩增技术体系的基础上,筛选具有稳定多态性位点的RAPD、SSR和ISSR引物,建立苜蓿基因组DNA的SSR、ISSR和RAPD分子标记技术体系,并利用分子标记检测苜蓿品种(系)的DNA分子标记多态性,构建苜蓿品种的DNA指纹图谱.筛选出36个RAPD引物,8个SSR引物和12个ISSR随机引物,通过PCR扩增在55个国内外苜蓿品种(系)中获得了182个RAPD多态性位点和丰富的SSR和ISSR多态性位点,构建了55个苜蓿品种(系)的SSR、ISSR和RAPD指纹图谱.结果表明,不同苜蓿品种(系)的SSR多态性有较大差异;苜蓿品种ISSR指纹图谱多态性丰富,稳定性比RAPD强;可以通过2～3个引物鉴别我国主要苜蓿品种和引进品种,SSR和ISSR指纹图谱可以更好地用于苜蓿品种鉴定和遗传多样性分析.     

中国荷斯坦牛的饲养与管理

我国饲养的奶牛是以"中国黑白花奶牛"为主,本品种是利用引进国外各种类型的荷斯坦牛与我国的黄牛杂交,并经过了长期的选育而形成的一个品种。本文主要讨论了中国荷斯坦奶牛的犊牛、育成牛、成母牛以及高产奶牛的饲养管理方法,同时讨论了中国荷斯坦奶牛的常见普通疾病防治方法,希望对大家有所帮助。1中国荷斯坦奶牛的饲养1.1犊牛的饲养犊牛是指出生到6月龄的牛。     

奶牛性别鉴定的研究与应用

选取牛雄性性别决定基因SRY (sex region of Y chromosome),根据基因序列设计特异引物,应用PCR技术对5头荷斯坦奶牛DNA样品进行扩增,鉴定其性别;并对设计的引物灵敏度进行检测;对已有的公、母各20头荷斯坦奶牛DNA样品进行PCR盲检,获取奶牛高灵敏度特异性引物,用于奶牛性别鉴定。结果表明,4头公牛DNA样品可以扩增出目标条带(66 bp),1头母牛DNA样品无法扩增出条带,阴性对照扩增无条带;最佳引物灵敏度为1.6 pg/μL,可以很好地满足性别鉴定需要。40头个体中,20头个体DNA样品可以扩增出条带,其余20头个体DNA样品无法扩增出条带,检测结果与实际性别对比准确率为100%。试验结果表明,设计的引物灵敏度比较好,能够满足奶牛性别鉴定的需要。     

酒泉地区胚胎移植荷斯坦奶牛体尺发育比较分析

对甘肃酒泉地区45头胚胎移植荷斯坦奶牛初生、6月龄、12月龄阶段的体尺体重指标进行了生长测定,并与甘肃黑白花奶牛、中国荷斯坦奶牛及本地牛进行了绝对差值和相对差值的比较分析。结果表明,初生、6月龄、12月龄阶段,胚胎移植荷斯坦奶牛与甘肃黑白花奶牛、中国荷斯坦奶牛和本地牛相比,其相对差值均大于90。胚胎移植荷斯坦奶牛与本地牛相比,绝对差值均大于0;与甘肃黑白花奶牛、中国荷斯坦奶牛相比较,其绝对差值体尺介于-3cm与13 cm之间,体重介于-21 kg与18 kg之间。总体看,胚胎移植荷斯坦奶牛体尺体重发育良好。