地被菊间接体细胞胚发生途径的转基因受体体系的研究

采用三步培养法建立了地被菊花品种‘玉人面'间接体细胞胚发生途径的转基因受体体系.试验以地被菊花品种‘玉人面'茎段(节间)为外植体,研究了生长调节剂、光照强度等因子对其间接体细胞胚诱导和分化的影响,同时进行了抗生素敏感性试验.结果表明:胚性愈伤组织诱导培养基为MS KT 2.0 mg·L-1 2,4-D 2.0 mg·L-1 NAA 0.5 mg·L-1,诱导15 d后,将获得的黄绿色致密颗粒状胚性愈伤组织转入胚性愈伤组织分化培养基MS KT 2.0 mg·L-1 2,4-D 1.0 mg·L-1 NAA 0.5 mg·L-1中,诱导15 d后再转入MS KT 2.0 mg·L-1 NAA 0.5 mg·L-1的分化培养基中培养20 d,光照强度为1 000～2 000 lx,胚性愈伤组织诱导率、分化率分别为95.3%、92.7%,平均每个外植体分化的芽数为17.8个,获得的再生芽的稳定性为99.5%.抗生素敏感性试验表明:地被菊花品种‘玉人面'间接体细胞胚发生途径的转基因受体体系中,卡那霉素选择压为20 mg·L-1;头孢霉素在胚性愈伤组织诱导时的选择压为300 mg·L-1,在胚性愈伤组织分化培养时选择压为100 mg·L-1.     

杂交榛子体细胞胚发生研究

不同培养基、激素种类及浓度和外植体对杂交榛子体细胞胚直接和间接诱导的影响的结果表明,MS培养基为杂交榛子体细胞胚发生最佳培养基;激素对杂交榛子体细胞胚直接诱导无显著影响,均可诱导成熟植株;筛选出杂交榛子愈伤组织培养最佳培养为:MS+6-BA2.0 mg/L+NAA1.5 mg/L;再生植株分化最佳培养基为:MS+6-BA2.0mg/L+N AA1.5 mg/L转入MS+6-BA 5.0 mg/L+N AA 0.01+GA3 0.5 mg/L;杂交榛子体细胞胚发生以子叶诱导率最高,以龙榛胚性愈伤组织诱导率最高。     

白刺花胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生

【目的】探讨不同植物生长调节剂对白刺花胚性愈伤组织诱导的作用,以及培养基中氮源和无机盐浓度对白刺花体细胞胚发生和植株再生的影响,以期建立白刺花体细胞胚发生、发育及调控技术体系,为白刺花种苗快速繁殖体系建立及遗传转化研究提供参考。【方法】以白刺花叶片为外植体,研究生长调节剂2,4-D(1.0、2.0、3.0、4.0 mg ·L -1 )、NAA(0、0.5、0.8、1.0 mg ·L -1 )、6-BA(0.2、0.5、1.0、2.0 mg ·L -1 )和TDZ(0、0.2、0.5、1.0 mg ·L -1 )组合对胚性愈伤组织诱导,及NAA(0、0.2、0.5 mg ·L -1 )、6-BA(0、0.5、1.0 mg ·L -1 )和TDZ(0、0.2、0.5 mg ·L -1 )组合对体细胞胚发生的调控作用,筛选最优生长调节剂组合;并研究培养基中KNO 3和NH 4NO 3比例对体细胞胚发生的作用,及MS培养基中无机盐浓度(1/5MS 、1/4MS、1/3MS、1/2MS)对体细胞胚萌发的影响,筛选最佳的体细胞胚发育及成熟萌发条件。【结果】白刺花叶片外植体胚性愈伤组织诱导适宜培养基为MS + 2,4-D 3.0 mg ·L -1 + NAA 0.5 mg ·L -1 + 6-BA 0.2 mg ·L -1 + TDZ 1.0 mg ·L -1 +蔗糖40 g ·L -1 +琼脂7.0 g ·L -1 ,诱导率为42.0%。采用MS基本培养基时,最佳的体细胞胚发生培养基为MS + NAA 0.5 mg ·L -1 + 6-BA 1.0 mg ·L -1 + TDZ 0.5 mg ·L -1 +蔗糖40 g ·L -1 +谷氨酰胺100 mg ·L -1 +琼脂7.0 g ·L -1 ,体细胞胚发生率为78.46%,总胚数为对照的3.6倍;MS培养基中,KNO 3浓度提高1倍、NH 4NO 3降至1/2时,体细胞胚发生率可提高至91.33%,总胚数为采用MS基本培养基时的1.4倍;1/3MS培养基有利于体细胞胚的萌发,萌发率为82.75%,幼苗长势良好,单株平均鲜质量为76 mg,幼苗驯化移栽1个月后成活率达90%以上。【结论】白刺花叶片接种于添加2,4-D、NAA、6-BA和TDZ不同组合的诱导培养基上,可脱分化形成愈伤组织或胚性愈伤组织,2,4-D浓度对愈伤组织形态和质地有较大影响。TDZ有利于体细胞胚的形成,适宜浓度的生长素与细胞分裂素组合及硝态氮和铵态氮的比例对体细胞胚的形成和发育具有调控作用,降低MS无机盐浓度可提高体细胞胚萌发率,本试验体系的再生植株移栽成活率达90%以上。     

蒙古栎体细胞胚胎发生技术研究

为建立蒙古栎体细胞胚胎发生体系,以蒙古栎未成熟合子胚为外植体,通过不同种源、外植体的取材时间、诱导培养基配比、培养条件等筛选得到胚性愈伤组织,进而进行体胚增殖。结果表明:7月上旬是最佳的取材时期(合子胚大小约10 mm),蒙古栎合子胚在培养基MS+2,4-D1 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+水解酪蛋白0.5 g·L~(-1)中胚性愈伤组织诱导率可达85.7%,光照条件对胚性愈伤组织的诱导率影响不显著。不同种源对胚性愈伤组织的诱导率有显著影响。在培养基MS+NAA 0.5 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+水解酪蛋白0.5 g·L~(-1)中体胚增殖率最大72.3%,且培养4周时胚性愈伤组织状态最佳。     

孝顺竹愈伤组织诱导及植株再生

利用孝顺竹小穗和种胚为外植体,诱导出胚性愈伤组织并成功实现植株再生.对影响愈伤组织诱导和分化的基本培养基、激素种类及质量浓度等进行筛选,结果表明:愈伤组织诱导以NB,N6基本培养基附加4 mg·L-1 2,4-D较好;外植体在NB+500 mg·L-1脯氨酸+500 mg·L-1谷氨酰胺+300 mg·L-1水解酪蛋白+30 g·L-1蔗塘+8 g·L-1卡拉胶(Carrageenan)+4 mg·L-1 2,4-D的诱导培养基上经20 d培养,小穗愈伤组织诱导率达87.30%,种胚愈伤组织诱导率为76.27%.愈伤组织预分化及分化的基本培养基以MS较适宜,经MS+30 g·L-1蔗糖+10 g·L-1卡拉胶+4 mg·L-1 KT培养基预分化7 d后,转入无激素的MS培养基上分化14 d,小穗愈伤组织仅个别长出绿色芽头;但种胚愈伤组织芽分化率可达80.0%.分化芽中有8%左右的白化苗,并伴有花叶苗出现.优化后的种胚愈伤组织预分化最佳培养基是MS+3 mg·L-1 6-BA+3 mg·L-1 KT.分化芽苗在添加2mg·L-1 NAA的MS培养基上生根良好,移栽成活率可达70%以上.     

杂种落叶松未成熟胚的体细胞胚发生和植株再生

以未成熟合子胚为外植体,建立杂种落叶松胚性愈伤组织诱导和植株再生体系.从日本落叶松5×长白落叶松77.3和日本落叶松5×兴安落叶松9两个家系诱导出胚性愈伤组织,授粉后65天左右采集的合子胚在添加0.5 mg·L-1 2,4-D+0.5 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 KT的S培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,为10%.从胚性愈伤组织中筛选出3个具有稳定分化能力的胚性细胞系,其中授粉后65天采集的日本落叶松5×长白落叶松77-3合子胚诱导的胚性细胞系的每克胚性愈伤组织形成的体胚数、体胚萌发率、植株再生率最高,分别为18.1个,77.O%,28.1%.再生植株的移栽成活率为41.8%.     

刺五加体细胞胚胎发生过程及解剖学观察

探讨不同外植体、植物生长调节物质种类及配比对刺五加培养物的影响,建立刺五加体胚发生及再生植株体系.结果表明:叶片最易形成愈伤组织.茎次之,根最差.外植体最佳取材时期为4-5月.刺五加愈伤组织最适诱导基质为MS 1.0 mg·L-12,4.D 0.5 mg·L-16-BA;体细胞胚的诱导、发育和分化的最佳培养基为不添加任何生长调节物质的MS培养基.解剖学观察表明刺五加离体胚胎发生过程与合子胚发育过程相同.     

黑松未成熟胚的体细胞胚胎发生和植株再生

以未成熟合子胚为外植体,建立黑松体细胞胚胎发生和植株再生体系。研究基本培养基、2,4-D和6-BA对胚性愈伤组织诱导的影响,探讨ABA和PEG对体细胞胚成熟及植株再生的影响。结果表明:在添加4mg·L-12,4-D+2mg·L-16-BA的DCR培养基上胚性愈伤组织诱导率为3.33%;在添加30mg·L-1ABA+25g·L-1PEG的培养基DCR上,每克愈伤组织体细胞胚数量达72个,体细胞胚的萌发率为63.8%、植株转化率为43.5%,高质量的黑松体胚能提高体胚萌发率和植株转化率,再生植株1个月移栽成活率为50%。该研究可为抗病黑松的快速大规模繁殖提供一条新途径。     

四倍体刺槐组织培养快速繁殖试验

以健壮母株当年生萌发枝条带腋芽茎段为外植体,采用正交试验研究了不同浓度的激素对外植体诱导分化的影响,筛选出愈伤组织最适诱导培养基为:MS 6 BA0 25mg·L-1 NAA0.1mg·L-1;增殖培养基为:MS 6 BA0.5mg·L-1 NAA0.05mg·L-1;生根培养基为:1/2MS IBA0.2mg·L-1 NAA0.2mg·L-1。     

日本落叶松体细胞胚胎发生的研究

日本落叶松日永 10、日永 6 9和日草 34三个优株 ,将其未成熟种子和成熟种子的胚及成熟种子萌发的胚根、胚轴和绿色愈伤组织 5种外植体进行体细胞胚胎发生的试验 ,其中只有未成熟胚诱导出胚性愈伤组织 ,筛选出1)胚性愈伤组织诱导培养基 :S培养基 6_BA 0 5mg·L- 1 KT 0 5mg·L- 1 2 ,4_D 1 0mg·L- 1 ;2 )胚性愈伤组织保持与增殖培养基 :S培养基 6_BA 0 2 5mg·L- 1 KT 0 2 5mg·L- 1 2 ,4_D 0 1mg·L- 1 ;3)成熟体细胞胚诱导培养基 :S培养基 ABA 15mg·L- 1 PEG4 0 0 0 10 0g·L- 1 。以上 3种培养基均需附加蔗糖 30g·L- 1 ,谷氨酰胺 4 5 0mg·L- 1 ,水解酪蛋白 5 0 0mg·L- 1 ,凝胶 (Sigma#) 3g·L- 1 ,pH5 8。 4 )体细胞胚萌发培养基 :S培养基 ,不加任何激素 ,附加蔗糖 2 5g·L- 1 ,凝胶 (Sigma#) 3g·L- 1 ,pH5 8。     

刺五加体细胞胚状体发生及成苗的研究

以刺五加试管苗叶片为试材,将叶片接种于含有不同种类和浓度激素的培养基上进行培养,研究不同激素对刺五加胚性愈伤组织诱导、胚状体发生及生根的影响。结果表明：诱导叶片胚性愈伤组织发生的最适培养基为MS＋6-BA 1.5 mg.L-1＋2,4-D 1.0 mg.L-1,胚状体生长发育的最适培养基为MS＋6-BA1.0 mg.L-1＋IBA0.5 mg.L-1,生根的最适培养基为1/2MS＋NAA0.4 mg.L-1。     

栓皮栎体胚的增殖、成熟和萌发

以栓皮栎实生苗叶片为外植体诱导体细胞胚胎发生,调查碳水化合物、渗透剂和植物生长调节剂对体胚增殖、成熟和萌发的影响,建立体胚增殖、成熟和萌发的培养基方案.叶片外植体在附加1.0 mg·L-1NAA和0.5mg·L-1BA的起始培养基上诱导形成前胚性团块.这些胚性团块在增殖培养基上培养6周,在附加1 mg·L-1BA、0.25 mg·L-1NAA和3%蔗糖的MS培养基上增殖效果最好.将单个体胚转接到成熟培养基上进行培养,蔗糖浓度对栓皮栎体胚成熟以及后续的萌发有显著影响.成熟培养基中附加5%的蔗糖,体胚成熟率和萌发率分别达到63.5%和33.8%.虽然在成熟培养基中附加ABA有利于体胚成熟,但对体胚的进一步萌发没有促进作用.为了提高萌发率,成熟体胚在附加植物生长调节剂的萌发培养基上进行培养,以及进行预冷处理.成熟体胚4℃冷处理没有促进胚根和上胚轴的发育萌发.在附加0.5 mg·L-1BA和0.25 mg·L-1 IBA的1/2 MS萌发培养基上,体胚萌发率达到65.9%,再生植株转化率达到9.4%.     

Somatic embryogenesis and histological analysis from zygotic embryos in Vitis vinifera L. ''Moldova''

We examined the somatic embryogenesis from and histological studies of zygotic embryos of seeds in European Grape 'Moldova' (Vitis vinifera L. 'Moldova'). Primary calli were initiated on Nitsch and Nitsch (NN) medium supplemented with 1.0mg'L-1 2,4-D and 0.5 mg'L-1 6-BA. Embryogenic calli were produced upon transfer to a NN medium with 0.5 mg-L-1 6-BA and 2 mg.L-1 NAA and somatic embryos were obtained on a half strength MS medium without plant growth regulators. During the somatic embryo germination, an addition of 1.0 mg.L-1 6-BA in the medium could accelerate somatic embryos to develop into normal plants and increase the conversion rate from 0 to 43.3%. Histological studies of embryogenic calli and somatic embryos demonstrated dy-namic changes of proteins and starch grains. The developmental processes of somatic embryos were similar to those of zygotic em-bryos, including typical epiderma, cotyledon primordium and vascular tissue.     

Somatic embryogenesis and histological analysis from zygotic embryos in Vitis vinifera L. ＇Moldova＇

We examined the somatic embryogenesis from and histological studies of zygotic embryos of seeds in European Grape 'Moldova' (Vitis vinifera L. 'Moldova'). Primary calli were initiated on Nitsch and Nitsch (NN) medium supplemented with 1.0mg'L-1 2,4-D and 0.5 mg'L-1 6-BA. Embryogenic calli were produced upon transfer to a NN medium with 0.5 mg-L-1 6-BA and 2 mg.L-1 NAA and somatic embryos were obtained on a half strength MS medium without plant growth regulators. During the somatic embryo germination, an addition of 1.0 mg.L-1 6-BA in the medium could accelerate somatic embryos to develop into normal plants and increase the conversion rate from 0 to 43.3%. Histological studies of embryogenic calli and somatic embryos demonstrated dy-namic changes of proteins and starch grains. The developmental processes of somatic embryos were similar to those of zygotic em-bryos, including typical epiderma, cotyledon primordium and vascular tissue.     

巨桉无性系EG5叶片高效再生体系的建立

以巨桉栽培无性系EG5无菌苗的叶片为外植体进行愈伤组织诱导与植株再生研究。结果表明:愈伤组织高效诱导和不定芽分化的最适培养基为改良MS+0.12 mg·L-1TDZ+0.25 mg·L-1NAA;硝酸铵对EG5叶片愈伤组织生长及植株分化的影响较大,最适宜质量浓度为0.412 5 g·L-1;最佳伸长培养基配方为改良MS+0.3 mg·L-16BA+0.05 mg·L-1IBA+0.3 mg·L-1IAA;暗培养10 d能促进不定芽分化,延缓愈伤组织老化和褐变速度。生根培养基为改良MS+0.4 mg·L-1NAA时生根率最高,为65.47%,移植成活率为90%以上。     

利用悬浮培养和培养基选择改善火炬松的体细胞胚胎发生和植株再生(英文)

三个基固型的火炬松成熟合子胚被培养在附加 8mg·L-12 ,4 D ,4mg·L-1BA ,4mg·L-1KT ,5 0 0mg·L-1水解酪蛋白和 5 0 0mg·L-1谷氨酰胺的愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织 .来自于子叶、胚轴和胚根的愈伤组织在附加 1 6mg·L-12 ,4 D ,0 8mg·L-1BA和 0 8mg·L-1KT的愈伤组织增殖培养基上培养 9周后 ,可获得 16 9%的胚性愈伤组织 .通过建立胚性细胞悬浮系和研究ABA、PEG和活性炭对体细胞胚成熟的促进作用 ,优化的体细胞胚胎发生体系被建立 .71棵再生小苗被用于移栽试验 ,2 3棵小苗在田间移栽成活     

湿地松愈伤组织的诱导研究初报

取湿地松成熟胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的MS培养基上,诱导愈伤组织的最适培养基是MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+0.6%琼脂+25g/L蔗糖。实验同时证明,NAA是胚诱导愈伤组织的必需因子。     

花曲柳体胚发生和植株再生

以花曲柳合子胚的单片子叶为外植体成功诱导出体胚并获得再生植株。未成熟合子胚的子叶在添加400mg·L-1水解酪蛋白、0.25mg·L-16-BA、1.5mg·L-1NAA、70g.L-1蔗糖和6g·L-1琼脂的MS1/2培养基上可以成功诱导产生体胚,诱导率达到34.7%,每个外植体上体胚数量为2～9个。成熟合子胚的子叶在添加0.25mg·L-16-BA、2mg·L-1NAA的MS1/2培养基(其他成分同上)上可以成功诱导产生体胚,诱导率为10.0%。体胚在MS1/2培养基上经过成熟培养后可以正常萌发,萌发率87.6%。萌发的体胚植株在MS1/2+0.01mg·L-1NAA培养基上生长较好,具备实生幼苗的外观特征。经炼苗后的体胚苗移植到栽培基质(草炭土:蛭石:珍珠岩体积比为5:4:1)中可以正常生长,成活率为75.0%。     

Establishment of cell suspension line of Populus tomentosa Carr

Leaves of fine Populus tomentosa genotype TC152 were used as explants to establish cell suspension lines. The effects of plant growth regulators on callus induction and establishment of cell suspension lines were studied. The callus induction rate was the highest on a MS solid medium supplemented with 1.0 mg·L-1 2,4-D. A cell suspension line could be obtained by inoculating calli which were not subcultured into a MS liquid medium supplemented with 1.5 mg·L-1 2,4-D. The best subculture medium was MS + 0.8 mg...