NPY mRNA剪接形式与鸡摄食的关联分析

下丘脑神经肽Y(NPY)是迄今发现的促采食作用最强的神经肽之一,本研究根据鸡NPY mRNA设计引物,分别在肉鸡和蛋鸡下丘脑组织中进行扩增,寻找不同品系鸡NPY mRNA是否存在剪接形式变化,推导对应的氨基酸和蛋白质的结构变化,初步探讨NPY mRNA剪接形式与蛋鸡和肉鸡迥异采食的关联性。结果表明,NPY在肉鸡cDPY3~+端存在两种不同形式的剪接片段,检测出短序列中存在mRNA3~+端终止现象。     

急性热应激对肉鸡肉品质及热休克蛋白108mRNA表达的影响

研究不同强度热应激对肉鸡感官性状、血液生化指标和热休克蛋白(Hsp)108mRNA表达的影响,将80只30日龄的AA肉鸡随机分为4组,每组20只,对照组环境温度为(25±1)℃,其他3组受试鸡的环境温度迅速上升至(33±1)℃、(37±1)℃、(41±1)℃,并分别持续4h的热应激处理。宰杀后测定鸡胸肉的pH值、滴水损失、肉色和剪切力,利用临床血液病理学和荧光定量PCR的方法,检测宰前不同强度热应激对肉鸡血液生化指标及肌肉、心脏和肝脏中hsp108mRNA表达水平的影响。结果显示,宰前热应激明显降低宰后肉鸡胸肉的pH30min、pH24h和a*值,明显提高宰后肉鸡滴水损失、L*值和剪切力;随热应激温度升高,血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)活性逐渐升高,碱性磷酸酶(AKP)活性逐渐降低;hsp108mRNA表达水平大部分呈现下降的趋势,除了心脏33℃组表达量明显增高,其他应激组表达量均有所降低。建立的荧光定量PCR体系特异性好,灵敏度高,符合检测热休克蛋白mRNA转录水平的要求,表明热休克蛋白可作为热应激的一个敏感指标。     

奶牛分娩前后血清中瘦素和神经肽Y的浓度变化规律研究

为了研究奶牛分娩前后瘦素(Leptin)和神经肽Y(Neuropeptide Y, NPY)浓度变化规律,试验选取6头第三胎次的健康荷斯坦奶牛,分别在其分娩前3天(-3天)、分娩当天(0天)、分娩后3,6,9,12,15,18,21,24,27,30天静脉采血,离心分离血清,采用牛瘦素(LEP)与牛神经肽Y(NPY)ELISA检测试剂盒测定奶牛血清中Leptin和NPY的浓度。结果表明:奶牛产后血清中Leptin浓度总趋势呈波浪式下降,在产后3天达到峰值(62.27±10.31)ng/mL,产后30天达到最低值(18.68±1.73)ng/mL,这种变化与奶牛产后能量的摄入相关;奶牛产后血清中NPY浓度在分娩当天达到峰值(886.90±133.56)pg/mL,随后呈波浪式下降,产后30天达到最低值(144.95±36.05)pg/mL,血清中NPY浓度的变化与奶牛产后能量的摄入无关。说明奶牛产后血液中Leptin浓度的变化能够反映奶牛产后能量的波动,而血液中NPY浓度的变化并不能作为奶牛产后能量代谢的指标。     

热应激对肉鸡血清内毒素含量和肝脏中TLR4 mRNA表达的影响

为探讨肉鸡热应激条件下血液内毒素对肝脏TLR4 mRNA表达的影响,我们复制肉鸡热应激模型。应用鲎试剂法和分子生物学等方法检测不同热应激时间段内毒素和TLR4 mRNA表达量的变化。试验结果显示,与对照组相比,热应激组肉鸡血清内毒素与TLR4 mRNA在肝脏中的表达差异均极显著(P0.01)。表明热应激条件下内毒素含量的升高可以对肉鸡肝脏造成损伤。     

亮氨酸对断奶仔猪血浆游离氨基酸浓度变化的影响

选取18头(28±2)d日龄的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪(8.36±0.75)kg,采用完全随机试验设计,将试猪分为3个处理,每个处理6个重复,每个重复1头猪,分别饲喂含合成亮氨酸0、0.27%、0.55%的低蛋白(16.90%CP)日粮,研究其对断奶仔猪采食后4 h内血浆游离氨基酸浓度变化的影响。试验结果表明,当断奶仔猪空腹(0 h)和采食后1 h以内,各组间的氨基酸浓度均无显著性变化(P0.05)。采食后第2 h,中水平和高水平组缬氨酸的浓度显著低于对照组(P0.05),高水平组异亮氨酸的浓度极显著高于对照组和中水平组(P0.01),其余氨基酸浓度无显著差异(P0.05);采食后第3 h,中水平和高水平组缬氨酸和异亮氨酸的浓度极显著低于对照组(P0.01),精氨酸和赖氨酸的浓度均显著低于对照组(P0.05),其余氨基酸浓度无显著变化(P0.05);采食后第4 h,各组氨基酸浓度均无显著差异(P0.05)。     

热应激模型评价及其降低猪采食的机制研究进展

热应激会引起猪采食量降低,严重影响猪的生产性能。生产实践中对猪的营养调控措施尚不能有效缓解热应激效应。综合目前国内外对猪热应激的相关研究发现,现有的热应激模型条件还缺乏统一标准,且多局限在热应激效应的生理生化指标变化的检测与分析。热应激降低猪采食分子机制研究主要集中在热应激对外周采食因子的影响,通过细胞能量感受通路mTOR和AMPK通路作用于采食中枢进而影响采食。热信号在热应激研究中受到广泛关注,下丘脑中热信号和采食信号的互作、传递可作为新的研究方向。本文主要综述了猪的热应激模型评价、热应激影响采食的分子机制研究,为猪生产实践中探索有效的缓解热应激措施提供理论参考。     

高温环境对通城猪血清生化指标及空肠组织HSP70与HSP90 mRNA表达的影响

试验旨在研究热应激对通城猪血清生化指标及空肠组织热休克蛋白HSP70、HSP90 mRNA表达的影响。选取遗传背景相似、100日龄、体重(45±5)kg的通城猪30头,随机分为6组,每组5头,分别为对照组和热应激2、4、6、8、10 d(每天09:00—16:00)处理组。(28±1)℃下适应性饲养7 d,于第8天开始,对照组仍置于(28±1)℃条件下,处理组迅速升温至(38±1)℃,各组每天测定直肠温度、体表温度和呼吸频率,到相应天数屠宰采集样品,进行血清生化指标测定和空肠组织热应激蛋白HSP70、HSP90 mRNA表达水平检测。结果表明:热应激期间,每天14:00通城猪直肠温度和呼吸频率变化最明显,但表皮温度无显著变化;与对照组相比,热应激使血清总蛋白、白蛋白和球蛋白浓度显著降低,第4天达最低值,血清谷草转氨酶浓度在第4天和第10天显著降低,在第8天显著升高,血清碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶浓度随热应激处理时间显著升高,第4天达峰值;空肠组织HSP70、HSP90 mRNA表达水平呈先升高后降低的趋势并分别在第4天达到峰值(P0.05)。结果提示,热应激会使通城猪体温升高,呼吸频率增加并通过血清因子的代谢和HSP70、HSP90的表达来响应热应激的影响,在热应激第4天响应最强烈,第6天以后趋于稳定,说明通城猪在长期热环境下具有较好的调节能力。     

不同温度热应激对肉鸡血液生化指标及肉品质的影响

研究不同温度热应激对肉鸡感官性状及血液生化指标的影响。将80只30日龄的AA肉鸡随机分为4组,每组20羽。对照组环境温度为(25±1)℃,其他3组受试鸡的环境温度迅速上升至(33±1)℃、(37±1)℃、(41±1)℃,并分别持续4h的热应激处理。宰杀后测定鸡胸肉的pH、滴水损失、肉色和剪切力,利用临床血液病理学的方法,检测宰前不同强度热应激对肉鸡血液生化指标的影响。结果显示,宰前热应激明显降低宰后肉鸡胸肉的pH30min、pH24h和a*值,明显提高宰后肉鸡滴水损失、L*值和剪切力值;随热应激温度升高,血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)活性逐渐升高,碱性磷酸酶(AKP)活性逐渐降低。     

Kisspeptin对热应激大鼠脑抗氧化性能和热休克蛋白70 mRNAs表达的影响

本试验旨在探讨神经肽kisspeptin对热应激大鼠脑抗氧化性能、热休克蛋白70mRNA表达及肾上腺、胸腺及脾指数的影响。本试验使用试剂盒检测大鼠脑内GSH-Px、T-SOD活力和T-AOC及MDA含量,并用荧光定量方法检测热应激休克蛋白mRNA的表达。热应激导致脑组织中MDA含量极显著升高,T-SOD、GSH-Px活力及T-AOC极显著下降,热休克蛋白mRNAs表达极显著升高,肾上腺、胸腺和脾指数降低;与热应激组相比,注射kisspeptin热应激组中脑MDA的含量显著减少,GSH-Px、T-SOD活性和T-AOC显著升高,热休克蛋白mRNAs表达显著下降,肾上腺、胸腺和脾指数上升;与对照组相比,单纯注射kisspeptin组中GSH-Px、T-SOD活力和T-AOC显著升高,MDA含量显著降低而热休克蛋白mRNAs并未发生明显变化。以上结果说明kisspeptin可缓解热应激引起的大鼠脑中应激损伤。     

热应激对湘黄鸡血液生化指标的影响

试验旨在探讨热应激对湘黄鸡血液生化指标的影响。将30日龄80只湘黄鸡随机分为2组:对照组饲养室温度(22±1)℃,相对湿度40%~50%;热应激组饲养室温度(31±2)℃,相对湿度80%~90%。试验期为15 d。试验结束时,翅静脉采血,测血液生化指标。结果显示:热应激组血清葡萄糖、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、尿素氮、Mg~(2+)及Cl~-显著高于对照组(P0.05),血液总蛋白、球蛋白、K~+、磷、CO_2分压显著低于对照组(P0.05)。结果提示,热应激导致湘黄鸡血清离子浓度及体内营养物质代谢发生改变。     

急性热应激对鸡呼吸系统损伤及肺脏热休克蛋白表达的影响

为探讨热应激对鸡肺脏组织损伤的影响,将60只35日龄SPF鸡随机分为对照组,热应激1、2、3、5、10 h组,每组10只,试验开始后环境温度迅速从25℃升高到35℃,观察热应激组鸡临床症状,热应激结束迅速剖杀、取病料,检测血清pH值、乳酸脱氢酶(LDH)、钾离子和钙离子浓度,石蜡切片检测肺脏组织结构,Western blot检测肺脏组织中热休克蛋白(HSPs)表达量。结果显示:与对照组相比,热应激组血清pH值显著升高(P<0.05),LDH水平均极显著升高(P<0.01),随着热应激时间增加,血钾和血钙浓度开始降低,热应激5、10 h后血钾和血钙浓度显著减低(P<0.05);病理组织学结果显示热应激后,肺组织内血管充血,肺房结构基本完整,热应激5 h后肺房内有大量的红细胞存在,热应激10 h肺房内的异物减少,但肺上皮细胞大量脱落,组织结构损伤严重;Western blot结果显示与对照组相比,HSP27和HSP72表达量极显著升高(P<0.01)HSP60表达量在热应激1 h后显著升高(P<0.05),随后呈降低的趋势,HSP90表达量在热应激5 h后显著升高(P<0.05),随后呈降低的趋势,HSC70表达量无明显变化。热应激可对鸡呼吸系统造成损伤,提高肺脏HSPs表达量。     

急性热应激鹅心和肝和肺及肾脏组织中HSP70 mRNA及蛋白的表达

选取1日龄健康雁鹅60只,随机分为6组,单笼饲养于环控仓内。6周龄时,A组置于(22±1)℃作为对照,B、C、D、E、F组分别施于2、4、6、8 h和10 h(40±1)℃的急性热应激处理,处理后立即剖杀,取心、肝、肺和肾脏组织,实时荧光定量PCR测定HSP70 mRNA表达量,免疫组织化学方法测定HSP70表达量。结果表明:急性热应激处理可显著提高各组织中HSP70 mRNA及HSP70蛋白的表达水平,但不同组织出现显著变化的时间以及随热应激时间延长的变化规律存在差异。心脏组织HSP70 mRNA和蛋白表达量均在热应激2 h后出现显著升高(P0.05),热应激4 h后达到最高值,8 h后降至对照组水平,遵循二次曲线回归模式;肝脏热应激4~10 h间HSP70及其mRNA均显著高于对照组(P0.05),但未表现出显著的线性与二次回归趋势;肺脏HSP70 mRNA表达水平在热应激2~10 h间显著高于对照组(P0.05),HSP70则从热应激4 h起才显著升高,但二者随热应激时间延长均呈显著的线性升高规律;与肺相似,肾脏HSP70及其mRNA表达量随热应激时间的变化趋势也遵循线性回归模式,两者均在热应激4~10 h显著升高(P0.05)。     

冷应激对湖羊血清因子及热休克蛋白70 mRNA表达的影响

为研究冷应激对湖羊免疫系统及热休克蛋白70(heat stress proteins 70,Hsp70)的影响,试验分别采用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测冷应激前后湖羊肝脏、肺脏、脾脏、淋巴结组织中Hsp70mRNA表达量及血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)浓度。结果显示,与冷应激前相比,冷应激后湖羊肝脏、肺脏及脾脏组织中Hsp70mRNA表达量均极显著增加(P0.01),其中肝脏的表达量尤为显著;冷应激后湖羊血清中IL-2、IL-4的浓度均呈下降趋势,其中IL-4浓度下降尤为显著(P0.01)。结果表明,冷应激条件下湖羊各组织中Hsp70mRNA表达增强,可提高动物机体的自我保护机能,增强对外界不良刺激的抵抗力,但细胞因子IL-2和IL-4的浓度下降,表明冷应激抑制机体免疫系统。     

鸡血清胰高血糖素、胰岛素、瘦素和生长激素释放肽浓度的检测方法研究

蛋鸡和肉鸡的采食量、体重迥异[1],是研究动物采食行为理想的模式动物之一.鸡血液中胰高血糖素(GL)、胰岛素(INS)、瘦素(LEP)和生长激素释放肽(GHR)等激素的水平可以部分反映鸡所处的生理状态,是采食调节的主要末梢信号[2].放射免疫法是利用抗体抗原反应,精确定量微量蛋白质和多肽的方法之一[3],但是,鸡专用的市售放射免疫试剂盒很少,上述指标的检测比较困难.鸡GL、INS、LEP和GHR分别由151、107、163和116个氨基酸组成,与人类对应的激素相比,氨基酸序列的同源性分别为53％、64.49％、79.04％和36.97％.本研究选用市售人抗放射免疫试剂盒,建立鸡血液中GL、INS、LEP和GHR等指标浓度的测定方法,以期为今后开展鸡采食行为学研究提供方法.     

HSP27在热应激致岭南黄鸡雏鸡免疫器官损伤中的作用

为了从热休克蛋白27(HSP27)基因角度揭示热应激致雏鸡免疫器官形态损伤的机制,试验将120只8日龄岭南黄鸡随机分为对照组和热应激组,并构建雏鸡热应激模型,采用组织切片和透射电镜方法对比分析其免疫器官在热应激条件下的显微结构和超微结构变化,并用Real-time PCR方法检测HSP27基因在免疫器官中mRNA的表达差异。结果表明:同日龄阶段比较,热应激组免疫器官发育不良,胸腺细胞数量减少,Hassall氏小体严重退化,胸腺细胞凋亡及坏死数量增多,染色质发生聚集,细胞器肿胀变性;脾脏组织疏松,脾小结生发中心不明显,动脉周围淋巴鞘变薄,淋巴细胞结构疏松,胞核内异染色质减少,线粒体数量增多、结构异常;法氏囊中淋巴滤泡数量减少,皮质和髓质分界模糊,淋巴细胞染色质聚集,胞浆中粗面内质网上核糖体脱落,线粒体肿胀空泡化。法氏囊中HSP27 mRNA相对表达量逐渐降低,在热应激第21天时相对表达量显著高于第28,35天;脾脏中HSP27 mRNA相对表达量逐渐升高,在第35天时相对表达量显著高于第21,28天;胸腺中HSP27mRNA相对表达量与日龄无明显关联,在第28天时相对表达量最低且显著低于第21天和第35天。说明热应激会造成岭南黄鸡雏鸡免疫器官损伤,而HSP27在这一过程中扮演着重要角色。     

纤维寡糖和益生菌对热应激肉鸡营养物质消化、肠黏膜氨基酸转运载体mRNA表达和氮排放的影响

本试验旨在研究益生菌(PRO)和纤维寡糖(COS)对热应激肉鸡营养物质消化、肠黏膜氨基酸转运载体mRNA表达和氮排放的影响.将900羽21日龄罗斯(Ross) 308肉鸡分为5个组:热中性(TN)组、热应激(HS)组、益生菌(HS+0.15％ PRO)组、纤维寡糖(HS+0.15％ COS)组、合生素(HS+SYN,SYN=0.15％ PRO+0.15％ COS)组.热中性组鸡舍温度22℃;其余各组鸡舍为循环热应激,温度08:00-18:00为33℃,18:00-次日08:00为22℃.饲养试验期为21d.结果如下:1)与热中性组相比,热应激组肉鸡平均日增重和平均日采食量分别显著降低10.65％ (P＜0.05)和8.04％ (P＜0.05),单独添加益生素或者纤维寡糖对肉鸡平均日增重、平均日采食量和料重比均无显著影响(P＞0.05);热应激组粗蛋白质和粗纤维表观消化率显著下降(P＜0.05);热应激组氮摄入量和氮沉积量显著降低(P＜0.05),氮排泄量和排泄率及排泄物氨态氮和尿酸含量显著提高(P＜0.05);热应激组排泄物脲酶活性和鸡舍氨气浓度显著提高(P＜0.05);热应激组肠黏膜基础氨基酸运载体(rBAT)、y+L氨基酸运载体-2(y+LAT2)、阳离子氨基酸运载体-1(CAT1)和阳离子氨基酸运载体-4(CAT4) mRNA表达量显著降低(P＜0.05).2)与热应激组相比,益生菌组和纤维寡糖组粗蛋白质表观消化率显著升高(P＜0.05),氮排泄量和氮排泄率显著降低(P＜0.05),氮沉积量显著升高(P＜0.05);益生菌组排泄物氨态氮含量显著降低(P＜0.05);纤维寡糖组鸡舍氨气浓度、排泄物脲酶活性显著降低(P＜0.05).3)与热应激组相比,合生素组粗蛋白质和粗纤维表观消化率显著升高(P＜0.05),氮排泄量、氮排泄率显著降低(P＜0.05),氮沉积量显著升高(P＜0.05),鸡舍氨气浓度、排泄物氨态氮含量和脲酶活性显著降低(P＜0.05),肠黏膜rBATmRNA表达量显著升高(P＜0.05).结果提示,热应激使肉鸡营养物质消化率下降和氮排放升高,益生菌和纤维寡糖不同程度地改善了热应激引起的上述不良影响,两者组合添加效果优于单独添加.     

热休克蛋白70在热应激鸡原代心肌细胞中的表达与定位

为研究热应激后鸡原代心肌细胞中热休克蛋白70(HSP70)的表达量及其定位的变化,试验将体外培养的鸡原代心肌细胞分为6组,其中1组作为对照(未进行热应激处理),其余5组于42℃热应激处理0.5,1,2,4,8 h,Western-blot检测HSP70在6组鸡原代心肌细胞中的相对表达量,间接免疫荧光法测定热应激处理1 h后HSP70在鸡原代心肌细胞中的定位。结果表明:热应激后HSP70在鸡原代心肌细胞中的表达量呈先上升后下降趋势;与对照相比,热应激8 h后鸡原代心肌细胞的HSP70表达量显著降低(P0.05);HSP70在对照与热应激1小时时的心肌细胞中均有表达,且在细胞浆与细胞核中均有分布,但主要分布于细胞浆中。说明热应激对HSP70在鸡原代细胞中的表达产生影响,但对其在细胞中的分布无明显影响。     

阴外动脉灌注氨基酸、葡萄糖混合物对奶山羊血浆总蛋白、白蛋白及相关激素受体mRNA表达量的影响

本试验旨在研究阴外动脉乳成分前体物浓度的变化对奶山羊乳腺吸收及相关激素受体mRNA表达量的影响.选用2～3岁,体重、产奶量相近、安装有阴外动脉和腹部皮下静脉血插管的关中奶山羊3只,由阴外动脉灌注氨基酸和葡萄糖混合物,在灌注前后分别采集动静脉血浆、乳腺组织,测定动静脉血浆中总蛋白、白蛋白的含量及乳腺组织β-酪蛋白、催乳素受体、生长激素受体和类胰岛素生长因子Ⅰ的mRNA表达量。结果表明,与灌注前相比,乳成分前体物含量及乳腺对其的摄取量均提高(P<0.05).乳腺组织中β-酪蛋白、生长激素受体和类胰岛素生长因子Ⅰ的mRNA表达量显著提高(P<0.05),催乳素受体的mRNA表达量极显著提高(P<0.01),说明阴外动脉灌注氨基酸、葡萄糖混合物可以显著地提高乳成分前体物的浓度,有效地刺激血液中激素发生变化,提高乳腺组织中相关受体mRNA的表达.     

蛋鸡应激控制

鸡群应激通常指鸡正处于不舒适的状态。鸡应激时,身体会发生一些变化,如血压和血液组成改变,必需营养成分如盐、蛋白质排泄增加,采食和饮水可能下降,生长或生产可能停止。易感疾病。     

短期热应激对肉仔鸡生长性能及腺苷酸活化蛋白激酶信号通路的影响

本试验旨在研究短期热应激对肉仔鸡生长性能及食欲中枢腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。选取体重相近的28日龄雄性爱拔益加肉仔鸡72只,随机分为热应激组和对照组,每组6个重复,每个重复6只鸡。热应激组温度设定为(33±1)℃,对照组温度设定为(25±1)℃,试验持续10 h。试验结束后,统计肉仔鸡生长性能,每个重复取1只鸡采集血浆和下丘脑样品,测定血浆尿酸(UA)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TCHO)含量,检测下丘脑大麻素1(CB1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、AMPKα1、AMPKα2、肝激酶B1(LKB1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、糖皮质激素受体(GR)的mRNA相对表达量和AMPK磷酸化水平。结果表明:1)与对照组相比,热应激组肉仔鸡体增重和采食量显著降低(P0.05)。2)与对照组相比,热应激组肉仔鸡血浆UA、GLU和TCHO含量均显著提高(P0.05)。3)与对照组相比,热应激组肉仔鸡下丘脑中AMPKα1和G R的mRNA相对表达量显著降低(P0.05),热应激组肉仔鸡下丘脑中AMPK磷酸化水平显著降低(P0.05),热应激组肉仔鸡下丘脑中LKB1、AKT1、mTOR、CB1和AMPKα2的mRNA相对表达量均无显著差异(P0.05)。由此可见,短期热应激能显著降低肉仔鸡生长性能和下丘脑中AM PK磷酸化水平,显著降低下丘脑中AMPKα1和GR的mRNA相对表达量,提示AMPK信号通路可能参与短期热应激抑制肉仔鸡食欲的调控过程。