木麻黄青枯菌的根表吸附及根内增殖与其致病性关系

对 3个不同致病的青枯菌菌株和 7个不同抗病性的木麻黄无性系苗的研究得出 ,各菌株对寄主根表吸附量具有显著差异 ,吸附量与致病性呈负相关 :各菌株在寄主根内的增殖量差别明显 ,增殖量与致病性呈正相关。病菌脂多糖 (LPS)对幼苗根的预处理 ,可使其供体菌的吸附量减少5 8.5 %　 97.3% ,但胞外多糖 (EPS)对供体菌的吸附量无明显影响。洗去EPS和LPS的菌体较完整菌体对根表的吸附量减少 6 3.3%　 74 .2 %。而仅洗去EPS的菌体对根表的吸附有所增加 ,最高达19.1%。各菌体SDS PAGE电泳图谱显示出一定差异 ,其中强毒菌株 6 0 1B具有Rf=0 .35的特异谱带。结果表明青枯菌对木麻黄的致病性与其在寄主根表的吸附情况和在根内的快速增殖具有密切关系。LPS在此病理系统中 ,起着细菌识别因子的作用 ,EPS对LPS进行掩盖 ,二者都是病菌致病性的重要因子     

木麻黄对青枯菌的水平及垂直抗性研究

６个青枯假单胞杆菌菌株对７个木麻黄无性系的交互接种试验表明，病害的相对强度在无性系与菌株间存在着显著性差异，无性系与菌株之间的交互作用也极显著。结果说明在木麻黄－青枯菌病理系统中，同时存在着水平抗性和垂直抗性或水平致病性与垂直致病性；这一交互作用特征的揭示对于木麻黄的抗病育种及防滑战略具有重要意义。     

木麻黄无性系对青枯菌抗性及菌株变异初探

用３个青枯菌菌株，对７个木麻黄无性系作接种测试和菌株兔血清双向琼脂扩散试验，结果表明：木麻黄无性系对青枯菌的抗性以水平抗性为主，也存在垂直抗性；３个菌株致病力顺序与其来源无性系的抗病力顺序相一致，菌株对来源无性系接种死亡率显著高于其它菌株，显示了寄主与病原物相关变异的迹象。从同一地点不同无性系分离的菌株，存在抗原──抗体差异，表明在高抗无性系的选择压力下，青枯菌可能发生变异，而形成能克服特定抗病无性系的菌株。     

木麻黄青枯病菌的分离及强致病菌株的筛选

[目的]筛选出强致病菌株用于木麻黄抗病育种研究工作。[方法]在广东沿海木麻黄青枯病发病区采集病根,开展病原菌两种不同分离方法的比较研究,对分离出的31个病株进行16s rRNA测序鉴定及致病性测定。[结果]采用稀释分离法及根系溢出法在TTC培养基上共分离出了31个病原菌株,根系溢出法操作简便,杂菌含量低,分离率在60%左右,可作为常规稀释分离法的补充。31个菌株进行分子鉴定,只有22个菌株扩增出了特异性条带,经测序比对确定这22个菌株为青枯菌。青枯菌株致病性测定结果显示菌株致病性在无性系间、菌株间及菌株与无性系间的交互作用均具有极显著差异(P0.01),不同接种方法间菌株致病性相关系数值较小,介于0.496 6~0.731 0之间,即室内水培接种与小苗盆栽接种不存在密切的直线相关关系。[结论]综合选择在不同无性系及不同接种方法中均具有较强致病性的GL-2、H、M、TC-1、F、Q菌株作为下一步木麻黄种质资源抗性鉴定及抗病育种研究试验菌株。     

青枯菌对桉树及非寄主树木根部吸附和侵入的比较

通过接种青枯菌与非病原的大肠杆菌,对2个桉树无性系和1种非寄主树木的根表吸附菌量及根内含菌量进行测定.结果表明:青枯菌对感病寄主根表的吸附量多于对抗病寄主和非寄主根表的吸附量,对感病寄主根部的侵入量多于对抗病寄主但少于对非寄主根部的侵入量;病原菌较非病原菌对感病寄主根表的吸附量大,但二者对感病寄主根部的侵入量则依据根部伤口的有无而互有高低.青枯菌接种24 h内,感病寄主根表吸附菌量和根内含菌量呈上升趋势,在抗病寄主及非寄主根表的吸附菌量和根内含菌量却呈下降趋势.从统计学上看,青枯菌对寄主根部的吸附和侵入都显示出了一定的选择性,但由于病原细菌能够大量地吸附和侵入抗病寄主和非寄主根部,非病原细菌也能够大量地吸附和侵入桉树根部,因此这种选择性的生物学意义不大,青枯菌对桉树根表没有表现出明显的识别行为.     

胞外多糖和脂多糖在青枯菌对尾巨桉根部吸附和侵入过程中的作用研究

通过测定青枯菌的根表吸附量和根部侵入量,研究了胞外多糖(EPS)和脂多糖(LPS)在青枯菌对尾巨桉根部吸附和侵入过程中的作用.结果表明:在接种青枯菌的6 h内,EPS处理后尾巨桉根部青枯菌GN1和93B的吸附量和侵入量明显升高,而LPS处理后尾巨桉根部GN1和93B的吸附量和侵入量都明显下降;无EPS菌株的根表吸附量和根部侵入量都明显降低,无EPS及LPS菌株的根表吸附量和根部侵入量亦有所下降,但没有无EPS菌株下降明显;EPS具有促进青枯菌对尾巨桉根部吸附和侵入的作用,LPS则具有抑制作用.     

桉树青枯菌菌株致病性分化与其菌量增殖及胞外多糖产量的联系

通过对桉树无性系剪根苗接种青枯菌Ralstonia solanacearum2个菌株后测定菌株的致病性、茎内的细菌数量得到，两菌株具有明显的致病性分化，强致病性菌株在剪根苗基部、中、上部的细菌数量都显著高于弱致病性菌株；2个菌株的细菌数量从茎基部到上部呈逐渐降低的趋势，木质部的含菌量比韧皮部高。通过提取和测定2个菌株胞外多糖（EPS）产量得到，强致病性菌株EPS的总产量及单个细菌EPS产量都高于弱致病性菌株。试验揭示青枯菌菌株的致病性分化与其在桉苗茎内的增殖扩散数量及其EPS的产量有着一定联系。     

普通木麻黄对青枯病的抗性及其生理生化机制的初步研究

对选自平潭县青枯病严重发病区的普通木麻黄(Casuarina equisetifoliaForst)优树子代不同无性系的幼苗经青枯假单胞菌(Pseudomonas solanacearum E.F.Smith)人工二次接种后,发病症状大致可以划分为青枯、萎蔫、部分枝枯和正常生长四个类型,其对青枯病的抗性有差异。我们选择经二次人工接种后表现出典型的不同抗病性的4个普通木麻黄无性系和华南农学院梁子超教授经多年筛选的1个普通木麻黄抗病无性系,对其一年生幼苗的根、主茎和小枝进行含水量、pH值、细胞相对渗透性及多酚类物质含量的测定,并对各无性系小枝的组织结构进行观察。结果表明,不同抗病性普通木麻黄5个无性系在含水量、pH值、细胞相对渗透性及多酚类物质含量等均存在差异;其小枝的组织结构无明显差异。这些差异初步阐明了普通木麻黄5个无性系抗病性的机理,可作为早期测定普通木麻黄对青枯病抗性的参考指标。     

青枯菌胞外酶对木麻黄的致病作用研究

对三个致病性不同的木麻黄青枯菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ Ｅ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ产生的胞外酶活性测定显示,聚半乳糖醛酸酶（果胶酶）在活性在各菌之间无明显差别,但纤维素酶活性差别明显,并随菌株的致病性上升而增加,菌株致病性与酶活性具有高度正相关。     

木麻黄青枯病菌(Pseudomonas solanacearum E.F.Smith)毒性菌株的筛选

接种实验发现,木麻黄青枯病菌存在着强致病性、弱致病性、非致病性菌株之分。致病性不同的三个菌株进行电镜观察,菌体在形态上存在差别;不同菌株的培养性状观察,菌落在形状、颜色、流动性上有差别。毒性菌株保存实验结果以在无菌蒸馏水中室温保存为好,二年不丧失致病性,分离毒性菌从病苗上比从成年发病株上容易。     

桉树青枯病病原菌的分子鉴定及其致病性测定

对华南4个地区的桉树青枯病病原菌进行了分子鉴定和致病性测试研究,以期为有效预防其发生提供依据.分别对来源于不同区域的11株桉树青枯病病原菌进行分子鉴定和致病力强弱测试比较,11株病原菌与Ralstonia solanacearum序列形成支持率为86％分枝,表明其病原菌16S rRNA基因序列与Ralstonia solanacearum具有高度同源性.以桉树无性系DH32-29组培苗为材料,采用伤根法对11个菌株进行致病力测试,不同菌株间在致病性上差异显著(P＜0.01或P＜0.05),以发病高峰期、高峰期发病率和平均发病率进行K-均值聚类分析(K=3),结果表明来源于广东、广西、海南的各菌株间致病性存在差异,HY01、HY02、DA01、HP04菌株与HP05分为1类,DA02和DA03为第2类,而YJ01、HP01、HP02和HP03为第3类.对4个不同地区(采样点)的青枯病菌株平均发病率进行方差分析,结果发现来源广东阳江菌株致病性显著地低于其他来源菌株.不同地理来源菌株之间在致病性上无明显相关性,同一地区内同时存在着致病力强弱菌株,HP03的生物型4-1菌株与其他生物型3菌株在致病性亦无明显的差别.     

桉树抗青枯病的鉴定技术

采用菌液浸泡法、顶尖接种法对不同的桉树无性系盆栽苗和生根组培苗进行抗青枯病性能测定,并结合林间调查筛选桉树抗青枯病树种和无性系,并从根系分泌物和组织研磨液的角度研究其对桉树青枯病菌生长的抑制作用,探索不同抗性桉树无性系抗病性强弱与其根系分泌物和组织研磨液之间的关系。结果表明:供试的18个桉树无性系中,bd1、bd2、赤桉和南宁巨尾桉为抗病无性系;U6、南宁尾叶桉、雷9、钦32-29为中抗无性系;DH32-27、钦9、南宁广9、钦8、邓恩桉、钦32-22、雷2、巨桉、尾叶桉和钦广9为感病无性系。不同抗性桉树无性系根系分泌物和组织研磨液对青枯菌没有直接拮抗作用,但随着接种时间的延长,青枯病菌在抗病性强的无性系的根系分泌物及组织液中的增殖显著低于感病无性系,验证通过茎段浸泡接种筛选出的桉树无性系的准确性,同时表明根系分泌物和组织研磨液可以反映桉树不同无性系的抗病性强弱。     

抗病和感病泡桐无性系组培苗对嫁接传染植原体的不同反应

用感染了植原体并表现典型丛枝症状的组培苗作接穗或砧木，在无杂菌条件下嫁接７个表现不同田间抗性的无性系健康组培苗，并用ＤＡＰＩ荧光显微镜和１６ＳｒＲＮＡ基因扩增（ＰＣＲ）技术检验嫁接传病效果。Ｃ１２５和ＸｕＨ表现出较强的特异性接种诱发坏死反应，ＺＨ和Ｔ３５０２８坏死反应中等，ＱＬＭ、Ｃ０２０和Ｃ１６１的坏死反应较弱。培养基中添加植物生长调节剂（６ＢＡ或ＮＡＡ）可降低坏死程度，提高嫁接成功率，水杨酸处理或去掉健株砧木叶片和根系皆加重坏死反应程度。用病接穗嫁接抗病的ＱＬＭ无性系时，用ＰＣＲ检测到侵染砧木的植原体，但未表现丛枝症状，而将此无性系健康接穗嫁接到丛枝病砧木上时可诱致典型丛枝症状，从而表现出与根系和成熟叶相关的抗性反应。除Ｃ１２５外，其余６个无性系皆被嫁接传染，其继代培养表现出差异不显著的丛枝症状，其韧皮部金黄色自发荧光随着症状的加重而累积，也与抗病性有一定的联系。     

多粘类芽孢杆菌对木麻黄青枯病的抑菌防病作用

室内测定了商品化生物农药多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂对木麻黄青枯病病原菌的毒力。采用打孔法结果表明,多粘类芽孢杆菌对木麻黄青枯病病原菌具有良好的拮抗作用,其抑菌圈的平均直径达到9.4 mm。采集4个品系的木麻黄小枝水培生根后进行温室盆栽,采用改进的伤根淋菌法进行接种,以只施多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂(CK1)和只接种青枯菌(CK2)为对照,施用多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂后接种青枯菌为处理进行实验。结果表明,在两个时间点,湛江-3的防效达到了60.8%和51.6%;湛江-2的防效达到了41.5%和40.3%;广东A14的防效达到了28.8%和23.3%,差异均显著(α=0.05);广东701-3的防效为16.3%和26.8%,差异不显著,出现此原因是广东701-3抗性强于其他3个品系。综上所述,在盆栽试验中,多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂对木麻黄青枯病有显著的防治效果,品系本身越感病,防效越高。     

Multiplex real-time PCR detection of pathogen colonization in the bark and wood of Picea sitchensis clones differing in resistance to Heterobasidion annosum

A quantitative multiplex real-time polymerase chain reaction (PCR) procedure was developed to assess the extent of Heterobasidion annosum (Fr.) Bref. growth in Sitka spruce (Picea sitchensis (Bong.) Carr.) bark and wood and to determine correlations between lesion length and fungal colonization. Based on lesion length and real-time PCR, the responses of four 3-year-old Sitka spruce clones to inoculation with H. annosum were characterized as showing either resistance or susceptibility to the pathogen. In susceptible clones, the extent of bark colonization did not differ from the visible length of the bark lesion, whereas lesions were longer than the extent of fungal colonization in resistant clones. The resistant clones contained considerably less fungal DNA than the susceptible clones, relative to the amount of host DNA in both the bark and the wood, indicating less resistance and more host cell death in the susceptible clones following inoculation. In both resistant and susceptible clones, fungal colonization in the wood extended beyond the visible necrotic lesion in the bark, indicating that host defense responses are weaker in wood than in bark. The spread of the pathogen in both bark and wood was less in the resistant clones than in the susceptible clones, indicating that defenses in both bark and wood of the resistant clones were superior to those in the susceptible clones.     

我国桉树青枯病研究进展

桉树青枯病害是危害桉树生产的主要病害,近年来桉树青枯病的流行和发生对我国南方桉树产业造成很大经济损失.本文对当今主要桉树青枯病病害特点,青枯病的发生和流行因素,青枯假单胞杆菌对寄主桉树的致病机制及对抗病的差异和抗病机理等研究成果和现状作一概述,并就存在的问题提出相应的建议.     

杨树无性系根系吸收H2PO4-动力学特征与磷营养效率

在温室条件下,应用整株植物长期吸收的营养液培养方法研究杨树无性系根系吸收H2PO4-动力学特性及其与磷营养效率的关系,以揭示杨树不同无性系间磷营养效率差异的机理.结果表明,高效型无性系S17、S19和105根系对H2PO4-离子的吸收能力明显强于低效型无性系106、797、Ⅰ-69、1388和3244.与低效型无性系相比,S17、S19和105具有较小的米氏常数Km和吸收临界浓度Cmin,说明它们的根系对H2PO4-的亲合力、对低磷浓度的耐受能力较强.在缺磷胁迫条件下,S17、S19和105根系系统对H2PO4-的亲合能力可增加20%以上,其Km值分别从13.8、13.4和14.0 μmol·L-1下降到10.1、10.7和11.2 μmol·L-1,而低效型无性系的亲合力则变化很小,增加不足5%.同样,高效型无性系对低磷的耐受能力可增加85%以上,其Cmin分别从2.55、2.94和2.68 μmol·L-1下降到0.30、0.35和0.40 μmol·L-1,但低效型无性系的增加均不足15%.杨树无性系在根系吸收H2PO4-动力学特性方面的不同是其磷营养效率差异的重要原因之一.最大吸收速率Vmax,作为根系吸收动力学参数之一,对阐明杨树无性系磷营养效率的作用尚不够确定.