雪龙黑牛活体采卵与屠宰采卵在体外受精技术中的应用研究

利用超声波活体采卵技术(ovum pick-up,OPU)对12头纯种雪龙黑牛间隔4d采卵2次,对51头F2代遗传性能优秀的雪龙黑牛每周采卵1次,并对活体采卵与屠宰采卵及体外受精后胚胎的发育进行了对比分析.结果表明,活体采卵第2次卵泡数比第1次多82个,而获得的卵母细胞数第2次比第1次少1 2枚;屠宰采卵优秀卵母细胞率高于活体采卵,并且囊胚发育率高于活体采卵.     

黄牛利用活体采卵的应用研究

应用活体采卵仪对两组黄牛进行活体采卵.对黄牛每周2次和每周1次进行活体采卵,平均获卵分别为5.30枚、4.75枚,两者比较差异不显著(P>0.05);回收率分别为64.92%和81.85%,每周1次采卵回收率显著高于每周2次(P<0.05);优质卵母细胞率分别为80.12%和65.79%(P<0.01).健康和非健康牛只采卵,平均获卵母细胞数分别为6.71枚、5.10枚(P<0.05);回收率分别为65.28%、62.20%,无明显差异(P>0.05);优质卵母细胞率分别为79.91%、73.37%,差异不显著(P>0.05).     

水牛活体采卵及体外受精研究

应用B型超声波采卵法进行水牛活体采卵,42头3～17岁良种水牛间隔3 d采卵1次,连续采卵2～3次,共进行96次,穿刺卵泡762个,回收卵母细胞513枚,其中可用卵母细胞305枚,回收率67.3%,可用卵占回收卵总数59.5%,平均每头次获卵母细胞5.34±4.25枚,其中可用卵母细胞3.18±2.89枚.采集的可用卵母细胞以MC和SOF 2种系统培养,受精分裂率和囊胚率分别为45.2%、30.6%和70.8%、18.8%.用8枚胚胎移植受体母牛8头,妊娠2头,产下了世界第1例由沼泽型水牛孕育生产的河流型水牛.     

促卵泡素对摩拉水牛超数排卵的试验初报

用20毫克促卵泡素（FSH）对河流型乳用水牛进行超数排卵，采用递减法连续注射4天（8次），可达到超排效果，共处理3头牛，其中屠宰1头经卵巢计数排卵14枚，闭锁卵泡2枚；直肠检查2头平均排卵5．15枚，闭锁卵泡2枚。在采用卵方法上，外科手术冲洗输卵管1头，共回收卵子2枚；非外科手术采卵2头，1头回收未受精卵子5枚，另一头回收32细胞胚胎2枚。     

水牛活体采卵体外生产胚胎技术

本研究应用B超引导阴道穿刺法,对40头尼里-拉菲和摩拉水牛连续3次采卵,采卵间隔为3 d.共采卵120头次.共穿刺卵泡935个,采集卵母细胞643枚,可用卵母细胞为456枚,卵母细胞回收率为68.77%(643/935),卵母细胞可用率为70.92%(456/643),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个.第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P＞0.05).收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细胞单层体外共培养,受精后48 h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456).2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异.这表明,在B超引导下进行连续活体采卵,并利用卵母细胞进行体外受精生产胚胎是可行的. 3),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个.第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P＞0.05).收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细 单层体外共培养,受精后48 h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456).2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异.这表明,在B超引导下进行连续活体采卵     

促卵泡素诱导羔山羊卵泡发育及活体采卵研究

对8只131￣150日龄山羊采用5 mg FSH诱导卵泡发育后,采用手术法间隔7 d进行采卵,第1￣4次诱导卵泡发育的可用卵泡数分别为(20.1±5.6)、(15.5±3.2)、(9.3±3.7)、(8.7±2.5)个,回收可用卵母细胞数分别为(11.1±3.2)、(8.3±1.8)、(6.6±3.7)、(6.0±1.7)枚,随采卵次数增加,每只羊的可用卵泡数呈下降趋势;不同采卵次间卵泡直径、回收卵母细胞的可用率无显著性差异。26次采卵抽吸卵泡376个(14.5个/只.次),回收COCS279枚(10.7枚/只.次),回收可用COCS 219枚,每只羊每次采卵获可用卵8.4枚,卵母细胞回收率和可用率分别为74.2%和78.5%;不同个体间回收率和可用率无显著性差异。     

优势卵泡与促卵泡素对牛活体采卵效果的影响

将8头荷期坦供体奶牛随机分为4组,每组2头,分别按优势卵泡+注射促卵泡素(FSH)、优势卵泡+不注射FSH、去优势卵泡+注射FSH、去优势卵泡+不注射FSH处理供体牛,处理后第4天应用B型超声波导引活体采卵,试验重复10次。结果显示:注射FSH前去优势卵泡对其可采卵泡数、回收卵母细胞数和可用卵母细胞数均有显著提高(P0.05),但不注射FSH时去优势卵泡对提高采卵效率无显著效果;活体采卵对供体牛卵巢虽造成一定损伤,但停止采卵2~3个月后均能恢复正常发情、配种后能正常妊娠,对供体牛繁殖性能无显著影响。     

牛活体采集卵母细胞技术的研究

本研究利用自制采卵器对 2 4头健康牛和 2 0头有生殖障碍牛进行活体采集卵巢卵母细胞试验。卵母细胞回收率 4 2 .9% ,共采集卵母细胞 397枚 ,其中可用卵 2 6 6枚 ,占 6 6 .7% ,平均每头母牛获卵母细胞和可用卵母细胞数分别为 9.0 2枚和 6 .0 4枚。采集的卵母细胞经体外受精和体外培养 ,移植受体母牛 ,成功地分娩了我国第一头活体采卵牛犊     

高产奶牛连续活体采卵及卵母细胞体外受精研究

在超声波扫描仪的指导下,用双孔型采卵针以11.3～12.0kPa抽吸压经阴道对8头高产奶牛分别连续实施7次活体采卵,每4d1次,共采集卵子340个,占可见卵泡数的53.5%.每次头均采集卵子6.1个.卵子经过体外培养、体外受精、体外受精胚体外发育培养,于体外受精后48h、168h统计的卵裂率、囊胚发育率分别为75.0%和29.7%.研究结果表明,在超声波扫描仪指导下对奶牛连续进行活体采卵,将所得卵子进行体外成熟、体外受精、体外培养,在生产中是可行的.     

高产奶牛连续活体采卵及卵母细胞体外受精

在超声波扫描仪的指导下,用双孔型采卵针以 １４．７ ｋ Ｐａ 抽吸压经阴道对 ５ 头高产奶牛分别连续实施 ７ 次活体采卵,每 ７ ｄ １ 次,共采集卵子 ２１４ 个,占可见卵泡数的 ５３．９％ ,每次头均采集卵子 ６．１ 个。卵子经过体外培养、体外受精、体外受精胚体外发育培养,于体外受精后 ４８ ｈ 、１６８ ｈ 统计的卵裂率、囊胚发育率分别为 ７５．２％ 和 ２９．７％ 。研究结果表明,在超声波扫描仪指导下对奶牛连续进行活体采卵是可行的,所得卵子应用体外成熟、体外受精、体外培养技术,可生产用于冷冻或移植的胚胎。     

奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果比较

先利用屠宰场卵巢获得的卵母细胞进行体外培养试验.在建立了培养体系获得较稳定的囊胚率的基础上,再利用具有优良乳用遗传性状的老龄奶牛进行活体采卵(OPU),获得的卵子进行体外胚胎生产,对奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果进行了比较.同时对奶牛重复OPU的效果及OPU卵子的培养天数对妊娠率的影响因素等进行探讨,试图为研究和生产建立一个高效的活体采卵体外胚胎生产方法.结果表明:(1)活体采卵获得的卵母细胞从形态以及后期的发育情况均明显差于屠宰场卵巢获得的卵子;OPU法的卵裂率、囊胚率(70.5%、18.3%)明显低于从屠宰场卵巢获得的卵子的卵裂率、囊胚率(75.1%、34.8%)(P＜0.01).(2)不同个体采集卵子数量差异明显(5.92枚/头与1.4枚/头)(P＜0.05).(3)同一头奶牛每次采卵数之间无显著差异,但有波动性变化.(4)奶牛OPU卵子经培养在第6 d或第7 d发育至囊胚的胚胎移植妊娠率高于第8 d发育至囊胚的胚胎.     

用B型超声波导引活体采集奶水牛的卵母细胞

本试验利用B型超声波导引活体采集42头奶水牛的卵母细胞,每头牛每周采卵2次,共采卵96次,卵母细胞回收率67%,可用卵母细胞数平均为3.1,成熟培养的囊胚率平均为24.7%.对水牛的卵巢观察结果表明活采对水牛的健康及生殖机能不产生影响.     

影响水牛活体采卵效果的因素研究

为探讨不同采卵季节、供体牛年龄和连续采卵时间3个因素对水牛活体采卵效果的影响,本实验选择3～12岁、体重400～700 kg的尼里拉菲水牛52头（其中3～7岁40头、8～12岁12头）,根据单因子完全随机试验设计进行分组,分别观察不同采卵季节、供体牛年龄、连续采卵3个月以下（包含3个月）和3～9个月时间对活体采卵效果的影响。结果表明：冬季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均高于春季（P<0.05）和夏季（P<0.01）,且夏季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均低于其他季节（P<0.01）;3～7岁牛的头均可用卵母细胞数比8～12岁牛的多1.78枚（P<0.05）;活体连续采卵时间在3个月以下（包含3个月）的卵母细胞可用率比连续采卵3～9个月的多8.03(P<0.01)。可见,一年四季都可进行水牛活体采卵,但秋、冬季进行活体采卵较为适宜;3～7岁年龄段牛做供体的活体采卵效果更佳;卵母细胞可用率会随着连续采卵时间延长而明显下降,建议同一批牛连续采卵不超3个月。     

奶水牛超数排卵试验效果分析

本试验以杂交奶水牛及纯种奶水牛作为供体牛,采用日本生产的FSH作为外源激素进行超数排卵,研究确定了胚胎移植供体牛超数排卵、人工授精、采胚等效果。试验结果表明,5头奶水牛供体牛进行超排,共采卵7头次,采卵数21枚,其中10枚可用胚胎,平均1.4枚/头次,可用胚率为47.6%。     

肉牛B超活体取卵效果的研究

对肉牛 (莫累灰×婆罗门 )利用B超活体取卵 ,研究不同年龄和促卵泡素 (FSH)对平均卵泡数、平均卵母细胞数、平均可利用卵母细胞 (COC)数、卵母细胞回收率、COC回收率、囊胚率和平均囊胚数的影响。结果表明 :肉牛B超活体所取卵的数量和质量受年龄的影响 ,青年牛好于经产牛 ,经产牛好于老年牛 ;适量注射FSH可以提高经产牛和老年牛的囊胚率和 (或 )平均囊胚数     

采卵季节对水牛活体采卵及其体外受精效果的影响

为探讨采卵季节对水牛活体采卵及其体外受精效果的影响,本研究选自2006-2008年78批次的626头牛活体采卵收集3143枚卵母细胞数据和同一操作者的51批次共培养1366枚卵母细胞的体外受精生产胚胎数据,并根据水牛繁殖特点和发情规律,每年分为3个阶段,即春季(1～4月),夏季(5～7月)和秋冬季(8～12)3个季节进行统计分析。结果发现,水牛活体采卵和体外受精效果受季节影响较大。在秋冬季进行活采时,平均头次获卵母细胞总数和可用卵母细胞数分别为(5.88±2.84)枚和(3.56±1.51)枚,平均头次卵母细胞总数明显高于夏季的(3.72±1.58)枚(P<0.01),但与春季的(4.80±1.77)枚差异不显著(P>0.05),而头均可用卵母细胞数则高于春季的(2.77±1.19)枚(P<0.05)和夏季的(2.11±1.11)枚(P<0.01);季节之间卵母细胞可用率没有差异(P>0.05);虽然每个季节活体采卵体外受精卵分裂率没有差异(P>0,05),但在秋冬季采卵时,其囊胚率(27.09%)则明显高于春季(20.95%)和夏季(20.45%),P<0.05,而春季和夏季之间没有差异(P>0.05)。研究表明:一年四季都可以进行水牛活体采卵体外生产胚胎,但从采卵效果和胚胎生产效率上看,在秋冬季进行活体采卵效果最好。     

奶水牛超数排卵与胚胎移植试验效果分析

采用杂交奶水牛及纯种奶水牛作为供体牛,将日本生产的FSH作为外源激素进行超数排卵,以确定胚胎移植供体牛超排的效果;采用CIDR+PMSG+PG+LHRH-A3法,确定受体牛胚胎移植和同期发情的效果。试验结果表明:5头奶水牛供体牛超排,共采卵7头次,采卵数21枚,其中10枚可用胚胎,平均1.4枚/头次,可用胚率为47.6%。受体牛的同期发情效果和可移植率分别为77.0%和62.0%。     

影响山羊腹腔镜法活体采卵效果的研究

用屠宰厂采集的卵巢作为实验材料,比较了不同型号的采卵针对卵母细胞回收效果的影响,结果9号和12号针的回收率分别为66.78%和62.41%,显著高于7号针的52.63%(P<0.05);可用率分别为63.59%和68.82%,也显著高于7号针的55%(P<0.05)。在活体采卵实验中,比较了不同采卵间隔时间对活体采卵效果及供试羊卵巢损伤情况的影响,结果间隔1周组的每次每只卵泡数(12.08个)、每次每只获卵数(8.75枚),均显著低于间隔2周组(15.58个,11.97枚)和3周组(14.91个、11.42枚)(P<0.05)。间隔1周重复活体采卵对卵巢的损伤较大,卵巢表面有较多的血斑;间隔2周组和3周组卵巢基本能够恢复正常。同时还比较了离体卵巢与LOPU获得的卵子对体外受精效果的影响,二者在卵裂率(85.14%对83.33%)和桑椹胚率(52.38%对45.58%)方面差异不显著(P>0.05),但囊胚率差异显著(P<0.05),分别为30.16%和14.71%。     

牛活体卵母细胞的采取及早期受精卵获得技术的研究

从牛活体卵母细胞的采集方法、体外成熟培养、体外受精及早期胚胎发育培养等方面进行研究。结果表明 :(1 )供试奶牛前后两次采卵的最短间隔为 6d,采集回收卵子数最多为 2 2枚和2 1枚 ,最少为 3枚和 5枚 ;(2 ) 2头供试奶牛采集回收卵子平均为 1 0 .72± 1 1 .6枚 /次和 1 0 .5± 7.5枚 /次 ,A、B级卵子比例分别为 70 .34% (83/ 1 1 8)和 61 .88% (1 38/ 2 2 3)。(3)受精后 48h观察卵裂结果 ,分别为 45.76%和 32 .38% ,囊胚发育率分别为 2 9.66%和 2 0 .95%。     

荷斯坦奶牛与和牛活体采卵-体外受精（OPU/IVF）体系的建立及应用

[目的]研究牛活体采卵-体外受精（ovum pick-up and in vitro fertilization,OPU/IVF）体系,建立高效的牛体外胚胎生产系统。[方法]以从屠宰场采集的健康牛新鲜卵巢为试验材料,进行卵母细胞体外成熟、体外受精、体外胚胎培养相关条件的摸索,重点考查体外胚胎培养液中添加瘦素（leptin）对囊胚率的影响。选取13～15月龄健康荷斯坦奶牛及和牛各10头作为供体,进行活体采卵、卵母细胞体外成熟、体外胚胎生产,记录可用卵数及可用囊胚数,统计卵裂率、囊胚率;2个品种牛的体外冷冻胚胎解冻后,以荷斯坦奶牛为受体进行胚胎移植,移植后45 d统计妊娠率。[结果]添加30 U/mL的leptin可以显著（P<0.05）提高屠宰场来源牛体外胚胎的囊胚率。随机选择供体牛活体采卵,平均每头荷斯坦奶牛获得可用卵7.5枚,平均每头和牛获得可用卵8.1枚;荷斯坦奶牛及和牛的卵裂率分别为84.00%、82.71%,二者差异不显著（P>0.05）。体外培养条件下,平均每头荷斯坦奶牛获得可用囊胚4.3枚,平均每头和牛获得可用囊胚3.7枚;荷斯坦奶牛的囊胚率（57.33%）显著...