猪OPN基因与繁殖性状的关联分析

摘要：OPN（osteopontin）基因是近年来在猪的繁殖性状上发现的一个候选基因,本试验以长白猪,大白猪和北京黑猪为研究对象,研究OPN基因多态性与猪的繁殖性状之间的关联。经特异性产物的扩增,结合测序发现,OPN基因的第6内含子存在305bp的缺失突变,从而产生多态。在长白猪和大白猪中发现了AA、AB和BB 共3种基因型,在2个群体中处于中度多态,且已达到Hardy-Weinberg平衡状态。而在北京黑猪群体中没有多态,只有BB基因型。利用SAS 8.0 软件采用最小二乘法拟合线性模型,将不同基因型与总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)和初生重(WB)进行了关联分析,结果表明：长白猪初产母猪AA型个体的TNB、NBA显著的高于AB和BB型个体(P＜0.05),经产母猪AB型个体的TNB和NBA显著的高于AA型与BB型个体(P＜0.05),A等位基因对TNB、NBA和WB均表现为正效应。在大白猪中,不论是初产母猪还是经产母猪,其BB和AB型个体的TNB、NBA高于AA型个体,但其差异不显著(P＞0.05),B等位基因对TNB、NBA都表现为正效应。     

六个品种猪胰岛素抵抗素基因单核苷酸多态性分析

目的 探讨胰岛素抵抗素基因是否存在单核苷酸多态性,及其与肥胖、脂肪沉积的相关性。方法 本试验选择纯种蓝塘猪、陆川猪、临高猪、长白猪、大白猪、杜洛克,采用PCR-SSCP方法,结合相关测定指标做进一步基因分析。结果 在供试的6种纯种猪中抵抗素基因启动子检测到CC、TT、CT 3种基因型,内含子-1有EE、FF、GG、EF、EG、FG 6种基因型,内含子-2有LL、MM、NN、LM、LN、MN 6种基因型,外显子-2有CC、GG 2种基因型,基因频率与脂肪沉积量分析表明两者存在相关。结论 抵抗素基因存在单核苷酸多态性,且与脂肪沉积调控有关。     

B细胞异位基因2（Btg2）多态性与河北小尾寒羊多脊椎性状的关联分析

利用直接测序、PCR-RFLP及dCAPS技术研究了河北小尾寒羊(Ouis aries)B细胞异位基因2的外显子3及3'-uTR上的多态性与河北小尾寒羊多脊椎性状的相关性.经测序结果分析,发现了A150G、C243T和A607G 3个单核苷酸多态性,3个位点的PCR-RFLP分析表明,150位点产生AA、AG和GG基因型;243位点产生CC、CT和TT基因型;607位点产生AA、AG和GG基因型.独立性卡方检测结果表明,150位点的不同表型个体基因型频率差异不显著(P>0.05),243位点的差异极显著(P＜0.01),607位点的差异呈显著水平(P<0.05);进一步对这3个位点进行单倍型分析,其独立性卡方检测表明单倍型在不同表型中差异显著(P＜0.05).其结果表明243位点、607位点以及单倍型GTA可能与小尾寒羊多脊椎性状有关.     

大黄鱼FST基因SNP筛选及与生长性状相关性分析

为探索FST基因单核苷酸多态性(SNP)与大黄鱼生长性状的相关性,本研究采用直接测序和高分辨率熔解曲线(HRM)法分别进行SNP位点筛查和验证分型。结果共筛查到19个SNP位点,其中2个在外显子1,8个在外显子2,7个在外显子3,外显子4和外显子5各1个,近端启动子区域未筛查到突变。位于外显子4的g.2169AC位点,AA基因型占96.8%,CC基因型占3.2%,多态信息含量为0.0600;位于外显子5的g.2998AG位点,AA基因型占63.2%,AG基因型占30%,GG基因型占6.8%,多态信息含量为0.2828,这2个位点均处于哈代-温伯格平衡状态。相关性分析表明,在g.2169AC位点,CC型个体各个生长性状(体重、体长、全长、体高)均大于AA型个体,但差异不显著(P0.05);g.2998AG位点,AG型个体各性状均值最大,GG型个体最小,但只在全长性状上基因型AG与GG存在显著性差异(P0.05),表明FST基因编码区的突变对大黄鱼的生长性状有一定的影响。本试验结果为大黄鱼育种中体型的选择提供了一定的理论依据。     

猪促甲状腺激素β基因(TSH-β)多态分布及与经济性状的关联分析

为研究猪促甲状腺激素口基因(TSH-β)的多态分布情况及与生长肉质性状的关联性,本研究对TSH-β基因全序列进行再测序,发现3个单核苷酸突变座位:位于5'非转录区多态座位A-175G、位于编码区非同义突变座位G+52A,以及位于内含子的突变座位G+570A.采用PCR-RFLP和四引物ARMS-PCR方法对皮特兰、长白、杜洛克、约克夏、金华猪、岔路黑猪和嘉兴黑猪七个纯种猪群以及金皮资源家系F2代群体共计548头个体进行多态分型,并在F2代群体中分析了TSH-β多态座位与生长和肉质性状的关联性.结果表明,猪TSH-β基因具有较高的遗传多样性(Shannon多样性指数总体均值为0.48),且存在相当程度的品种间遗传分化(Fst=0.5389).其中,座位A-175G在4个国外品种和岔路黑猪中的优势等位基因为A,而在金华猪和嘉兴黑猪中的优势等位基因为G,关联分析显示AA型个体在胴体长、日增重、后腿重和后腿肌肉重方面显著高于GG型个体(P<0.05):座位G+52A的多态性主要存在于金华猪中,而在其他猪种中表现为低杂合度或完全纯合于等位基因G,且与肌内脂肪含量有显著关联;座位G+570A的多态性仅存在于我国的嘉兴黑猪和金华猪中,其他猪种表现为完全纯合于等位基因G,关联分析结果表明GG型个体在胴体长和后腿肌肉重方面显著高于AA型个体.研究结果提示,TSH-β基因可考虑为猪4号染色体相关QTL的功能候选基因.     

8个猪种和野猪H-FABP基因分子标记与IMF含量的关系

利用PCR-RFLP（Hinf Ⅰ、HaeⅢ和MspⅠ）分子标记技术,检测了杜洛克猪、长白猪、大白猪、内江猪、荣昌猪、汉江黑猪、汉中白猪、八眉猪和野猪共计265头猪H-FABP基因5＇-上游区和第二内含子区的遗传变异,并利用最小二乘模型分析了H-FABP基因对猪肌内脂肪（IMF）含量的遗传效应.结果表明：（1）在Hinf Ⅰ-RFLP位点上,上述品种和野猪均存在多态性,其中大白猪、八眉猪、汉江黑猪、汉中白猪和野猪表现为低度多态（多态信息含量（PIC）小于0.25）,杜洛克、长白猪、内江猪和荣昌猪为中度多态（PIC介于0.25和0.5之间）;（2）除汉江黑猪（P＜0.05）和野猪（P＜0.01）外,其它猪种基因频率和基因型频率都处于Hardy-Weinderg平衡状态（P＞0.05）;而在HaeⅢ-RFLP和MspⅠ-RFLP位点上,仅内江猪、荣昌猪、汉江黑猪和八眉猪为单态;（3）9种基因型对IMF含量的影响,HH＞Hh＞hh,DD＜Dd＜dd,AA＜Aa＜aa,遗传效应值分别为：3.89、3.42、3.17、2.27、2.49、2.91、2.28、2.70和2.95,H-FABP基因可显著地提高猪IMF含量（P＜0.05）.结果提示：可通过提高“aa-dd-HH”基因型的频率来增加IMF含量,达到改善猪肉质的目的.     

新疆褐牛Toll样受体基因(TLR4)外显子Ⅲ2021位点突变与奶牛体细胞评分的相关性研究

Toll-样受体(toll like receptors,TLRs)可以通过识别病原微生物启动天然免疫并激活适应性免疫.以中国荷斯坦奶牛和新疆褐牛为研究对象,对TLR4基因外显子3进行了序列分析,并对发现的多态性位点进行PCR-RFLP分析,共发现TLR4 E3+1656、TLR4 E3+2021和TLR4 E3+2414三个多态位点.对TLR4E3+1656和TLR4 E3+2021位点x2检验表明:2个品种的突变均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05).运用最小二乘法分析表明,TLR4E3+1656位点的各基因型个体间的体细胞评分(SCS)差异不显著(P>0.05);而TLR4 E3+2021位点中AA与AB基因型SCS水平差异显著(P<0.05),AA与BB基因型SCS水平差异极显著(P<0.01),但AB与BB基因型SCS水平差异不显著(P>0.05).研究结果提示,TLR4E3+2021位点的AA基因型可能与抗乳房炎的抗性有关,A等位基因是乳房炎抗性的有利基因.采用RT-PCR技术检测了不同基因型的新疆褐牛个体中TLRs信号通路下游的部分基因mRNA的表达水平,结果显示,NF-κB1、NF-κB2和IL-1β基因mRNA表达水平与TLR4 E3+2021位点AB和BB两种基因型差异显著(P<0.05),TLR4、IL-10和IL-8基因mRNA表达水平与TLR4 E3+2021位点AB和BB两种基因型差异不显著(P>0.05).     

猪肌细胞生成素基因3''''端侧翼序列PCR-RFLP分析

通过PCR-RFLP方法，检测了外来品种大约克猪、长白猪和杜洛克猪和湖南地方品种宁乡猪、沙子岭猪、大围子猪和桃源黑猪共630头肌细胞生成素基因3’端353bp侧翼序列，Msp Ⅰ酶切后存在AA、AB和BB3种基因型，其中外来品种中BB占优势，B等位基因频率平均为0．74。而湖南地方品种中，AA占绝对优势，A等位基因频率平均为0．95，其中宁乡猪和沙子岭猪均为AA型。RFLP-Msp Ⅰ基因型分布X^2检验结果表明，外来猪种与4个地方品种相比均差异极显著；4个地方品种间只有桃源黑猪与其它3个品种间差异极显著；大围子猪与宁乡猪、沙子岭猪间差异最著；外来猪种间只有大约克和长白间差异显著。     

金皮猪肉质组织学特性与CAST基因、MyoG基因PCR-MspI多态性的关系研究

本实验选择具有优良肉质的本地金华猪与肉质较差的引进品种皮特兰猪杂交所产的金皮F2代为研究对象,检测金皮F2代猪CAST（calpastatin, CAST）基因、MyoG(Myogenin, MyoG)基因的PCR-MspI多态性,并结合肌球蛋白重链（MHC）免疫组织化学方法,研究猪背腰最长肌的肌肉组织学特性,并对其进行图像分析。结果发现,金皮F2代杂交猪背腰最长肌MHCs阳性（慢肌）纤维的比例为7.62%, 快肌纤维为92.38%。CAST基因的PCR扩增产物为1404bp的片段,酶切后分为A(628bp+499bp+277bp),B（499bp+371bp+277bp+257bp）两种等位基因;MyoG基因的PCR扩增产物长度为1050bp,酶切后分为A（462 bp +408 bp +180 bp）和B（408bp+290bp+180bp+162bp）两种等位基因。.AA、AB和BB基因型频率分别为 0.1795、0.5897和0.2308,A和B的基因型频率分别为 0.4743和0.5256。CC、CD和DD的基因型频率为0.3671,0.5696和0.0633, C和D的基因型频率分别为0.6519和0.3481。统计结果表明,AA、AB、AB、CC、CD、DD基因对眼肌面积,系水率、pH值、导电率等屠宰性状均无显著的影响。CAST基因的不同基因型对肌纤维的轴比有显著影响（P<0.05）,AA单型有产生较多轴比大（近似椭圆形）肌纤维的倾向,而BB则控制形成更多的轴比小（近似于圆形）的肌纤维。具有AA单型的个体具有更多的肌间结缔组织,而具有BB单型的个体的肌间结缔组织较少（P<0.05）,AB单型的个介于两者之间。MyoG基因MspI酶切后的各种基因型对肌肉的肌纤维大小和密度具有显著影响,具有DD基因型的个体的肌纤维面积较大,而具有CC基因型者肌纤维密度最大。     

氯嘧磺隆高效降解真菌F8的分离和鉴定

从田间多年施用氯嘧磺隆的土壤中,驯化分离得到一株能够以氯嘧磺隆为唯一碳源和能源生长的真菌F8,F8在麦芽汁液体培养基中发酵96h,对10mgL-1氯嘧磺隆的降解率为93.07%。F8明显促进土壤中氯嘧磺隆的降解,20μgkg-1氯嘧磺隆的降解半衰期由对照的46.52d缩短为15.03d。F8在麦芽汁平板培养基上形成的菌落为乳白色,圆形,干燥,绒毛状或粉状,中心突起;经电镜观察,细胞长宽比大于2,形成发达的假菌丝,连接成树枝状;糖类发酵试验表明:F8能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖,不能发酵淀粉、乳糖;同化碳源试验表明:F8能利用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖,不能利用淀粉、乙酸钠;同化氮源试验表明:F8不能利用硝酸钾,能利用硫酸铵,尿素;能分解脂肪,能胨化牛奶,不能液化明胶,不能同化乙醇,不能产生淀粉化合物,不能产酸,不能产酯。根据其形态特征,生理生化特性、18SrRNA序列分析,初步鉴定F8为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。     

B2和B67菌株筛选及应用效果研究

山西省太原和运城两地分离筛选的具较强解磷能力的菌株B2和B67,平板培养其溶磷圈D/d值分别为5.1和3.8,液体培养过程中产生苹果酸、丙二酸、乳酸等多种有机酸,pH值分别较CK下降2.3和1.1,接种到山西省4个不同地区的土壤中,恒温恒湿条件下培养20 d,土壤速效磷含量较CK增加1.35~3.04倍。盆栽试验结果表明,玉米45 d地上部株高、鲜重和干重,B2 NP和B2 B67 NP较CK增加15.2%~89.2%;青菜鲜重、干重和生物量,B2和B67较CK增加15.8%~41.6%,其鲜重、干重、根长、根重以及生物量均较CK差异显著。小麦株高、有效小穗数、穗粒数、粒重以及生物量也较CK差异显著。     

Lactobacillus reuteri PYR8亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达与活性检测

以Lactobacillus reuteri PYR8菌株基因组为模板,利用PCR方法扩增出亚油酸异构酶(linoleate isomerase,LI)基因,亚克隆到pET30a中构建原核表达载体pET30a-LI,并转化入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中。其重组菌株在37℃条件下,经1.0mmol/L IPTG诱导表达重组LI蛋白,该蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的39.2%。采用Ni2 -NTA柱上复性法获得有活性的纯化重组亚油酸异构酶,其比活力5.12U/mg,是天然亚油酸异构酶比活力的2.5倍。     

转基因大豆GTS40-3-2对子代雄性大鼠主要器官和生殖机能的影响研究

为探讨长期饲喂转基因大豆GTS40-3-2对雄性大鼠器官和生殖机能的影响,本研究将雌、雄大鼠随机分为2组,分别饲喂含转基因和非转基因大豆成分的饲料90 d后,亲代大鼠组内交配获得子代大鼠;子代雄性大鼠断乳后继续饲喂对应饲料30、60和90 d后,摘取子代大鼠睾丸、附睾、脑、心脏、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏和肾上腺,检测脏器系数;选取睾丸、附睾、肾、肺制备石蜡切片,观察各器官的组织结构变化;运用实时荧光定量PCR检测睾丸雄性激素合成限制性蛋白葡萄糖转运蛋白8(GLUT8)基因的表达变化;用蛋白酶联免疫反应法进一步验证GLUT8蛋白含量。结果表明,与对照组相比,饲喂30、90 d后9种器官脏器系数均无显著差异(P>0.05);饲喂60 d后,仅肺、附睾脏器系数存在显著差异(P<0.05)。组织切片镜检结果显示,睾丸、附睾、肾、肺未发现明显结构改变;睾丸GLUT8基因转录水平和蛋白水平均未受到显著影响(P>0.05)。综上所述,转基因大豆GTS40-3-2饲料在试验周期内未对子代雄性大鼠各重要器官产生不良影响,对雄性大鼠生殖器官及其生理机能未显示毒性作用。本研究结果进一步拓展了转基因大豆安全评价研究深度,对转基因大豆的推广应用具有重要意义。     

马氏珠母贝LST8基因cDNA的分子特征及表达分析

LST8（lethal with SEC13 protein 8）是TOR（target of rapamycin）复合物的重要组成成分,在生物生长和发育的调控中发挥重要作用。本研究根据马氏珠母贝转录组数据库中注释为LST8的unigene序列设计引物,采用cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆获得了马氏珠母贝LST8基因cDNA全长序列（pm-LST8）;同时利用荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测了pm-LST8在马氏珠母贝各个组织中的表达含量。结果表明,pm-LST8基因cDNA全长1 350 bp,其中开放阅读框为948 bp,编码316个氨基酸残基,5＇UTR为104 bp,3＇UTR为298 bp,含有29 bp polyA。预测其分子量为35.4 kD,等电点为6.11。多序列比对显示pm-LST8与其它物种的LST8有较高的保守性,与牡蛎的同源序列高达82%。蛋白质结构预测显示pm-LST8具有典型的WD40结构域。荧光定量PCR分析表明pm-LST8在马氏珠母贝闭壳肌、鳃、外套膜、肝胰脏、性腺、足、血淋巴七个组织中均有表达,其中在性腺中表达量最高。本研究为进一步阐述LST8在马氏珠母贝生长和发育调控中的作用提供理论基础。     

Boron adsorption and desorption in some acid soils of West Bengal,India

Laboratory and greenhouse experiments were conducted to determine the influence of soil properties on adsorption and desorption of boron (B) as well as to estimate the degree of reversibility of adsorption reactions. The utility of Freundlich and Langmuir equations for characterizing the plant availability of applied B in soils was established using soybean [Glycine max (L.) Merr.] as a test crop. The adsorption-desorption study revealed that Fe₂O₃ and clay were primarily responsible for retaining added B in all the 25 different soils under investigation. Organic carbon, pH and cation exchange capacity (CEC) positively influenced the adsorption of B while free Fe₂O₃, organic carbon and clay retarded release of B from these soils. The degree of irreversibility (hysteresis) of B adsorption/desorption increased with increase in organic carbon and CEC of these soils. Freundlich isotherm proved more effective in describing B adsorption in soils as compared to Langmuir equation. The split Langmuir isotherm demonstrated that any of the adsorption maxima, calculated from lower, upper or entire isotherm, could be of practical use. Contrary, bonding energy coefficient, calculated either at lower or higher equilibrium concentration failed to show any practical benefit. Regression models as a function of B application rate and adsorption equation parameters to predict B uptake from applied B, demonstrated the utility of Langmuir and Freundlich equation parameters.     

Boron Toxicity in Barley Genotypes: Effects of Pattern and Timing of Boron Application

Boron (B) toxicity has been found to be a common nutritional disorder in dry areas, where excessive B tends to accumulate in the subsoil. However, in many of the pot experiments on B toxicity, excess B was mixed uniformly in soil or added from the soil surface, a method that does not detect the subsoil B effect. The objective of this plastic‐house experiment was to study the effects of different patterns and timings of B application on the development of B toxicity (BT) symptoms, tissue B concentrations, and growth and yield of barley. A three‐factor factorial design with three patterns of B application, three timings of B application, and two barley lines was used. A moderately BT‐tolerant barley line from the cross ‘Arar/Arabic Aswad’ (abbreviated as AA) and the moderately BT‐susceptible variety ‘Harmal’ were compared. Each pot consisted of two sections of 20‐cm‐tall PVC pipe. The second section was watered to field capacity and joined to the bottom of the top section on 25 January (tillering; roots reached the bottom of top section), 15 February (stem elongation), and 20 March (flag leaf emerged for ‘Harmal’; booting stage for AA). The three patterns of B application were (1) no B added (?/?), (2) B added to the bottom section only (?/+), and (3) B added to both sections (+/+). The addition of 50 mg B/kg soil increased the hot‐water‐soluble B level from 0.7 to 21 mg kg^?1. Interaction between pattern of B application and timing of B application had significant effects on BT symptom scores and straw B concentrations but not on grain yield. Grain yield of the +/+ treatment was much less than that of ?/+, which in turn was less than ?/?, but different timings of joining of the pot sections did not have a significant effect on grain yield. Relative to ?/?, the percentage of grain yield reduction (8%) sustained by AA when grown in ?/+ was less than half of the reduction (18%) suffered by ‘Harmal.’ In conclusion, subjecting plants to high‐B soils from germination to maturity exaggerates the effects of B on rainfed crops in the field. High subsoil B levels can cause significant yield reduction even when roots reach it as late as the boot stage, suggesting the need to screen/breed and grow BT‐tolerant cultivars. The use of subsectioned pots introduced in this study is an effective way to simulate BT in the field.     

中国B2B电子商务模式研究

介绍了中国B2B的现状及五大发展趋势,指出了阻碍B2B企业发展的症结所在——模式选择不当,战略分析不清,盲目追从,缺乏创新。提出了几条适合中国B2B企业发展的创新途径。     

不同施硼量对油菜叶片中不同形态硼含量的影响

采用盆栽试验研究了不同施硼量对不同生育期不同部位叶片中水溶性硼和全硼含量的影响,并对以水溶性硼代替全硼作为植株营养诊断的方法进行了初步探讨。当施硼量达到5 1kg/hm2,油菜苗期、抽薹期的生物产量以及子粒产量均下降,但叶片中的全硼和水溶性硼含量仍随施硼量的增加而增加。不同生育期和不同部位叶片的全硼含量虽然与施硼量有较好的相关性,但是不同处理之间的差异,特别是过量差异过小,很难用于营养诊断。水溶性硼含量与施硼量也有较好的相关性,而且苗期未完全展开叶片和完全展开叶片的水溶性硼含量可以较敏感地反应油菜的硼营养差异,因此,可以用作硼的营养诊断方法,但是水溶性硼的诊断临界指标需要进一步的研究。     

Determination of Residual and Cumulative Boron Requirements for Cotton and Wheat Crops Grown Under Calcareous Soil Conditions

A two-year field experiment was conducted to elucidate the residual and cumulative boron (B) requirements for cotton and wheat crops. For the first time, cotton was sown in randomized complete blocks those received 0.0, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0 kg B ha^?1 as borax (Na₂B₄O₇.10H₂0). Later, each plot was divided into two subplots for successive wheat and cotton crops and half of the pots received B at similar rates. Our results revealed that direct application of B at the rate of 2 and 2.5 kg ha^?1 produced optimum cotton yield during 2005. The same rates of B were consistent in residual plots but not in cumulative plots for both of the crops in successive years. It was thus concluded that soil applied B at the rate of 2.0 and 2.5 kg ha^?1 had significant residual effects on cotton and wheat yields.