费约果花芽石蜡切片技术的改良

为获得用石蜡切片方法观察费约果花芽形成和分化的整个过程的最优条件,选择了3 个不同发育时期的花芽进行石蜡切片技术研究。以常规石蜡切片方法为基础,在固定、软化、脱水、透明、包埋以及染色等具体方法上进行了适合费约果花芽特点的改良。结果表明：对材料进行24 h 盐酸水溶液浸泡法进行软化后,采用优化后的一系列脱水、透明等步骤进行制片操作,可以得到连续的、完整的蜡带;最终获得切片通过显微观察,可见材料内部结构完整、染色清晰。优化后的石蜡切片技术,避免了常规制片过程中出现浸蜡不彻底、组织变硬变脆、蜡带不连续、内部结构不完整等问题。该研究为费约果石蜡切片技术提供了一套具体的操作步骤,同时也为与费约果花芽结构相似树种的研究提供技术参考。     

一种适用于植物组织的快速石蜡制片法

为了建立一种快速石蜡制片方法,减少实验过程中有毒试剂的使用量。该文以葡萄、桃、花叶锦带等的部分组织为实验材料,采用石蜡切片法,通过改良透明、包埋试剂、染色等制片环节,进行石蜡制片研究。试验结果表明：该法不但简化了实验步骤、将制片周期缩短为原来的1/3,而且其制得的切片质量与常规方法无区别,同时也减少了实验过程中有毒试剂的使用量,整体上提高了植物石蜡制片的效率。     

‘蓝塔’圆柏茎段组织石蜡切片技术研究

【研究目的】为了得到‘蓝塔’(Sabina chinesis ‘Lanta’)圆柏茎段横切面的石蜡切片制作方法，从而为进一步研究其扦插生根解剖学发生机理奠定基础。【方法】选择‘蓝塔’圆柏当年生16 cm长茎段，剪取基部5 mm为材料，对传统石蜡制片法软化、粘片、染色等步骤进行改良。【结果】结果表明：20%盐酸浸泡24 h和水煮4天优于浓盐酸浸泡24 h、水煮10天、甘油-乙醇浸泡10天这3种软化方案；合理的脱水、透明时间为每级2 h ；最优切片厚度为10 μm；采用明胶粘片剂与40%乙醇的混合液较传统粘片方法不易脱片；番红染色60 min、固绿10 s得到的切片染色清晰且省时间。【结论】该研究为‘蓝塔’圆柏茎段切片技术提供了一套具体的操作步骤，同时也为与‘蓝塔’圆柏茎段结构相似树种的研究提供技术参考。     

3种组织固定液对大菱鲆肝脏切片质量影响和效果比较

为查明3种组织固定液对大菱鲆肝脏石蜡切片质量的影响,筛选效果最佳的固定液。本实验选用波恩氏(Bouin)、戴维森氏(Davidson)和4%多聚甲醛(Paraformaldehyde, PFA)3种组织固定液,对大菱鲆的肝脏进行固定,制作石蜡切片,通过苏木素-伊红(H-E)和免疫组织化学(Immunohistochemistry)染色,观察组织细胞形态学特征,利用统计学方法分析细胞完整度和免疫组化阳性率情况。结果发现,3种固定液对大菱鲆肝组织石蜡切片固定效果存在显著差异,Bouin固定液组织H-E染色细胞结构清晰、形态完整,Davidson固定液H-E染色组织溶解、细胞结构不清晰,但能分辨出核质界线,4%多聚甲醛组H-E染色鲜艳,但核质分界不清晰。完整肝细胞比例,4%PFA显著低于Bouin和Davidson固定液(P<0.05),且Bouin和Davidson固定液无显著差异(P>0.05)。肝组织增殖细胞核抗原(proliefrating cell nuclear antigen, PCNA)免疫组化染色阳性率3种固定液存在显著差异,Bouin固定液显著高于4%PFA和...     

扁吻鱼石蜡切片制作方法的探讨

为探讨新疆扁吻鱼石蜡切片的制作方法,观察新疆扁吻鱼的基本组织结构,总结切片制作过程中出现的问题,分析问题产生的原因和解决办法。利用组织学石蜡切片技术和苏木精-伊红染色技术,用电子显微镜观察扁吻鱼各个组织结构。结果显示：新疆扁吻鱼的鳃丝由两排鳃片组成,每根鳃丝的两侧又着生许多细小的鳃小片,染色后可看见出鳃动脉和入鳃动脉,扁吻鱼的肌肉切片要比鳃切片更清晰,可看见肌纤丝和结缔组织间隙毛细血管的存在,扁吻鱼的肝脏细胞较大,核仁大而明显,细胞排列紧密,本实验对新疆扁吻鱼的鳃、肌肉和肝脏的显微结构有了初步的认识,为新疆扁吻鱼的研究提供了切实可靠的组织学参考依据。     

粳稻颖果石蜡切片中染色时间的摸索及其解剖结构的观察

以典型粳稻品种辽粳294和盐丰47花后不同天数的颖果为试材,对传统石蜡切片技术中固绿步骤的染色时间进行试验.结果表明,花后不同天数的颖果染色最佳时间差异很大,即发育的前期颖果幼嫩,固绿染色时间反而较长,需要20～25s,而后期随着颖果逐渐充实,染色时间相对缩短,只需10～20s.利用改良后的方法,对颖果结构进行观察发现,花后第4天～第22天颖果果皮结构石蜡切片完整清晰,第4天～第12天颖果整体结构完整清晰,染色分明.观测表明,两品种颖果背部维管束截面均近似椭圆形,从整体上看,两品种颖果背部维管束表现为从基部到顶部由粗到细的象牙形管-束状结构,由居中的导管束和周边的若干筛管束构成.通过改进的切片方法可以对颖果的解剖结构进行清晰地观察.     

固定和染色方法对小麦胚乳细胞结构显示的影响

以扬麦16小麦颖果为材料,采用戊二醛-四氧化锇(GA-OsO₄)或高锰酸钾固定,并分别用5种染色方法[甲苯胺蓝-O (TBO)、多色性染液、高碘酸–希夫试剂(PAS)、考马斯亮蓝和PAS-TBO]进行半薄切片染色,对超薄切片进行醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色,在光学显微镜和透射电镜下观察比较了小麦胚乳细胞结构显示的差异。结果表明,GA-OsO₄固定的半薄切片染色效果整体上优于高锰酸钾固定,但是在PAS-TBO复染中,高锰酸钾固定制样效果最好。在超薄切片观察中,GA-OsO₄固定制样能较好地保存胚乳细胞超微结构,但对膜性结构显示不够清晰,而高锰酸钾固定制样则能较好地固定细胞的膜性结构,并且能够增强膜结构反差,只是对多糖和蛋白质的固定和显色较差。因此,应根据观察对象来选择适当的固定及染色方法。     

由普通光学显微镜获得具有三维立体效果图像的可行性及其前景展望

用普通显微镜对幼根石蜡切片观察时,内皮层及凯氏带图像缺乏三维显示效果,为此本研究提出一种获得小扁豆内皮层及凯氏带三维显示效果图像的方法。利用石蜡制片技术和普通光学显微镜获得小扁豆内皮层及凯氏带的数码照片,用word软件对这种二维平面图像进行光学信息解析,即可获得具有三维立体效果的解剖学图像。结果表明小扁豆内皮层及凯氏带的二维平面图像经光学信息处理后,可获得具有三维立体效果的、类似扫描电镜的数码照片,能清楚地观察到小扁豆的内皮层及“凯氏带”结构,并发现二维平面图像中的所谓“凯氏带”,是由内皮层细胞的原生质体在制片过程中脱水收缩形成,不是真正的“凯氏带”结构。普通光学显微镜的成像光及其数码照片中蕴含着大量的、有关成像物体的三维结构和化学成分等信息,这些丰富的光学信息目前尚未能进行深入解析。     

一种小扁豆内皮层及凯氏带的观察方法

用普通显微镜对幼根石蜡切片观察时,内皮层及凯氏带图像缺乏三维显示效果,为此提出一种获得小扁豆内皮层及凯氏带三维显示效果图像的方法.利用石蜡制片技术和普通光学显微镜获得小扁豆内皮层及凯氏带的数码照片,用word软件对这种二维平面图像进行光学信息解析,即可获得具有三维立体效果的解剖学图像.结果表明,小扁豆内皮层及凯氏带的二维平面图像经光学信息处理后,可获得具有三维立体效果的、类似扫描电镜的数码照片,能清楚地观察到小扁豆的内皮层及“凯氏带”结构,并发现二维平面图像中的所谓“凯氏带”,是由内皮层细胞的原生质体在制片过程中脱水收缩形成,不是真正的“凯氏带”结构.普通光学显微镜的成像光及其数码照片中蕴含着大量的、有关成像物体的三维结构和化学成分等信息,这些丰富的光学信息目前尚未能进行深入解析.     

浅析影响石蜡切片质量的关键因素

摘要：石蜡切片技术是组织学、发育生物学研究的主要实验方法,同时也是病理学中观察病理变化的重要手段,广泛地应用于临床病理诊断、教学和科研工作中。但是许多实验人员未经过严格而系统的培训,操作中由于经验不足,操作不当,常出现切片碎裂、切片脱落、染色不均、模糊不清及细胞结构染色对比不明显等现象而影响观察。笔者在阅读了大量的石蜡切片相关文献的基础上,结合自身体会,将影响石蜡切片质量的关键因素分为了实验试剂、时间和温度的选择三方面,分析了其对石蜡切片过程各环节的影响和可能出现的问题,并详述了如何控制这三方面以提高切片质量。     

番茄小孢子发育时期鉴定和游离方法的研究

为寻找番茄小孢子单核期的鉴定方法以及将小孢子从花药中游离出来而不影响其活性的最佳方法,采用醋酸洋红染色法、酒精-盐酸-醋酸洋红染色法、DAPI 染色法,分别染小孢子单核期细胞核,pH6.8-8.0的中性红染小孢子单核期的液泡;采用挤压法、挤压离心法、自然散出法,分别从花药中游离出小孢子。实验结果醋酸洋红染细胞核着色不好,酒精-盐酸-醋酸洋红染细胞核着色清晰,DAPI染色细胞核清晰,但成本高且受时间限制,中性红染色液泡效果好,但受细胞活性影响;挤压法游离小孢子提前脱壳率较高,挤压离心法游离小孢子提前脱壳率最高,自然散出法游离小孢子脱壳率最小。所以,采用酒精-烟酸-醋酸洋红法鉴定番茄小孢子发育时期效果最好,采用自然散出法游离番茄小孢子可减少小孢子脱壳率,提高小孢子活性。     

5个苹果专用授粉品种植物学特征与生物学特性研究

为实现苹果单品种建园,选育适宜专用授粉树,研究了‘道格’、‘绚丽’、‘红丽’、‘满洲里’、‘雪球’5 个观赏海棠品种的植物学、生物学性状、花粉特性及果实品质。结果表明,供试品种盛花期为4 月7—20日,和栽培品种花期相遇,‘道格’和‘满洲里’花期较早,盛花期分别为4月7日、4月9日,‘绚丽’和‘红丽’均为4月12日,‘雪球’为4月20日。供试品种花粉量大,‘道格’、‘满洲里’、‘红丽’、‘雪球’和‘绚丽’分别为13384、13162、7426、6074、6003粒/花药。单果重‘道格’最大(12.98 g),其次是‘雪球’(10.66 g)、‘绚丽’(2.59 g),‘红丽’和‘满洲里’较小（均为2.00 g）。果型指数与单果重趋势基本一致。种子数不尽相同,‘红丽’和‘雪球’为7 颗/果,‘满洲里’6 颗/果,‘道格’和‘绚丽’为4 颗/果。可溶性糖含量以‘道格’最高(18.49%),其次是‘满洲里’(16.33%)、‘雪球’(16.11%)、‘绚丽’(15.98%),‘红丽’较低为14.20%;可滴定酸‘红丽’最高为1.16%,‘绚丽’为0.99%、‘满洲里’为0.90%,‘道格’最低为0.80%。初步认为,供试品种适宜作为国内的苹果专用授粉树。     

Analysis of simple sequence repeat markers in homozygous lines of apple

Haploids in apple were induced using anther culture and in situ parthenogenesis followed by in vitro culture of immature embryos or cotyledons. In addition to an earlier characterization of the zygosity state using isozymes, the purpose of this work was an analysis of simple sequence repeats (SSRs) to describe the homozygosity more comprehensively. Five previously described SSR primer combinations were applied. Initially, polymerase chain reaction amplification with the primer pairs was performed on the donor genotypes ‘Alkmene’ and ‘Remo’ and on a further four apple cultivars. Only those primer pairs that amplified two different contrasting alleles could be used for investigation of the zygosity state. According to these analyses both the androgenic and parthenogenic regenerated shoots are homozygous.     

Limited application of homozygous genotypes in apple breeding

Apple is a temperate fruit species with several breeding disadvantages such as the highly heterozygous nature of the genome and a long reproductive cycle. It is expected that homozygous apple genotypes can increase breeding efficiency, but inbreeding is prevented by the gametophytic self‐incompatibility mechanism. In this paper, the production and characterization of homozygous genotypes, generated from anther culture in Malus × domestica cv. ‘Braeburn’, is described as well as their potential for use in breeding programmes. After determination of large scale anther culture efficiency, anther culture‐derived genotypes were simple sequence repeat (SSR)‐fingerprinted to determine their homozygous nature and confirm their androgenic origin. Their value for breeding was estimated based on growth and fertility measurements. The use of homozygous androgenic genotypes from ‘Braeburn’ in apple breeding programmes is currently not a realistic approach, partly because of the low efficiency of anther culture, but mainly because of the reduced vigour and severe sterility of the androgenic genotypes produced.     

Characteristics of Pollen from Transgenic Lines of Apple Carrying the Exogenous CpTI Gene

It is fundamental for gene transformation and ecosystem hazard evaluation to study the pollen characteristics of transgenic plants. In this research,the characteristics of pollen from 7-or 8-year-old transgenic apple plants carrying an exogenous Cp TI gene were analyzed. The results showed that there was no significant difference in terms of size,morphology,or exine ornamentation between the pollen of the transgenic plants and the non-transgenic control. However,the transgenic plants had more abnormal pollen grains. Of the 13 transgenic lines tested,12 had a significantly lower amount of pollen and six exhibited a significantly lower germination rate when cultured in vitro. The pollen viability of three transgenic lines was determined,with two showing significantly lower viability than the control. The transgenic Gala apple pollen grains germinated normally via controlled pollination on Fuji apple stigmas. However,the pollen tubes extended relatively slowly during the middle and late development stages,and another 8 h were needed to reach the ovules compared with the control. The gibberellic acid concentration in transgenic Gala apple flowers was lower than in the non-transgenic control during all development stages tested. The abscisic acid concentration in the transgenic flowers was lower during the pink stage,and higher during the ball and fully open stages. Microscopic observation of the anther structure showed no difference. The tapetum of the pollen sac wall in transgenic plants decomposed late and affected pollen grain development,which could be one of the reasons for the lower number of pollen grains and poor viability in the transgenic plants.     

根癌农杆菌介导的苹果遗传转化研究进展

农杆菌介导的遗传转化方法是苹果进行遗传改良的主要方法,本文综述了影响农杆菌转化苹果的各个因素,指出今后的研究重点应放在新的转化方法的提出及进一步提高转化效率的研究上。     

红富士苹果花挥发性成分分析

为了了解红富士苹果花散粉后的挥发性物质,探讨其挥发性物质和传粉昆虫的关系,为苹果蜜蜂授粉提供思路。笔者采用固相微萃取和气相色谱-质谱联用技术,测定红富士苹果花散粉后的挥发性物质,进行定性分析;按面积归一化法进行定量分析。结果表明：从红富士苹果鲜花中共检测鉴定出31种挥发性成分,有醇类4种(76.05%)、芳香烃类4种(5.36%)、腈类1种（橙花腈,4.6%）、烷烃类10种(4.54%)、酯类7种(3.86%)、烯类3种(3.71%)、醛类1种（壬醛,1.67%）、酸类1种（月桂酸,0.21%）组成。醇类中以苯甲醇含量高,为49.74%;其次芳樟醇17.9%,(Z)-3-己烯-1-醇7.82%,雪松醇0.59%。烯类有罗勒烯、石竹烯和法呢烯,罗勒烯含量最高为2.69%。苯甲醇、(Z)-顺-3-己烯-1-醇、芳樟醇、橙花腈为苹果鲜花挥发物的主体成分。     

安祖花小孢子发生与雄配子体发育研究

安祖花为一种名贵的观赏花卉,在北方栽培过程中存在败育的现象,影响了安祖花繁育种工作的开展,本研究对安祖花的小孢子和雄配子体的发育过程进行了详细的观察,试图从小孢子发育的角度来探讨败育的原因,为安祖花的繁育工作提供理论依据。本文利用常规石蜡切片技术和电镜技术进行观察,结果表明：花药壁的发育属于基本型,绒毡层细胞属于腺质绒毡层,成熟的花粉粒为2-细胞型,雄配子体在成熟花粉粒发育到二细胞花粉时,约有90%的细胞出现发育异常的现象。结论：安祖花的小孢子在发生过程中未见异常,败育是由于雄配子体发育不良所导致。