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不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较 总被引:11,自引:0,他引:11
从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA. 相似文献
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一种改良的大豆DNA提取方法 总被引:2,自引:0,他引:2
大豆组织中含有较多的蛋白质、糖类、酚类和脂类物质,要从中提取高质量的DNA比较困难。针对这一情况提出一种改良UREA大豆DNA提取方法(m UREA),该方法用异丙醇沉淀DNA,并配制washing buffer洗涤DNA沉淀。并以大豆叶片和种子为材料,将m UREA法与CTAB法和SDS法进行对比。结果表明,以大豆叶片为材料时,m UREA法提取的DNA产率最高,质量最好;以大豆种子为材料时,m UREA法提取的DNA产率略低于SDS法,但纯度最高。综合来看,m UREA法是一种高效的大豆基因组DNA提取法,从大豆种子和叶片中提取的DNA浓度和纯度都较高,能满足后续各种分子生物学的要求。 相似文献
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以大麻的幼嫩叶片和风干叶片为材料,分别采用优化的SDS法、CTAB法、高盐低pH法和碱裂解法这4种不同方法提取基因组DNA,并比较提取质量和效率.结果表明,采用4种提取方法,大麻干样叶和鲜样叶均可获得清晰DNA目的条带,鲜样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为:SDS法>CTAB法>高盐低pH法>碱裂解法,干样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为:高盐低pH法>SDS法>CTAB法>碱裂解法,优化的SDS法适用于大麻鲜样叶基因组DNA提取,而大麻干样叶基因组DNA的提取选用优化的高盐低pH法最适宜. 相似文献
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剑麻核酸的高效提取及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点,对其总RNA和基因组DNA提取进行研究。比较了改良SDS法、改良CTAB法提取总RNA和SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果表明:改良CTAB法提取总RNA效果较佳,所得RNA OD260/OD280高于1.8,OD260/OD230大于2.0,而CTAB法提取基因组DNA纯度和完整性较好。基于RNA和DNA水平,分别对剑麻的苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)RT—PCR和RAPD反应体系进行优化,均得到理想条带。此方法提取剑麻的核酸可运用于后续分子生物学研究,为其它材料核酸的分离提供参考依据。 相似文献
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以密花石斛(Dendrobium densiflorum Lindley ex Wallich)为研究试材,对植物SDS方法提取基因组DNA中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析。结果表明:不同的SDS缓冲液配制方法提取效果差异较大,Wang's配方产率及纯度都较高;石斛花苞的DNA提取产率较叶片高,但纯度较叶片低;提取过程中,适宜的水浴时间当为30~40 min,过短DNA产率下降,过长会引起DNA的降解,或最后产物中增加 相似文献
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剑麻DNA高效提取及RAPD反应体系优化 总被引:2,自引:0,他引:2
针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点.对其基因组DNA提取方法进行研究。比较了SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果分析表明:CTAB法提取效果较佳,A260/A280为1.8左右,A260/A230大于2.0,电泳检测基因组DNA纯度和完整性较好。后基于基因组DNA水平,对RAPD反应体系中镁离子浓度、dNTP浓度和退火温度三个重要的影响因子进行优化,得出在25μl反应液中,Mg^2+浓度为2.0mmol·L^-1,酶为1.0U,引物为0.1μmol·L^-1,dNTP为0.2mmol·L^-1.37℃退火温度扩增40个循环效果较佳。 相似文献
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不同方法对甜菜不同组织中总DNA的提取效果 总被引:1,自引:0,他引:1
以甜菜的幼嫩叶片、幼嫩花序、萌动种子及糖分积累期块根为提取材料,分别采用高盐低p H法、改良十二烷基硫酸钠(SDS)法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法及碱裂解法4种不同方法进行总DNA提取,对比不同提取方法及提取部位对提取效果的影响。结果表明,CTAB法适宜于叶片的DNA提取;SDS法适于对花的提取,而且对根和种子的提取效果也优于其它3种方法 ;碱裂解法具有简便快速的优点,但得率低,杂质去除不彻底,有可能影响后续试验,适用于对产量与质量要求不高时的快速提取;高盐低p H法提取的DNA浓度及得率均较低,且产物纯度不高,不建议作为首选方法。甜菜4种组织中,叶片最适合作为提取材料,花次之;根和种子的提取难度较大,建议提取时增加纯化与浓缩步骤。 相似文献
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为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。 相似文献
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比较了橡胶林土壤微生物CTAB-SDS提取法和SDS提取法的效果。结果表明,2种提取方法均获得约
23.1kb的DNA片段,2种提取方法在颜色、提取量和纯度上存在较大差异。CTAB-SDS提取法提取DNA的纯度较好,不需要纯化可以直接用于PCR扩增、酶切等后续操作;SDS提取法提取的纯度低,不能直接用于PCR扩增。2种方法都适合橡胶林土壤DNA的提取,如果要求获得纯度高的DNA,CTAB-SDS提取法是最佳选择。橡胶林土壤微生物DNA的提取,推荐使用CTAB-SDS提取法。 相似文献
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大豆叶片DNA提取方法的比较研究 总被引:4,自引:1,他引:3
以大豆叶片为材料,对大豆基因组DNA提取方法中若干影响因子如提取液、提取液的浓度、蛋白质去除次数、提取步骤等进行比较研究,试图寻找大豆叶片DNA提取的最佳方法.结果表明,碱裂解法提取速度快,但提取的DNA量少,在SSR分析中,银染效果较CTAB、SDS提取液差,CTAB、SDS提取液均能得到较高质量的DNA;在1%~4%CTAB、SDS提取液浓度下,4%CTAB易使DNA产生降解,但不同浓度提取液提取DNA均可用于SSR分析;提取叶片重量在一定范围内时,随抽提次数减少,DNA浓度增加,纯度下降,但即使用氯仿/异戊醇抽提一次,也能够满足SSR分析的需要;不同提取步骤下,使用氯仿/异戊醇抽提2次后使DNA沉出后再溶解抽提2次和直接抽体4次相比,A260/A280值偏大,但A260/A230值较好. 相似文献