小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)和小麦黄花叶病毒(WYMV)的细胞质内含体的电镜观察

小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)和小麦黄花叶病毒(WYMV)分别感染小麦(Triticum aestivum L.)后所诱发的细胞质内含体和细胞嚣病变几乎完全相同。感病的叶肉细胞、表皮细胞和木质部薄壁细胞的细胞质中都可看到大量风轮体、柱状体、板状集结体和膜状体,其中以叶肉细胞中更为普遍。风轮体成群出现、同一组内风轮体常平行排列,而相邻群间常垂直排列。膜状体的内部常夹杂着许多小囊泡,其四周与内质网呈辐射状相连。在发病初期的心叶叶肉细胞质的液泡附近可看到颗粒状病毒束,而分散的病毒状颗粒则多见于发病中后期坏死的细胞中。感病细胞的叶绿体、线粒体、核、质膜及胞间联丝中均未见病毒状颗粒。感染病毒的细胞中,细胞质丰富、内质网膨大,核糖体增加、小囊泡大量出现,随着病害的加重,叶绿体、线粒体逐渐肿大,基粒缩小、膜破裂、类囊物流入细胞中。     

小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)和小麦黄花叶病毒(WYMV)的细胞质内含体的电镜观察

 小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)和小麦黄花叶病毒(WYMV)分别感染小麦(Triticum aestivum L.)后所诱发的细胞质内含体和细胞嚣病变几乎完全相同。感病的叶肉细胞、表皮细胞和木质部薄壁细胞的细胞质中都可看到大量风轮体、柱状体、板状集结体和膜状体,其中以叶肉细胞中更为普遍。风轮体成群出现、同一组内风轮体常平行排列,而相邻群间常垂直排列。膜状体的内部常夹杂着许多小囊泡,其四周与内质网呈辐射状相连。在发病初期的心叶叶肉细胞质的液泡附近可看到颗粒状病毒束,而分散的病毒状颗粒则多见于发病中后期坏死的细胞中。感病细胞的叶绿体、线粒体、核、质膜及胞间联丝中均未见病毒状颗粒。感染病毒的细胞中,细胞质丰富、内质网膨大,核糖体增加、小囊泡大量出现,随着病害的加重,叶绿体、线粒体逐渐肿大,基粒缩小、膜破裂、类囊物流入细胞中。     

烟草曲茎病毒AC4基因的原核表达与免疫定位

 利用PCR方法从烟草曲茎病毒(TbCSV) Y3 5分离物的病株中获得AC4基因,将其克隆到原核表达载体pET-30a上获得重组质粒pET-Y35AC4,重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3) pLysS中,IPTG诱导后SDS-PAGE发现,AC4蛋白已在大肠杆菌中获得了表达。利用Ni²⁺-NTA亲和树脂纯化了AC4重组蛋白,免疫家兔获得AC4蛋白的多克隆抗体。利用免疫胶体金技术对感病烟草中AC4蛋白进行定位发现,TbCSV AC4蛋白主要在细胞质的叶绿体和线粒体中积累。     

壳寡糖诱导烟草抗烟草花叶病毒的超微结构研究

 电镜检查表明,接种烟草花叶病毒(TMV)表现系统侵染的烟草植株叶肉细胞和筛管内有大量病毒粒子和病毒结晶体,细胞质中出现髓鞘样结构、多泡体和次级囊泡。叶片薄壁细胞内叶绿体、线粒体等细胞器变形解体,膜结构增生。经壳寡糖(50 μg/mL)诱导处理的烟草,系统症状减轻,叶肉细胞和筛管中病毒粒子显著减少,偶见病毒结晶体;叶肉细胞中细胞器基本完好,但叶绿体内出现较大的淀粉粒;液泡内和细胞间隙出现大量电子致密物质。在未接毒和未经壳寡糖处理的植株中未见此种电子致密物,其产生可能与诱导抗病性表达有关。     

甜菜花叶病毒病研究之二——感病细胞超微结构观察

 对不同时期感染甜菜花叶病毒(BtMV)的叶片,进行病理变化系列观察。早期侵染(7天前)的细胞质、细胞器均无变化,随着症状发展,风轮状内含体、束状内含体、细胞核卫星体,细胞质泡囊化旁类似病毒的束状结构,20天达到了高峰,风轮状及束状内含体一直持续两个月还存在。田间样品也观察到了典型的风轮状及束状内含体。细胞核卫星体出现很少。侵染后期,细胞质减少,叶绿体比相应健株提前出现淀粉粒,噬锇颗粒等,基粒片层也提前消解,表现细胞提前衰老的特征。此外细胞内还有许多健株没有的泡状结构。一种为旁壁体,可能与细胞壁加厚有关;一种为多重泡体的叠加,可能是液泡的吞噬作用加强与外源物质(BtMV)侵入有关;另外还有一种可能是过氧化物酶体或线粒体在病毒诱导下泡囊化,其作用不清楚。     

甜菜花叶病毒病研究之二——感病细胞超微结构观察

对不同时期感染甜菜花叶病毒(BtMV)的叶片,进行病理变化系列观察。早期侵染(7天前)的细胞质、细胞器均无变化,随着症状发展,风轮状内含体、束状内含体、细胞核卫星体,细胞质泡囊化旁类似病毒的束状结构,20天达到了高峰,风轮状及束状内含体一直持续两个月还存在。田间样品也观察到了典型的风轮状及束状内含体。细胞核卫星体出现很少。侵染后期,细胞质减少,叶绿体比相应健株提前出现淀粉粒,噬锇颗粒等,基粒片层也提前消解,表现细胞提前衰老的特征。此外细胞内还有许多健株没有的泡状结构。一种为旁壁体,可能与细胞壁加厚有关;一种为多重泡体的叠加,可能是液泡的吞噬作用加强与外源物质(BtMV)侵入有关;另外还有一种可能是过氧化物酶体或线粒体在病毒诱导下泡囊化,其作用不清楚。     

水鬼蕉感染HCRV不同发病时期的病毒粒体分布与亚细胞病变特征

采集疑似朱顶红褪绿环斑病毒(HCRV)侵染的水鬼蕉(Hymenocallis littoralis)不同发病时期的叶部组织，通过HCRV-N基因特异性引物的RT-PCR扩增克隆与测序分析，确定由HCRV侵染。进一步应用负染色、超薄切片制样及透射电子显微镜观察，结果显示：叶部无症、褪绿、黄化和坏死不同发病时期的HCRV粒体在细胞内呈现散布或聚集的特征，散布的病毒粒体包被双层膜结构，发病后期聚集的病毒粒体呈现串珠状，聚集于管状囊泡中。在侵染潜伏期，水鬼蕉细胞核、叶绿体等亚细胞结构较完整；发病早期和中期，细胞核结构完整，叶绿体基粒片层消解，线粒体增加且结构较完整；发病后期，大部分细胞坏死，液泡中残存内溶物，少部分细胞的液泡中含有串珠状病毒粒体聚集于管状囊泡，是HCRV区别于同属其他病毒的明显特征，可作为诊断鉴定的依据。     

葡萄扇叶病毒引起的寄主细胞病变研究

 电镜观察了葡萄扇叶病毒杭州分离物(Grapevine fanleaf virus Hangzhou isolate,GFLV-H)侵染苋色藜(Chenopodium amaranticolor)和昆诺藜(C.quinoa)的细胞超微结构变化。病毒粒子存在于叶肉组织薄壁细胞的细胞质内,常成单纵列排列在小管结构中,小管形成聚集体。在系统感染的昆诺藜细胞中位于管状结构中的病毒粒子穿过胞间连丝。2种感病寄主细胞质内膜结构增生,在核周围形成含细纤维状物质的小囊泡。液泡边缘存在少许小泡,有多泡体和髓鞘样结构伸入液泡,叶绿体和线粒体等细胞器也发生不同程度的变化。     

5种滨藜属植物叶肉细胞超微结构的比较解剖

采用透射电镜,对生长在不同环境下的5种滨藜属(Atriplex L.)植物叶肉细胞超微结构进行比较解剖,旨在揭示其适应环境的结构特点.结果显示:5种滨藜属植物的栅栏组织细胞的细胞膜均有破损,并局部内陷形成小泡,分布于细胞膜周围与液泡中;叶绿体的膜系统受环境影响显著,异苞滨藜叶绿体的基粒片层和基质片层发育良好,而生长在盐渍、干旱胁迫下的疣苞滨藜和白滨藜,叶绿体受损最严重,类囊体膨胀,片层扭曲并伴有体积大的淀粉粒;脂质球在光滨藜中含量最丰富,疣苞滨藜和白滨藜中最少.细胞超微结构的变化是滨藜对盐渍、干旱等胁迫条件的适应策略,表明5种滨藜能通过改变自身的细胞结构来适应不同的生境.     

木尔坦棉花曲叶病毒编码蛋白的亚细胞定位分析

 木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMV)是典型的单组分双生病毒,并伴随β卫星分子,是棉花曲叶病的主要病原之一。本研究利用农杆菌介导的瞬时表达系统,将CLCuMV及其卫星分子编码的7个病毒蛋白在本氏烟表皮细胞中表达。通过激光共聚焦显微镜观察发现:V1、C2和C3定位于细胞核;C1和βC1定位在细胞核以及细胞质或细胞膜上,并且在细胞质中形成丝状结构;V2和C4主要定位在细胞质或细胞膜上,细胞核也有微量表达,V2可形成大小不一的颗粒状聚集体结构,C4在细胞膜上可见点状聚集体结构。同时,利用RT-PCR和Western blot对病毒各基因的转录和表达水平进行了分析。CLCuMV编码蛋白的亚细胞定位为蛋白功能的进一步研究提供重要理论依据。     

Histochemical detection of Blueberry latent virus in highbush blueberry plant

Blueberry latent virus (BBLV) was detected in 27 of 95 asymptomatic highbush blueberry trees in a blueberry field in Japan. In situ hybridization showed that the viral RNAs were detected in the palisade mesophyll, spongy mesophyll and vascular bundle of leaves. In western blot analysis, an antibody to the viral protein encoded by open reading frame 1 (ORF1) reacted with a 48-kDa protein specific for blueberry trees in which BBLV was detected. Immunogold electron microscopy revealed that amorphous bodies in the cytoplasm of blueberry cells were labeled with antibodies to the ORF1 protein.     

苹果链格孢菌侵染对感病苹果品种叶细胞超微结构的影响

 将Alternaria mali分生孢子接种在苹果元帅品种叶片的下表皮,保湿培养3~24h,观察细胞超微结构,接种后3h,表皮及叶肉细胞的质膜发生内陷,出现囊泡,暗染色颗粒及管状结构,叶绿体膜结构解体,电子致密物质沉积,基粒排列混乱松散,外膜破裂等。接种后24h,叶片表面出现病斑,细胞质浓缩,细胞壁出现颗粒物,细胞变形,病健组织交界处,叶绿体基浓缩,出现脂质球,同时还观察到,距离病斑2mm处,许多叶肉细胞中出现密度均匀、形状不规则的物质,小叶脉木质部中出现电子致密物质沉积。     

宿根矮化病菌对甘蔗品质及茎、叶超微结构的影响

 甘蔗宿根矮化病(Ratoon Stunting Disease, RSD)是由Leifsonia xyli subsp.xyli (Lxx)引起的,是目前世界所有植蔗地区危害性极大的病害之一。本实验以甘蔗品种新台糖22号(ROC22)健康植株为对照,感染RSD植株为处理,观察和测定RSD侵染甘蔗引起的蔗株农艺性状、蔗糖分以及茎、叶超微结构的变化。结果表明:(1)感染RSD种茎的出苗率比对照减少2.94个百分点;株高比对照下降28.85 cm;茎径比对照减少0.28 cm;节间长度比对照减短3.50 cm;单茎重比对照低0.36 kg。(2)感染RSD植株的蔗糖分低于对照0.9个百分点(绝对值)。(3)利用透射电镜技术对感染RSD植株茎、叶细胞超微结构进行观察表明,叶片叶肉细胞、维管束鞘细胞及茎细胞内的细胞器及细胞核都发生了明显的病理变化。与健康叶片相比,叶绿体变形,叶绿体基质片层大部分消解,基粒结构消失,叶绿体外膜和内膜剥离。线粒体形态异常,有的肿大、内嵴模糊,严重者内嵴消失并空泡化,仅剩未被消解的残骸;细胞核形态变为不规则,核膜破裂,染色质分布不均匀,呈降解状态。在感染RSD甘蔗茎维管束导管细胞内积累有大量的电子致密物质,细胞壁有不同程度的溶解和断裂,这可能和RSD病原细菌侵染有关。以上结果表明:RSD侵染甘蔗后,可能导致光合效率下降,对水分和营养物质的运输能力降低,从而导致甘蔗品质和产量的降低。     

Ultrastructural Observations and DNA Degradation Analysis of Pepper Leaves Undergoing a Hypersensitive Reaction to Xanthomonas campestris pv. Vesicatoria

Ultrastructural details of the hypersensitive reaction induced by infiltration with avirulent race 2 Xanthomonas campestris pv. vesicatoria in pepper Early Calwonder-10R leaves (incompatible interaction) are reported. Affected cells displayed plasmalemma undulations and disruption, lysis of the chloroplast membrane, degeneration of other organelles, general cytoplasm disorganisation and, often, protoplast shrinkage. The nuclei contained large masses of electron-dense material, apparently formed by chromatin aggregation. In many cases a single chromatin-like layer was deposited on the inner side of the nuclear envelope leaving a finely granular matrix in the centre of the nucleus; the nucleolus usually disappeared. The nuclear envelope was sometimes ruptured and the internal matrix leaked into the cytoplasm. The content of many affected cells eventually coagulated and became very electron-dense. The walls often collapsed. All these alterations were especially visible in spongy mesophyll cells at sites where bacteria occurred in the intercellular spaces. Although some of the nuclear and cytoplasmic alterations recall certain aspects of apoptotic cell death, molecular determinations did not reveal any DNA degradation in hypersensitively reacting tissues. The first cell alterations in leaves infected with the virulent bacterial race 1 (compatible interaction) were observed only 27h after inoculation, when the cytoplasm of some cells showed limited internal disorganisation and plasmolysis at sites where bacterial colonies developed.     

In Situ Localization of Barley Yellow Dwarf Virus-PAV 17-kDa Protein and Nucleic Acids in Oats

ABSTRACT Barley yellow dwarf virus strain PAV (BYDV-PAV) RNA and the 17-kDa protein were localized in BYDV-PAV-infected oat cells using in situ hybridization and in situ immunolocalization assays, respectively. The in situ hybridization assay showed labeling of filamentous material in the nucleus, cytoplasm, and virus-induced vesicles with both sense and antisense nucleic acid probes, suggesting that the filamentous material found in BYDV-PAV-infected cells contains viral RNA. BYDV-PAV negative-strand RNA was detected before virus particles were observed, which indicates that RNA replication is initiated before synthesis of viral coat protein in the cytoplasm. The 17-kDa protein was associated with filamentous material in the cytoplasm, nucleus, and virus-induced vesicles. The labeling densities observed using antibodies against the 17-kDa protein were similar in the nucleus and cytoplasm. No labeling of the 17-kDa protein was observed in plasmodesmata, but filaments in the nuclear pores occasionally were labeled. Since BYDV-PAV RNA and 17-kDa protein colocalized within infected cells, it is possible that single-stranded viral RNA is always associated with the 17-kDa protein in vivo. The 17-kDa protein may be required for viral nucleic acid filaments to traverse the nuclear membrane or other membrane systems.     

感染黄花叶病毒大麦的超微结构研究

 不同抗病性的大麦品种,在大田感染了大麦黄花叶病毒(BaYMV)后,从叶片和根的超微结构观察表明:(1)除感病和耐病品种外,首次在抗病性品种中发现有病毒存在,但病毒含量很低:(2) BaYMV对叶绿体结构有一定的影响,外部病症严重的叶片其解体或发育不全的叶绿体比例显著高于无病症的叶片;(3)感病后期细胞中的部分线粒体出现肥大和自溶;(4)感病细胞的细胞膜松弛,在细胞壁和膜之间有代谢物沉积,并有细胞膜溶解现象;膜状结构内质网肥大,有病毒内含体附着其上;(5)感染细胞中除发现片层、单向风轮状和多向风轮状内含体之外,还见到带柄风轮状内含体和堆束状病毒纤维。最后,初步讨论了BaYMV感染大麦后的细胞学变化与外部症状的相互关系以及大麦抗病性品种的抗性机理。