猪13/17罗伯逊易位染色体的显微分离及DOP-PCR扩增

以13／17罗伯逊易位杂合子猪[2n=37，XY或XX，rob（13：17）]为材料，制备其有丝分裂中期染色体，利用显微分离技术对13／17罗伯逊易位染色体进行分离，并将单条染色体进行简并寡核苷酸引物PCR（degenerate oligonucleotide primer-PCR．DOP-PCR）扩增，其扩增片段大小主要在0．2～2．5kb之间；以DOP-PCR扩增产物为模板，分别以猪13、17号染色体近着丝点微卫星标记S0282和SW335为扩增目的基因，对D0P-PCR扩增产物进行鉴定，结果表明DOP-PCR产物来源于13／17罗伯逊易位染色体。该方法的成功建立为进一步从分子水平上研究家猪13／17罗伯逊易位所引起的表型效应的遗传机制以及筛选猪13和17号染色体上新的分子遗传标记奠定了基础。     

13/17罗伯逊易位猪成纤维细胞系的建立

为了在细胞水平上研究13/17罗伯逊易位猪群这一种质资源,试验采用组织块分离法对13/17罗伯逊易位杂合子猪、纯合子猪及正常核型家猪耳组织进行了分离培养,构建了3个成纤维细胞系,并对其进行了形态学、生长动力学、核型分析、绿色荧光蛋白报告质粒转染和微生物污染检测等生物学特性研究。结果表明:3种核型家猪细胞形态均为标准成纤维细胞形态,细胞内波形蛋白呈现阳性表达;细胞生长曲线均呈"S"型;杂合子猪细胞染色体2n=37所占比例为92.5%,纯合子猪细胞染色体2n=36所占比例为93.8%,正常核型家猪细胞染色体2n=38所占比例为96.3%;外源质粒能在细胞中进行稳定表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测结果呈阴性。说明本研究已成功建立13/17罗伯逊易位猪成纤维细胞系。     

13/17罗伯逊易位猪SRY基因的克隆及其序列分析

以13/17罗伯逊易位纯合子(2n=36)、杂合子猪[2n=37,XY或XX,rob(13;17)]及正常猪为试验材料,根据猪SRY基因蛋白质编码区的核心序列,设计PCR引物,扩增得到SRY基因片段,随机选取克隆质粒进行测序分析。结果表明,13/17罗伯逊易位纯合子猪与正常猪的SRY基因的核心序列相比有1个碱基发生突变;而13/17罗伯逊易位杂合子猪与正常猪SRY基因的核心序列相比有5个碱基发生突变。     

13/17罗伯逊易位猪POU1F1基因多态性与经济性状的相关分析

利用外周血淋巴细胞培养制备染色体标本,对13/17罗伯逊易位猪的3种杂交组合的394头后代猪进行分群;应用PCR-RFLP技术在POU1 F1基因的扩增片段(1746 bp)中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点A(3种基因型);应用PCR-SSCP技术检测1个POU1 F1基因第5内含子上的突变E(2种基因型),同时结合生长和胴体品质测定记录研究基因型对生产性状的遗传效应。结果表明,位点A的基因型对生长有显著影响(P<0.05),位点E基因型对生长和眼肌面积有显著影响(P<0.05)。研究结果初步揭示POU1 F1多态性与生长、眼肌面积等存在相关,推测POU1 F1多态性可作为罗伯逊易位杂合优势遗传机制的一种分子水平上的解释。     

基因多态性与经济性状的相关分析

利用外周血淋巴细胞培养制备染色体标本,对13/17罗伯逊易位猪的3种杂交组合的394头后代猪进行分群;应用PCR RFLP技术在〖STBX〗POU1F1〖STBZ〗基因的扩增片段（1746 bp）中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点A（3种基因型）;应用PCR SSCP技术检测1个〖STBX〗POU1F1〖STBZ〗基因第5内含子上的突变E（2种基因型）,同时结合生长和胴体品质测定记录研究基因型对生产性状的遗传效应。结果表明,位点A的基因型对生长有显著影响（P<0.05）,位点E基因型对生长和眼肌面积有显著影响（P<0.05）。研究结果初步揭示POU1F1多态性与生长、眼肌面积等存在相关,推测POU1F1多态性可作为罗伯逊易位杂合优势遗传机制的一种分子水平上的解释。     

13/17染色体易位纯合子猪(2n=36)与正常核型家猪(2n=38)的杂交试验

用13/17染色体易位杂合子猪互交获得的1头13/17染色体易位纯合子公猪[2n=36,XY,rob(13/17)]与4头正常核型母猪(2n=38,XX)交配,结果4头母猪全部妊娠并正常分娩.其产仔数分别为13,16,12,11,产活仔数分别为12,13,12,11;窝断奶头数分别为12,13,9,10.经核型鉴定,其后代全部为13/17易位杂合子[2n=37,XX或XY,rob(13/17)].此结果表明,13/17易位染色体的遗传完全符合孟德尔的遗传规律,13/17易位纯合子公猪具有正常的繁殖力.本杂交试验所产活仔48头,其性别比例为35?:13?,接近3:1的比例,经X~2检验不符合1:1的理论比率(X~2=10.08,P<0.01).此外,本杂交试验所产仔猪生长发育正常,并具有一定的杂合优势,这一结果为13/17易位纯合子猪的进一步推广应用,尤其是作为商品猪生产的杂交父本提供了可靠依据.     

用RAPD技术研究9个家猪群体的遗传结构

利用RAPD技术对9个家猪群体的遗传多样性进行研究，包括13／17罗伯逊易位纯合子猪、易位杂合子猪及正常核型猪的3个群体、丹系长白猪群体、加系双肌臀杜洛克猪群体、加系双肌臀大约克猪群体、加系双肌臀长白猪群体、及欧洲猪与易位杂合子猪产生的2个杂交后备猪群体。用17条已筛选出的产生多态性的随机引物对模板DNA进行扩增，共得到384条清晰稳定的多态型片段，片段长度在200～4000bp之间。根据多态性结果计算出群体间的共有带率F及遗传距离指数D，并以此绘制出群体的亲缘关系树状聚类图，确定了它们间的亲缘关系。     

家猪13/17罗伯逊易位染色体遗传规律的研究

本研究采用微量全血培养法对１３／１７ 染色体易位猪的５ 种交配组合所产３４２ 头后代的染色体组型进行了分析。结果表明,家猪１３／１７ 罗伯逊易位染色体的遗传符合孟德尔遗传规律,且具有稳定的遗传性。１３／１７ 易位纯合子互交后代仍然为１３／１７ 易位纯合子;１３／１７ 易位杂合子互交后代出现１３／１７ 易位纯合子（２ｎ ＝ ３６） ,１３／１７ 易位杂合子（２ｎ ＝ ３７） 和正常核型家猪（２ｎ ＝ ３８） 三种核型,经卡方检验符合１ ２ １ 的理论比值。本文还讨论了家猪和野猪的染色体进化,１３／１７ 罗伯逊易位染色体的应用。     

猪八号染色体产仔数微卫星标记的探讨

本试验从猪第八号染色体遗传图谱上选择九个微卫星标记位点，。合成引物对长大，二花脸和大白共254头母猪进行PCR扩增，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分型，用SPSS统计软件分别对9个微卫星的多态性与母猪产仔数连锁关系进行分析，结果表明，长大母猪产仔数与SW1070，SW905两个位点显著相关，二花脸猪的产仔数与OPN，SWR1101，SW790三个标记位 显著相关联，大白猪的产仔数与SWR1101，SW268，SW1070标记位点显著相关。     

家猪染色体13/17易位的发现及表型效应的研究——Ⅰ.家猪染色体13/17易位的发现与鉴定

对4头长白后备种公猪进行细胞遗传学分析,发现1头公猪具有异常核型。经染色体组型、G-分带、C-分带分析,确定该公猪携有染色体13/17易位,其核型为2n=37,XY,rob(13/17)。该公猪的3头(♀)同父半同胞中,有2头携有13/17易位。该公猪的父亲也携有13/17易位,表明先证者公猪的13/17易位不是自发产生的,而是由其父亲遗传得来的。     

13/17罗伯逊易位纯合子、杂合子猪及3个引进品种核仁组成区(Ag-NORs)的多态性

对 1 3/ 1 7易位纯合子猪、杂合子猪及杜洛克、长白、约克夏猪的核仁组成区 ( Ag-NORs)的多态性作了研究 ,结果表明 ,杜洛克、约克夏猪 Ag-NORs定位于 8号和 1 0号染色体的次缢痕区 ,而 1 3/ 1 7易位纯合子猪、1 3/ 1 7易位纯合子猪×约克夏猪 F1代 Ag-NORs的遗传方式符合孟德尔定律 ;Ag-NORs在细胞间、个体间及品种间数目均有差异 ,而且品种差异显著大于品种内个体间差异。 1 3/ 1 7易位纯合子猪、杂合子猪 ,以及长白、杜洛克、约克夏猪 Ag-NORs均数分别为 1 .99、1 .98、2 .0 0、2 .0 5、2 .0 6,说明 Ag-NORs在品种、个体及细胞间具有多态性。这种多态性与猪的起源和杂交育种时所用亲本品种的血缘成分有关 ,因此可作为遗传标记 ,用以分析家畜的亲缘关系     

13/17罗伯逊易位猪生长抑素基因的多态性研究

采用微量全血培养法制备染色体标本,对13/17罗伯逊易位猪的3种杂交组合的309头后代进行核型鉴定,结果样本中存在3种核型的猪：正常核型猪（2n=38）、易位杂合子猪（2n=37）和易位纯合子猪（2n=36）;利用PCR SSCP技术检测发现生长抑素基因外显子1不存在多态性;其内含子的266～602 bp片段存在2个突变位点(T520C,G521T),但仅检测到2种基因型：AA和AB。遗传多态性分析结果表明,不同杂交组合后代及不同核型的猪群中AA基因型频率（频率范围为0.58～0.77）和A等位基因频率（频率范围为0.79～0.90）均显著高于其AB基因型频率（0.23～0.42）和B等位基因频率（0.10～0.21）;易位杂合子猪的AB基因型频率（0.42）均高于正常猪（0.25）及易位纯合子猪（0.40）。经卡方检验,差异不显著（P>0.05）,群体的基因型频率处于哈代－温伯格平衡状态。     

科尔沁牛染色体14/24易位的初步研究

对内蒙古哲盟地区的5头科尔沁牛进行了细胞遗传学检查。结果:3♀和1♂核型全为2n=60,可配成30对,29对常染色体和1对性染色体,性染色体X为大型亚中着丝粒,Y为小型亚中着丝粒染色体;1♂的核型为异常核型,59,XY,t(14:24)。14/24易位是单独发生的。     

13／17染色体易位猪群Amy－2的多态性

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了１３／１７染色体易位纯合子、杂合子及染色体数正常猪群的血液淀粉酶－２（Ａｍｙ－２）的遗传多态性。结果：３群猪均表现出特殊的Ａｍｙ－２多态性分布，其Ａｍｙ－２位点受２对等位基因控制，除测得Ａｍｙ－２Ａ、Ａｍｙ－２Ｂ基因控制的Ａ、Ｂ带外，还测到１对迁移率比Ａ、Ｂ带快的Ｃ、Ｄ带；２对等位基因呈现出共显性特征，但除个别个体２对等位基因所控制的表型染色强度相同外，大部分个体出现Ｄ带染色较Ａ、Ｂ、Ｃ带弱的特点；不同核形猪群的基因频率和基因型频率有明显差异，个别个体缺乏Ａｍｙ－２Ｃ、Ａｍｙ－２Ｄ基因。     

1/25 translocations in Blonde d'Aquitaine cattle in New Zealand

A Robertsonian centric fusion between chromosomes 1 and 25 in Blonde d'Aquitaine cattle in New Zealand is reported. This fused chromosome is the same as the widely reported 1/29 translocation chromosome with the difference in the numbering arising from inconsistencies in the G and R-banded cattle karyotypes of the International System for Cytogenetic Nomenclature of Domestic Animals, 1989.