一株寒地高效解无机磷细菌发酵条件优化

为了探究解无机磷细菌B51-7最佳发酵培养条件,以发酵液初始pH、碳源、氮源和培养温度为研究对象,以钼蓝比色法测定发酵液中可溶性磷含量为评价指标,通过单因素试验和正交实验确定其发酵条件的最佳组合。结果表明:初始pH 4.5、30℃、10 g·L~(-1)葡萄糖、0.1 g·L~(-1)蛋白胨培养条件下,菌株B51-7发酵液中可溶性磷含量最高;菌株B51-7解磷能力的最优发酵条件组合为初始pH 4.0,葡萄糖12 g·L~(-1),蛋白胨0.05 g·L~(-1),温度30℃。该研究为菌株B51-7解磷能力的掌握以及其在微生物磷肥的开发与利用提供了重要的参考依据。     

JM-3菌株抗菌物质发酵条件优化及对苹果腐烂病的防效

以从剑麻中筛选出的1株对苹果腐烂病有较强拮抗作用的菌株JM-3为研究对象,采用单因子试验和正交实验对菌株JM-3的最适发酵培养基成分及发酵条件进行优化,并测定了其对苹果离体枝条腐烂病的防治效果,以期为该菌株的工业化生产提供参考依据。结果表明:菌株JM-3培养基各组分最佳配比为葡萄糖30g·L~(-1),蛋白胨20g·L~(-1),K_2HPO_4 1.0g·L~(-1),最佳发酵条件为初始pH 7,装液量150mL或100mL/250mL三角瓶,培养温度33℃,培养时间120h。在最佳发酵培养基和培养条件下,菌株JM-3抑菌能力提高32.4%。JM-3发酵液不能对苹果离体枝条腐烂病起到治疗作用,但能够显著预防腐烂病斑扩展,提前24~48h接种JM-3发酵液的预防保护效果最好,与对照农药苯醚甲环唑相比无显著差异。     

柑橘果酒富硒酵母的选育及其富硒条件优化

以柑橘果汁为自然发酵原料,结合有机硒含量及感官评价结果,采用亚硒酸钠抗性平板筛选与紫外诱变的方法,选育得到一株富硒能力较强的酵母菌B1,通过单因素分析的方法对该富硒酵母的发酵条件进行优化。结果表明:酵母菌B1富硒发酵最适亚硒酸钠浓度为75μg·mL~(-1),在此最佳硒浓度下,当菌株接种量为5%,发酵液初始pH为4.4,在装液量为80%的摇瓶(250mL)中32℃发酵3d后,其总硒含量可达4 756.76μg·L~(-1),同时该菌株的生物量可高达2.57g·L~(-1)。     

牛蒡根际土壤中解磷菌筛选、鉴定及解磷条件优化

采用解磷圈法和可溶性磷含量测定法分离筛选出牛蒡根际土壤中解磷能力较强的菌株PSM-5,并对筛选出的菌株进行解磷条件优化。结果表明:初步鉴定菌株PSM-5为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),优化后最优解磷条件为初始pH值3.79、发酵温度28.46 ℃、盐浓度10.46 g · L~(-1)。研究结果为下一步研制牛蒡专用生物有机肥提供解磷菌剂。     

萝芙木内生真菌的分离及发酵产物抑菌活性的研究

从萝芙木的果实中分离得到5株内生真菌:LG-A、LG-B、LG-C、LG-D与LG-E,以5株内生真菌为试验材料,采用微量滤纸片法,研究了5株内生真菌发酵乙醇粗提物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌与苹果果实链格孢菌的抑菌活性,以期筛选出具有农用抗植物病原真菌的活性菌株。并采用菌丝生长速率法,进一步测定了菌株LG-B与LG-D乙醇粗提物的不同溶剂萃取物的抑菌活性。结果表明:菌株LG-B与LG-D对3种苹果病原真菌均有明显的抑制作用。LG-B与LG-D发酵产物的乙酸乙酯萃取物抑菌活性较好,菌株LG-B对苹果腐烂病菌的EC50仅为16.2mg·L~(-1),LG-D对苹果腐烂病菌与苹果轮纹病菌的EC50分别为21.0mg·L~(-1)和52.8mg·L~(-1)。     

富硒香菇发酵液中硒多糖提取工艺的响应面优化

以香菇9608#菌株为试材,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面设计法优化香菇发酵液中硒多糖提取工艺。结果表明:富硒香菇发酵液中提取工艺硒多糖最佳醇沉时间为15.45h、乙醇浓度82.30%、pH 7.95。在此条件下,富硒香菇发酵液中硒多糖产量达到3.23g·L~(-1),香菇发酵液中硒多糖硒含量87.67μg·g~(-1)。利用Box-Behnken响应面设计法得到的富硒香菇发酵液中硒多糖提取工艺参数,可为工业化生产提供必要的技术支持。     

适合虫草素积累的蛹虫草液体培养条件的优化

为了探索蛹虫草液体发酵中适合虫草素积累的培养基和发酵培养条件,以半定量薄层色谱法为检测手段,以虫草素含量为指标,通过单因素试验及正交试验优选的方法,最终优选出的培养基配方为蛋白胨15 g·L-1、葡萄糖20 g·L-1、磷酸二氢钾1 g·L-1、七水合硫酸镁0.5 g·L-1、维生素B110 mg·L-1、荼乙酸2 mg·L-1.优选出的培养条件为发酵液pH7,培养温度25℃,光照时间12h.     

利用阶段pH控制提高灵芝深层发酵合成三萜能力的研究

采用3 L发酵罐考察不同pH发酵条件对灵芝(Ganoderma lucidum)菌丝体生长和灵芝胞内三萜合成的影响。结果表明,在pH4.5条件下,菌丝体干重和胞内三萜含量均最高,分别为12.31 g·L~(-1)和237.91 mg·L~(-1)。根据不同pH条件下,灵芝发酵过程中菌丝体的比生长速率、三萜比合成速率的变化,提出四阶段pH控制策略:0～26 h pH自然,26～36 h pH4.0,36～81 h pH4.5,81～168 h pH5.0,在此条件下,在3 L发酵罐中发酵,灵芝的菌丝体干重为14.18 g·L~(-1),比对照(pH自然)和pH4.5时分别提高59.15%和15.19%,灵芝胞内三萜含量279.59 mg·L~(-1),比对照和pH4.5时分别提高47.72%和17.52%;在50 L发酵罐中进行发酵验证,菌丝体干重和灵芝胞内三萜含量分别为13.54 g·L~(-1)和256.97 mg·L~(-1)。本研究的四阶段pH控制策略可较大幅度提高灵芝胞内三萜产量,且该发酵工艺操作简单易行,可为利用规模化深层发酵技术生产灵芝胞内三萜提供有益的参考。     

不同培养条件对梨花粉萌发的影响

梨树属于异花授粉植物,生产中主要依靠人工授粉,为探索影响梨花粉萌发的因素。试验选择不同品种梨花粉,在不同温度、糖、pH、生理活性物质和抑制剂等条件下,对花粉的萌发状况进行试验观察。结果表明:外界条件对梨花粉萌发存在明显作用,梨花粉萌发和花粉管生长最适宜条件为PEG 150g·L~(-1)、蔗糖浓度150g·L~(-1)、甲酸钠1g·L~(-1)、果胶酶0.1mg·L~(-1)、pH 6.5、培养温度保持25℃左右,在此条件下梨花粉的萌发率最高。     

一株蝉花的ITS序列分析及产纤溶酶条件的研究

以新分离的蝉花(Cordyceps cicadae)CC1504为试材,通过真菌核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列分析确定菌株的分类学地位;利用琼脂糖-纤维蛋白平板法测定蝉花产纤溶酶的能力,通过单因素试验确定其液体发酵产纤溶酶的最适碳源和最适氮源;以正交实验优化菌株产纤溶酶的培养基组成。结果表明:ITS序列进化树分析确定了该菌株的分类地位为蝉花;该蝉花产纤溶酶的最适碳源为乳糖,产酶水平为248.95U·mL~(-1),其次是甘油,为198.94U·mL~(-1);蝉花产纤溶酶的最适氮源为蛋白胨,产酶水平可达240.68U·mL~(-1),其次是酵母膏,为89.23U·mL~(-1);获得的最佳培养基碳氮源组成为:乳糖10g·L~(-1)、蛋白胨10g·L~(-1)、酵母膏3g·L~(-1),可发酵获得的纤溶酶水平达262.05U·mL~(-1)。     

抗番茄灰霉病菌的内生短短芽孢杆菌W4菌株发酵条件优化

为提高内生短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）W4 菌株发酵液对番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）的抑菌活性，采用单因素试验与正交试验设计相结合，优化发酵培养基及发酵条件。结果表明，最佳发酵培养基为蛋白胨 2.0%、果糖 1.0%、NaCl 0.25%；最佳发酵条件为初始pH 8.0、接种种龄20 h、接种量5%、装液量50 mL（250 mL 三角瓶）、发酵温度35 ℃、摇床转速150 r·min^-1、发酵时间24 h。产生的发酵液稀释25 倍对番茄灰霉病菌的抑制率达92.8%，比未经优化得到的发酵液提高26.9 个百分点。通过培养基和发酵条件优化，显著提高了短短芽孢杆菌W4 发酵液活性，为进一步提取分离抗番茄灰霉病菌的活性成分奠定了基础。     

平菇泰山-20变异菌株的鉴别及其菌丝优化培养

通过试验确定了变异菌株平菇泰山-20BY,探讨了在不同碳源、氮源、温度、p H值等条件下对变异菌株菌丝生长的影响。试验结果表明,菌丝生长最适温度24℃~26℃,最适p H值为6~7,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为蛋白胨,最佳培养基配方为葡萄糖20 g·L~(-1)、蛋白胨10 g·L~(-1)、KH_2PO_43 g·L~(-1)和Mg SO_40.5 g·L~(-1)。     

响应面法优化青海野生双孢菇发酵培养基

以野生青海双孢菇(Agaricus bisporus(Lange)Imbach)为试材,以胞外多糖含量为响应值,在单因素试验的基础上,采用4因素4水平响应面分析法,研究了培养基中不同营养因子对其菌丝代谢胞外多糖含量的影响,以确定最佳野生双孢菇发酵培养基。结果表明:最优培养基为甘露醇19.83g·L~(-1),蛋白胨6.35g·L~(-1),维生素B121.61g·L~(-1),硫酸亚铁0.42g·L~(-1),胞外多糖含量最高可达2.002g·L~(-1),与试验模型预测值基本一致。     

番茄灰霉病拮抗菌TB-12菌株发酵条件优化及其生防效果

以灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers.)为指示菌,采用单因素试验与正交实验相结合的方式,对TB-12菌株发酵培养基组成及培养条件进行优化,以提高番茄灰霉病拮抗菌Bacillus velezensis TB-12菌株的抑菌效果,并通过盆栽试验考察了TB-12菌株对番茄灰霉病的防治效果,为今后该菌剂生产工艺条件的进一步确定及其防治应用的开展奠定相应的基础。结果表明:TB-12菌株的最佳发酵培养基组合为乳糖2%,酪蛋白胨4%,MgSO_4·7H_2O 0.1%,KCl 0.05%;最佳培养条件为接种量10%,装瓶量50 mL,初始pH 8,发酵时间60h,培养温度30℃,摇床转速180r·min~(-1)。与采用基础发酵培养基相比,优化后TB-12菌株对灰葡萄孢菌的抑制效果增加了69.4%。盆栽试验表明,优化后TB-12菌株发酵上清液对番茄灰霉病的预防效果达到69.2%,治疗效果达到58.2%,分别提高了32.6%和19.5%。TB-12菌株对番茄灰霉病有良好的防治效果。     

灵芝液体发酵培养条件的响应面法优化研究

为获得更多的灵芝菌丝体产量,以单因素摇瓶试验法研究了发酵温度、发酵时间、发酵液的初始pH对灵芝液体深层发酵的影响;在此基础上,利用响应面法优化了灵芝液体发酵条件。结果表明:这3个因素对菌丝体产量的影响由大到小依次为发酵液的初始pH、发酵时间、发酵温度,而当发酵温度为28.7℃、发酵时间为124h、发酵液的初始pH为5.9时,获得的菌丝体产量最大,为22.89g/L,预测值与实测值吻合得较好。     

土壤中解磷细菌的分离筛选

为筛选出高效的解磷微生物,提高磷的有效利用,采集向日葵、小麦、豆科等不同种植区单株的根际土壤,采用平板溶菌圈法从土壤中进行分离筛选,初步筛选出3株解磷菌JLX-1、JLX-2、JLX-3,研究不同条件对其解磷能力的影响。结果表明:菌株JLX-3的解磷能力较高,溶磷圈直径和菌落直径比值D/d为2.09。菌株JLX-3在碳源为葡萄糖、氮源为硫酸铵时,溶磷量分别为5.572、5.520mg·g~(-1),在氯化钠浓度为0.3g·L~(-1)、pH 7时解磷效果较好。根据形态特征和生理生化特征,初步将菌株JLX-3鉴定为芽孢杆菌。     

吲哚乙酸(IAA)对黑脉羊肚菌胞外SOD活性的影响

为了优化液体发酵环境条件,通过向培养基中添加吲哚乙酸(IAA),改变培养基成分组成的方法,研究吲哚乙酸对黑脉羊肚菌发酵培养产胞外SOD酶以及菌丝体生长的影响。结果表明,黑脉羊肚菌发酵培养过程中,最适菌丝体生长的培养条件为温度28℃,初始p H7,培养时间9 d;最适产酶的培养条件为温度20℃,初始p H5.5,培养时间5 d;IAA添加浓度为1.0μg·m L~(-1)时,菌丝体重量最大为14.03 g·L~(-1),浓度为2.5μg·m L~(-1)时,相对酶活性达到最高。     

毛棉杜鹃茎段组织培养技术的研究

以毛棉杜鹃嫩茎为试材,采用无菌培养方法,研究了外植体灭菌方法、基本培养基的筛选、增殖培养、伸长培养、生根培养、炼苗与移栽,以期建立毛棉杜鹃组织培养快速繁殖体系。结果表明:毛棉杜鹃嫩茎最佳灭菌方法是用70%酒精浸泡10 s,2%NaClO浸泡15 min,用无菌水冲洗5～6次;WPM培养基为最佳的基本培养基;增殖培养基为WPM+ZT 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1),pH 5.0;伸长壮苗培养基为WPM+ZT 0.5 mg·L~(-1)+GA_3 2.0 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1),pH 5.0;生根培养基为WPM+IAA 0.1 mg·L~(-1)+蔗糖1 g·L~(-1),pH 5.0;移栽基质为珍珠岩:草炭土=1∶1配制的培养土,移栽成活率为90%以上。     

蛹虫草深层发酵产虫草素培养基的优化

以蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)NS-810为菌种,通过对接种量的考察,探索不同孢子浓度对蛹虫草液体一级种制作效果的影响;通过单次单因子试验和正交实验,优化深层发酵产虫草素的最佳培养基,筛选制备蛹虫草液体一级种和液体发酵生产虫草素的最佳工艺。结果表明:孢子浓度3.0×10~8 cfu·mL~(-1)时制作的母种最适合作为蛹虫草菌种扩大培养中的一级种子液;深层发酵的最佳培养基配方为葡萄糖25g·L~(-1)、土豆100g·L~(-1)、鱼蛋白胨18g·L~(-1)、(NH_4)_2SO_40.8g·L~(-1)、KH_2PO_41.0g·L~(-1)、MgSO_4·7H_2O 0.5g·L~(-1)、蚕蛹粉5.0g·L~(-1)、维生素B118mg·L~(-1)、水1L。优化后虫草素的总产量为1 144.31mg·L~(-1),较基础培养基提高了1.46倍。分别以价格低廉葡萄糖和鱼蛋白胨作为发酵培养基的碳源和有机氮源,利于蛹虫草产业化发酵生产虫草素。     

杀菌剂对草莓灰霉病菌的毒力测定及田间防效

以"甜查理"草莓为试材,草莓灰霉病菌(Botrytis cinerea)为供试菌,采用菌丝生长速率法,研究了12种杀菌剂对草莓灰霉病菌的影响。结果表明:室内毒力试验中,50g·L~(-1)己唑醇SC的毒力最强,EC_(50)值为0.051 9mg·L~(-1);500g·L~(-1)异菌脲SC、430g·L~(-1)戊唑醇SC和400g·L~(-1)氟硅唑EC对草莓灰霉病菌也有很好的抑制作用。田间试验中,50g·L~(-1)己唑醇SC对草莓灰霉病的防治效果最好,防治效果达81.57%~85.42%;500g·L~(-1)异菌脲SC、430g·L~(-1)戊唑醇SC和400g·L~(-1)氟硅唑EC对草莓灰霉病也具有较好的防治效果,防治效果均在74%以上;10%多抗霉素WP和3%中生菌素WP对草莓灰霉病也有一定的防治效果,防效均能达到65%以上。