基因工程技术

基因工程是70年代初兴起的一门新技术,它是用人工方法把不同生物的遗传物质分离出来,在体外进行剪切、拼接、重组在一起,然后再把其重组体放回宿主细胞内进行大量复制,并使遗传信息在新宿主细胞或个体中高效表达,最终获得基因产物。这种人工创造新生物并给予生物以新功能的过程称为基因工程。把新的遗传物质引入细胞,需要克服一系列的技术难关。第一,要从复杂的生物有机体基因组中,经过酶切消化等步骤,分离出带有目的基因的DNA片段。第二,在体外将目的基因连接到能够自我复制并具有选择记号的载体分子上,形成重组DNA分子。第三,必须有一种良好的手段将重组DNA分子转移到适当的受体细胞。第四,受体细胞必须能在各次细胞间期复制这种新获得的DNA,这就需要从大量的细     

科技动态

基因疫苗的免疫方法即基因疫苗的给药途径，目前使用的方法有以下几种：①裸DNA直接注射：将裸质粒DNA直接注射到机体的肌肉、皮内、皮下、粘膜、静脉内。这种方法简单易行；②脂质体包裹DNA直接注射：包裹DNA的脂质体能与组织细胞发生膜融合，而将DNA摄入，减少了核酸酶对DNA的破坏。注射途径同裸DNA直接注射；③金包被DNA基因枪轰击法：将质粒DNA包被在金微粒子表面，用基因枪使包被DNA的金微粒子高速穿入组织细胞；④繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法：选择一种容易进入某组织器官的细菌，将其繁殖基因去掉，然后用质粒DNA转化…     

非洲猪瘟病毒免疫调节基因的功能及其在病毒感染和致病中的作用

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病，ASFV强毒株感染家猪的发病率和致死率可达100%。由于没有安全有效的疫苗和药物，ASF疫情已经给世界养猪产业造成了巨大的经济损失。ASFV是一种有囊膜的双链DNA病毒，能够编码150～200种蛋白。ASFV编码的一些蛋白参与病毒入侵、基因组复制、DNA修复和病毒粒子组装；另外一些蛋白还执行免疫调节功能，在逃逸宿主抗病毒免疫反应中发挥着重要的作用，如调控NF-κB信号、干扰素(IFN)信号和炎症反应，调控细胞死亡和细胞自噬等。本综述将编码调控NF-κB信号、天然免疫反应、炎症反应、细胞死亡和细胞自噬等功能的ASFV蛋白的基因，统一称为ASFV免疫调节基因。大量研究证据表明，ASFV免疫调节基因与病毒的致病力密切相关。缺失一个或多个ASFV免疫调节基因的ASFV毒株毒力降低，用这些减毒毒株免疫猪可以抵抗ASFV强毒株的攻击。然而，ASFV免疫调节基因在ASFV感染和发病过程中如何发挥作用仍然未知。因此，本综述对ASFV免疫调节基因的功能及其在病毒感染和致病中的作用进行了总结，以期为研究AS...     

牛基因组DNA两种提取方法的比较研究

研究哺乳动物基因组DNA的水煮抽提法，并将传统的酚仿抽提法和水煮法进行比较，水煮法即通过对细胞的煮沸和冷却，使细胞破裂、蛋白变性，从而获得用于PCR扩增的模板DNA的方法。通过电泳分析和PCR扩增检测了所提取基因组DNA的完整性、可行性。检测时采用3对引物对2种方法提取的DNA进行了PCR扩增，同时对冷冻保存的基因组DNA也进行了扩增检测。结果表明：水煮法提取基因组DNA是一种快速、简便、经济、高效的方法。     

基因药物对动物生长的影响

正一、基因药物基因药物也称DNA药物,是基因工程药物的一种。基因工程药物包括重组蛋白多肽药物、反义核酸药物、DNA药物和基因工程抗体等。它是将具有治疗意义的基因重组进真核表达载体,再直接转移到动物或人的细胞内,表达出具有治疗作用的多肽或蛋白质,从而达到预防疾病、治疗疾病、调节动物生长、生产性能等目的。它与传统的蛋白质工程药物不同,不需要在体外合成和表达蛋白质,也不需要在体外     

基因芯片技术在药物研究中的应用

生物芯片是由现代分子生物学技术结合微加工技术制成的具有一定生物学分析检测功能的微型器件，以DNA芯片和PCR、毛细管电泳及介电电泳为代表。九十年代以来，在人类基因组实施计划的推动下，DNA芯片技术得到了迅猛的发展，具在生命科学的研究中开始发挥作用。DNA芯片技术能够同时分析成千上万个基因或基因组，研究与疾病诊断相关的基因序列，可用于药理基因组学研究与基因重复测序工作，它在药学领域将对于药物靶标的发现、多靶位同步超高通量药物工筛选、药物作用的分子机理研究、中医药基础理论的现代化、药物活性和毒性评价等领域具有其它方法无可比拟的优势。美国Affymetrix公司已开始与Merck公司、Hoffmanlaroche公司等合作，将基因芯片技术用于新药筛选；Incyte Pharmaceuticals,Synteni,Nanogen等公司也采用基因芯片技术进行新筛选，以期从天然药物或合成物中筛选出基因相关药物。     

DNA疫苗在猪病防制中的研究应斥及其优缺点分析

一、DNA疫苗的免疫机理 DNA疫苗（DNAvaccine）又称基因疫苗、核酸疫苗,由病原抗原编码基因及质粒载体两部分组成。抗原基因可以是单个基因或完整的一组基因,也可以是编码抗原决定簇的一段核苷酸序列,质粒载体可在真核细胞中表达外源基因。DNA疫苗是将编码目的抗原蛋白基因序列的真核质粒,经各种基因转移途径导入机体细胞,通过宿主细胞转录、翻译、表达出相应的抗原蛋白,     

兽医抗感染药物的合理应用（六）——抗病毒药的开发与应用

由于病毒结构简单，仅由一种核酸RNA或DNA和蛋白质组成，缺乏完善的酶系统，有严格的寄生性，需借助宿主细胞的功能而繁殖。病毒只能在敏感的细胞内培养或感染易感机体。抗病毒药物必须通过细胞膜，进入细胞，始可作用于病毒。不少抗病毒物质对细胞或机体有毒而不能应用，大大限制了抗病毒药物的发展。一种有效的抗病毒药物必须是既能防止病毒吸附于宿主细胞表面，     

DNA疫苗在猪病防制中的研究应用及其优缺点分析

一、DNA疫苗的免疫机理 DNA疫苗(DNA vaccine)又称基因疫苗、核酸疫苗,由病原抗原编码基因及质粒载体两部分组成.抗原基因可以是单个基因或完整的一组基因,也可以是编码抗原决定簇的一段核苷酸序列,质粒载体可在真核细胞中表达外源基因.DNA疫苗是将编码目的抗原蛋白基因序列的真核质粒,经各种基因转移途径导入机体细胞,通过宿主细胞转录、翻译、表达出相应的抗原蛋白,诱导宿主产生针对该抗原蛋白的保护性免疫应答,从而达到免疫的目的.     

基因打靶技术及其应用

基因打靶技术是通过将外源DNA的同源序列和活细胞内的染色体DNA发生同源重组，达到定点修饰染色体上某一特定基因的一种分子生物学技术。它与克隆技术的结合发展为畜牧生产中的动物育种工作开辟了广阔的前景，为人类带来更多、更好的食物和药物，人类健康将获得更好的保障。     

SAH对猪成纤维细胞体外增殖及甲基化水平的影响

本文旨在研究DNA甲基转移酶抑制剂S-腺苷高半胱氨酸（SAH）对猪成纤维细胞体外增殖活力、周期、凋亡和DNA甲基化水平的影响，为SAH在猪体细胞核移植上的应用提供理论基础。使用不同浓度的SAH(0、0.01、0.1、0.5、1mmol/L)处理猪成纤维细胞，通过CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞周期与凋亡，ELISA检测DNA甲基化水平，qRT-PCR检测相关基因表达情况。结果表明：与其余各组相比，0.1mmol/LSAH处理猪成纤维细胞24h对细胞活力和凋亡无明显影响，但可将细胞周期阻滞在G0/G1期（P<0.05）；与对照组相比，0.1 mmol/L SAH处理24 h可显著降低细胞中DNA甲基化水平及DNA甲基转移酶相关基因DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的表达，同时，显著提高细胞周期调控基因P21、P27的表达，但对凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达无明显影响。总的来说，0.1 mmol/L SAH处理24 h效果优于其他组，对细胞损伤较小，可通过影响DNA甲基转移酶相关基因表达来参与调控DNA甲基化水平。     

DNA疫苗的免疫调节和接种方案的研究进展

1993年Ulmer等报道将含有流感病毒基因的质粒直接肌注于小鼠体内可诱导全面的免疫应答，并可抵抗流感病毒攻击。至此，被誉为“疫苗的第三次革命”的DNA疫苗技术应运而生。DNA疫苗与传统疫苗相比有多种优势：DNA疫苗生产简便，储运方便；能够诱导机体产生体液和细胞免疫；能够根据宿主细胞的表面蛋白．在细胞内表达天然的、     

我国主要地方绵羊品种mtDNA细胞色素b基因PCR-RFLP研究

应用PCR-RFLP方法，对我国9个地方绵羊品种和3个引人品种共计120个个体的线粒体DNA(mtDNA)细胞色素b(cyt b)基因进行了分析。结果表明，12种限制性内切酶在所研究的个体中共检测到22个酶切位点，15种限制性态型，其中StuⅠ、EcoRⅠ和MboⅡ表现出多态，15种限制性态型归结为4种基因单倍型，即单倍型Ⅰ、单倍型Ⅱ、单倍型Ⅲ和单倍型Ⅳ。单倍型Ⅰ为受试绵羊品种的基本单倍型。线粒体DNA细胞色素b基因遗传多态度为0．0142％，说明我国地方绵羊品种线粒体DNA多态度贫乏。     

犬瘟热病毒中国分离株囊膜糖蛋白基因免疫小鼠诱发的抗体应答

将CDV中国分离株(YZ0101)的两囊膜糖蛋白基因F和H与pGEM—rreasy载体构建的重组质粒分别采用EcoRI和Kprd、BamHI和Kpnl双酶切后定向克隆进真核表达载体pcDNA3．1(-)中，DNA测序和限制性酶切分析筛选阳性克隆pcDNA-H和pcDNA-F，以重组质粒DNA和脂质体共转染COS-7细胞，用间接免疫荧光试验验证转染的COS-7细胞胞浆中分别表达了CDV的H和F蛋白。以聚乙烯胺(PEI)为佐剂，将犬瘟热病毒F和H基因重组质粒pcDNA-H和pcDNA-F的DNA分别或混合肌注6周龄BABI／c小鼠，同时设pcDNA原载体DNA对照。以2周为间隔共免疫4次。最后一次免疫后3周，采血分离血清，酶联免疫吸附试验(ELISA)和病毒中和试验(SN)分析基因免疫在小鼠体内诱导的免疫应答。结果显示：pcDNA-H和pcDNA-F试验组免疫4次后分别激发了10^2.99 0.134、10^2.93 0.164滴度的ELISA抗体；两种质粒DNA混合免疫后产生了1：32～1：128的抗CDV的中和抗体；而原载体DNA免疫后，用ELISA和SN未检测出特异的CDV抗体。表明犬瘟热病毒囊膜糖蛋白F和H基因免疫小鼠可诱发产生特异性的体液免疫。     

中药调节细胞凋亡机理的研究进展

细胞凋亡是一种细胞自杀行为,又称程序性细胞死亡。其机制涉及到一系列基因的激活表达和调控。本文从中药及其有效提取物制剂对细胞DNA复制、细胞凋亡途径、凋亡信号传导、凋亡相关基因表达、细胞因子的影响等方面,对中药调节细胞凋亡的作用机理做一综述。     

核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗又称基因疫苗，包括DNA疫苗和RNA疫苗。目前研究最多的是DNA疫苗，由于其不需要任何化学载体，又称裸DNA疫苗，主要是利用基因重组技术直接将编码抗原蛋白的外源抗原基因导入动物体细胞内，在宿主细胞中表达外源抗原基因，诱导宿主产生对该抗原的免疫应答，从而使被接种动物获得免疫保护。     

DNA微阵列与基因表达研究概况

DNA微阵列技术是 90年代兴起的一种对成百上千甚至上万个基因同时进行检测的新技术 ,它具有高通量和并行化的特点 ,广泛应用于基因表达、预测基因功能、检测基因突变和多态性分析、发现新药物和药物靶器官以及疫苗设计等方面。文章对 DNA微阵列的基本原理、DNA微阵列制备技术、杂交信号检测以及数据分析。 c DNA微阵列与细胞周期相关基因表达、细菌基因表达、病毒基因表达、肿瘤基因表达进行了概述。     

牛坏死杆菌对EPH4细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

为探究牛坏死杆菌对小鼠乳腺上皮细胞系(EPH4细胞)增殖和凋亡的影响，本研究将坏死杆菌(牛A25菌株)以感染复数(MOI)为100感染EPH4细胞，用EdU细胞增殖法检测细胞增殖率，用Hoechst染色以及DNA Ladder检测细胞凋亡，并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测凋亡基因的mRNA相对表达量变化。EdU检测结果显示，坏死杆菌可抑制EPH4细胞增殖；Hoechst染色以及DNA Ladder检测结果均显示，坏死杆菌可促进细胞凋亡的发生；RT-qPCR结果显示，与对照组相比，坏死杆菌感染EPH4细胞2 h时，促凋亡基因Bax、Bax/Bcl-2的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),感染4 h时，促凋亡基因Caspase-3和Caspase-9的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001),感染6 h时，促凋亡基因AIF的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001)。由此可见，牛坏死杆菌能够抑制EPH4细胞增殖且诱导细胞凋亡，为进一步研究坏死杆菌致病机制提供了相关数据支持。     

杆状病毒表达系统研究进展及在寄生虫基因工程疫苗中的应用前景

近年来，应用是昆虫杆状病毒作载体在昆虫细胞或虫体中高效表达的外源基因已有近千种。这一杆状病毒表达系统（baculovirus expression vector system,BEVS)是一种辅助性依赖性（仅有质粒载体不能表达外源基因，还需要野生型杆状病毒辅助，形成整合有外源基因的重组型杆状病毒才能完成外源基因的表达）的真核DNA表达载体，具有安全、高效、容量大、表达产物生物活性好等特点，是很有潜力的载体表达系统之一，在寄生虫的基因工程疫苗方面也进行了有益的尝试，具有很大的应用前景。     

四个微卫星标记在苏钟猪中的多态性分析

微卫星标记是近年来发展起来的一种检测基因DNA多态性的新型DNA标记，因其数量多、分布广、多态性丰富及检测方便等优点而倍受推崇。本文利用四个微卫星标记分析其在苏钟猪中的遗传多样性。结果表明，四个微卫星座位在苏钟猪中均存在较高的遗传多样性，基因杂合度为0.5962-0.8823；多态信息含量为0.5146-0.8709；有效等位基因数为2．4768-8．4935。以上结果表明，本研究采用的四个微卫星标记可以作为苏钟猪的遗传多样性的标记辅助选择。