中国沙棘体细胞胚胎间接发生与植株再生

以中国沙棘组培苗茎尖为外植体,在1/4 MS基本培养基上,对愈伤组织、胚性愈伤组织及体细胞胚胎进行诱导,探讨植物生长调节剂配比对中国沙棘愈伤组织、胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚发生的影响。结果表明:在KT 1.0 mg/L + NAA 0.3 mg/L的最佳组合中,暗培养20 d后,愈伤组织的诱导率达到90.10%;暗培养30 d后,胚性愈伤组织的诱导率达到77.67%;将胚性愈伤组织转移到新鲜诱导培养基上,光培养20 d,平均体细胞胚发生数达到15.48。为了得到完整的再生小植株,将胚状体转移到不含任何生长激素的体细胞胚发育及植株再生培养基上,分析了KT和白砂糖不同浓度的组合对小植株再生的影响。结果发现:WPM + KT 0.05 mg/L + 白砂糖 20 g/L + 琼脂粉 6.5 g/L + CH 0.5 g/L处理上的植株再生率达到60.30%。该研究建立起了完整的中国沙棘体细胞胚胎间接发生的再生体系。      

海南地区油茶未成熟胚分生结节的植株再生

[目的]建立海南地区油茶未成熟胚再生体系,为油茶组培快繁和遗传转化研究提供技术支持.[方法]以海南本地油茶合子胚为外植体,对其进行初代诱导、分化和增殖培养,筛选出最适于诱导分化的外植体胚发育时期,明确植株再生途径,从而建立分生结节组织植株再生体系.[结果](1)盛花期后240~300 d的油茶幼胚在改良MS+激动素(KT)2.0 mg/L+萘乙酸(NAA)0.2 mg/L+玉米素(ZT)5.0 mg/L培养基上,初代诱导率在90.0%以上,以分生结节组织为主;(2)分生结节组织的适宜增殖培养基为改良MS+KT 1.0~2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖系数约4.6;(3)未成熟胚分生结节组织的分化培养基为改良MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA)2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+吲哚-3-乙酸(IAA)0.2 mg/L+ZT 5.0 mg/L+酸水解酪蛋白(CH)400.0 mg/L,平均每块分生结节组织诱导不定芽11.3个,不定芽以无糖暴露培养生根方式生根,移栽成活率为91.6%;(4)分生结节组织在改良MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+ZT 5.0 mg/L+CH 400.0 mg/L上以分化体细胞胚状体为主,每块分生结节分化6.5个体细胞胚状体,具双子叶的体细胞胚状体在改良MS+6-BA 0.2 mg/L+IAA 2.0 mg/L+赤霉酸(GA3)0.5 mg/L+CH 200.0 mg/L培养基上有效成熟和萌发,萌发率为72.1%,胚芽和胚根有效伸长形成体胚再生植株,移栽成活率为94.7%.[结论]以油茶未成熟合子胚为外植体,通过分生结节组织方式增殖,可经体细胞胚状体发生和不定芽发生两种途径成功建立海南油茶未成熟胚分生结节植株再生体系.     

非洲菊组织培养与快速繁殖试验研究

以非洲菊的花托、茎尖、花梗为外植体进行组织培养快速繁殖试验,结果表明:适合花托外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为"池上真一培养基"+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L,适合茎尖外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为MS+KT 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L,适合花梗外植体愈伤组织不定芽诱导的培养基为MS+6-BA 10 mg/L+IAA 0.5 mg/L;适合非洲菊试管苗继代增殖的培养基为MS+KT 10 mg/L+IAA0.5 mg/L;适合非洲菊试管苗生根培养的培养基为1/2 MS+NAA 0.03 mg/L。     

北美蓝云杉体细胞胚发生技术研究

研究北美蓝云杉体细胞胚发生技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系等具有一定的理论意义。以成熟胚为外植体,分别对基本培养基、生长调节剂种类和浓度对其体细胞胚发生各阶段的影响进行了研究,同时观察体细胞胚发生过程的形态特征。结果表明:1)胚性愈伤组织诱导培养基,首先在DCR培养基+2,4-D5.0mg/L+6-BA4.0mg/L+KT2.0mg/L诱导15d后,之后转入DCR培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,胚性愈伤诱导率最高为45.3%;2)胚性愈伤组织保持与增殖培养基为1/2LM培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+PEG40001.0g/L,胚性愈伤组织增殖率最高为102.27%;3)IBA可促进成熟体细胞胚的诱导,以1/2LM+IBA0.5mg/L+ABA2.0mg/L(以上4种培养基均附加蔗糖30g/L,谷氨酰胺450mg/L,水解酪蛋白500mg/L,琼脂5.0g/L,pH=5.8)的体细胞胚诱导率最高,为38.10%;4)在1/2MS+1.0g/L活性炭的培养基上,体细胞胚萌发,子叶生长但胚根发生较少。北美蓝云杉体细胞胚诱导过程中出现严重的畸形胚现象及生根难的问题,今后有待进一步研究。     

樟树胚性愈伤组织诱导与体胚发生研究

以樟树未成熟合子胚为外植体,探讨了外植体取材时间、植物生长调节剂配比、附加有机物等因素对胚性愈伤组织诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的影响。结果表明:不同采集时期的合子胚愈伤组织诱导率差异显著,只有心形胚时期的合子胚才能诱导胚性愈伤组织;在改良MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA培养基初诱导情况下,后接入改良MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D培养基中,胚性愈伤组织诱导率可达77.78%;外加添加200 mg/L水解络蛋白和200 mg/L环糊精可保持胚性愈伤组织增殖和体细胞胚诱导,胚性愈伤组织增殖系数达3.86,每克愈伤组织平均分化116.67个体细胞胚,胚性愈伤组织继代周期以25～30 d为宜。在改良MS+200 mg/L环糊精+1.0 mg/L ABA+0.5 mg/L IAA中可以促使体胚成熟萌发,萌发率可达52.78%。将萌发的芽体转接到MS+0.1 mg/L BA+0.5 mg/L IAA+0.2 g/L AC生根培养可获得完整植株。     

黄瓜胚状体途径再生体系的建立

【目的】建立黄瓜高频胚状体再生体系,为黄瓜遗传转化体系的完善奠定基础。【方法】以黄瓜品种津研四号、长春密刺、Q8和14-1为材料,研究不同基因型材料愈伤组织的诱导情况;分别取14-1的子叶、子叶节、下胚轴和成熟胚为外植体,研究不同外植体类型的愈伤组织和胚状体产生情况;以14-1子叶节为外植体,研究不同激素及其质量浓度配比对黄瓜胚状体诱导的影响。【结果】4个不同基因型中,欧洲温室型黄瓜种质14-1可诱导出胚状体。在4种外植体类型中,14-1的子叶节可以高效诱导出愈伤组织和胚状体,其诱导率分别为100.0%和34.1%。激素及其质量浓度组合也会影响胚状体的诱导,在愈伤组织诱导阶段,以MS+1.5mg/L 2,4-D为培养基对胚性愈伤组织的诱导效果最好,其对14-1子叶节的诱导率为100%;在分化培养阶段,MS+0.1mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.2mg/L IAA有利于体细胞胚的发生,14-1的出胚率为62.5%。显微形态观察发现,黄瓜体细胞胚发育过程包括球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶期胚等时期,这些胚可以发育成正常小植株。【结论】14-1的子叶节经诱导培养基MS+1.5mg/L 2,4-D和分化培养基MS+0.1mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.2mg/L IAA培养后,可高效产生胚状体,并可萌发成正常植株。     

紫云英体细胞胚再生体系的建立

研究了外植体种类、植物激素以及水解酪蛋白(casein hydrolysate,CH)浓度等因素对紫云英体细胞胚诱导及植株再生的影响,建立了紫云英体细胞胚的再生体系。结果表明:子叶柄在MS+4 mg/L 2,4-D+1 000 mg/L CH的培养基上,体细胞胚诱导率最高,达到58.3%;体细胞胚分化和植株再生培养基为1/2MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+1 g/L CH,再生率达到60.0%。研究结果为紫云英品种的选育及改良提供了新思路。     

黄瓜胚状体途径再生体系的建立

【目的】建立黄瓜高频胚状体再生体系，为黄瓜遗传转化体系的完善奠定基础。【方法】以黄瓜品种津研四号、长春密刺、Q8和14-1为材料，研究不同基因型材料愈伤组织的诱导情况；取14-1品种的子叶、子叶节、下胚轴和成熟胚为外植体，研究不同外植体类型的愈伤组织和胚状体产生情况；以14-1子叶节为外植体，研究不同激素及其质量浓度配比对黄瓜胚状体诱导的影响。【结果】4个不同基因型中，欧洲温室型黄瓜种质14-1可诱导出胚状体。在4种外植体类型中，14-1的子叶节可以高效诱导出愈伤组织和胚状体，其诱导率分别为100.0%和34.1%。激素及其质量浓度组合也会影响胚状体的诱导，在愈伤组织诱导阶段，以MS+1.5 mg/L 2,4-D为培养基对胚性愈伤组织的诱导效果最好，其对14-1子叶节的诱导率为100%；在分化培养阶段，MS+0.1 mg/L 2,4 D+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L IAA有利于体细胞胚的发生，14-1的出胚率为62.5%。显微形态观察发现，黄瓜体细胞胚发育过程包括球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶期胚等时期，这些胚可以发育成正常小植株。【结论】14-1的子叶节经诱导培养基MS+1.5 mg/L 2,4-D和分化培养基MS+0.1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L IAA培养后，可高效产生胚状体，并可萌发成正常植株。     

龙翅海棠组织培养快速繁殖体系研究

以嫩叶和茎段为外植体对龙翅海棠进行离体培养与植株再生研究,结果表明:嫩叶和茎段的最适芽诱导分化培养基为MS KT 0.5 mg/L IAA 0.2～1.0 mg/L,接种培养30～40 d;最适继代增殖培养基为MS KT 0.5 mg/L IAA 0.2 mg/L,培养时间为25 d;壮苗生根培养基为1/2 Ms NAA 0.2 mg/L IBA 0.2 mg/L 2%蔗糖 琼脂3 g/L,培养时间为15～20 d.     

东北天南星体细胞胚胎发生及植株再生体系的优化

为建立东北天南星体细胞胚胎发生体系,以东北天南星幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果表明,东北天南星叶片胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为MS+6-BA 2.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L,诱导率为98%;体细胞胚胎发育及植株再生最适宜的培养基为MS+6-BA 0.9 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 0.1 mg/L,体细胞胚萌发率为99.5%,萌发的胚20 d后全部发育成完整植株。     

杂交构树体细胞胚诱导研究

以杂交构树叶片为材料,建立通过愈伤组织制备体细胞胚的技术途径。结果表明,光照强度750 lx、构树幼叶面积4~5 cm~2有利于诱导愈伤组织。最佳诱导培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,pH值6.0,其愈伤组织诱导率达94.6%。构树愈伤组织最佳继代培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT,p H值6.2,愈伤组织增殖速度快。选择表面颗粒多、质地松软、浅黄色或白色的愈伤组织进行体细胞胚诱导,最佳诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,p H值6.4,体细胞胚的发生频率达到96.0%。     

月季“黄和平”体细胞胚诱导的初步研究

以月季(Rosa chinensis)“黄和平”的幼嫩叶片为外植体,研究了不同植物生长调节剂对其愈伤组织和体细胞胚诱导的影响.结果表明,在愈伤组织诱导试验中,MS+3 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA效果最好,诱导率达94.8％;在体细胞胚诱导试验中,其最适诱导培养基为MS+1.2 mg/L TDZ,暗培养8d后转入光下培养,体细胞胚诱导率最高,达33.3％,暗培养超过8d,外植体易形成愈伤组织而不利于体细胞胚的诱导.     

白鹤芋花序体细胞胚胎诱导与快繁途径研究

以白鹤芋花序为外植体,研究影响白鹤芋花序体细胞胚胎诱导、增殖、萌发和植株再生转化的主要因子。结果表明,体细胞胚胎直接诱导的最适培养基为MS+5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA,体细胞胚胎增殖最适培养基为MS+5.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L ZT+0.2 mg/L NAA,体细胞胚胎萌发最适培养基为MS+0.1 mg/L IBA+0.4 mg/L GA_3+30 g/L蔗糖,植株再生转化最佳激素配方为0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L GA_3。     

贵州非洲菊主栽品种工厂化育苗技术研究

为生产提供优质的非洲菊种苗,以非洲菊桔红品种大零88和红色品种热带草原的幼蕾为外植体,选用MS为基本培养基,附加激素6-BA、KT和NAA,研究了不同激素浓度组合对外植体不定芽分化、增殖培养和生根培养的影响.结果表明:诱导芽分化时,大零88以MS+6-BA 6mg/L+KT 4mg/L+NAA 0.1 mg/L的效果最佳;热带草原以MS+6-BA 9 mg/L+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L的效果最佳.增殖培养中,大零88以MS+6-BA 0.3～0.5mg/L+KT 0.2～0.4mg/L+NAA 0.01～0.05mg/L为佳;热带草原以MS+6-BA 0.2～0.4mg/L+NAA 0.01mg/L为佳.生根培养大零88以MS+NAA 0.4mg/L+IAA 0.1 mg/L的生根率达100%,热带草原以MS+NAA 0.3～0.4 mg/L+IAA 0.1～0.2 mg/L的生根培养基最好.     

非洲菊茎尖离体培养技术研究

以非洲菊品种‘F53’的茎尖作为外植体进行离体培养技术研究,为建立以茎尖为外植体的非洲菊高频、高效、稳定的工厂化育苗技术体系奠定基础。结果表明,适宜于不定芽诱导的培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA1mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖25g/L;增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+蔗糖20g/L;最适生根培养基为1/2MS+IBA0.1mg/L+蔗糖15g/L。     

球根海棠"金正日"的离体培养研究

通过诱导胚状体建立组织培养再生系统,研究了球根海棠"金正日"的离体培养.结果表明,外植体经HgCl2溶液表面消毒后,接种到MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 1 mg/L培养基上诱导愈伤组织,15 d后转接到1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导胚状体,诱导率90%以上.胚状体在MS+6-BA 0.3 mg/L +NAA 0.03 mg/L培养基上以丛生芽形式增殖,增殖系数达4～8倍.试管苗生根可采用MS+IBA 0.1 mg/L、蔗糖2%培养基.生根率100%.     

切花非洲菊组培快速繁殖技术研究

切花非洲菊进行组织培养大量快速繁殖时,花托是较理想的外植体材料,采用不同的培养基配方组合,结果表明,愈伤组织诱导培养基为:1/2MS+6-BA8.0mg/L+NAA0.1mg/L+IAA0.1mg/L,增殖培养基为MS+KT 8.0mg/L+NAA0.2mg/L,诱导生根培养基为:1/2MS+NAA0.1mg/L,均加3%蔗糖、0.7%琼脂,在pH值5.8～6.0、培养温度25±2℃、光照度1 500～2 000Lx、光照12h/d的条件下培养,继代培养周期为20～25d,经出瓶前后的适时炼苗,成活率达90%以上。     

苜蓿植株再生及PPRV-F基因转化条件的研究

以苜蓿品种甘农1号下胚轴为外植体,研究不同培养基对苜蓿愈伤组织、体细胞胚形成的影响,通过体细胞胚发生途径建立再生体系,在此基础上,摸索农杆菌介导小反刍兽疫病毒F基因的转化条件。结果表明:所选培养基愈伤组织诱导率均为100%,UM+0.1mg/L NAA+0.5mg/L KT为诱导体细胞胚的最佳培养基。农杆菌介导的苜蓿遗传转化条件为:下胚轴预培养3d,农杆菌菌液侵染15min,然后在培养基上铺一层灭菌滤纸共培养3d后清洗,选择压为卡那霉素(Km)75mg/L,抑菌浓度为头孢霉素(Cef)300mg/L。本研究为制备防治小反刍兽疫转基因植物疫苗奠定了基础。     

毕克齐山药离体培养诱导再生植株的研究

分别以毕克齐山药零余子、带节茎段为外植体,通过离体培养研究不同激素、不同浓度MS培养基对诱导再生植株的影响。结果表明:以零余子做外植体时,无附加激素的1/4MS培养基效果最好,再生植株诱导率达到40%。以节间为外植体时,MS+NAA2.0mg/L+KT0.5mg/L培养基再生植株诱导率达到95%。     

三倍体薄皮甜瓜高效再生体系和遗传转化体系的建立

目的:建立起高效三倍体薄皮甜瓜再生体系和遗传转化体系。方法:以哈研3号薄皮甜瓜为试材,采用组织培养技术,在二倍体甜瓜再生体系的基础上,摸索外植体类型、外源调节剂种类和配比,以及各阶段的培养条件。结果:三倍体薄皮甜瓜再生最佳外植体为带有叶芽的茎段,芽诱导率为94%;芽诱导培养基最佳组合为:MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L,Agr 1.0%;芽伸长培养基最佳组合为:MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L,Agr 1.2%;壮苗培养基为:MS+6-BA 0.2 mg/L+GA30.1 mg/L,Agr 1.2%;生根培养基最佳组合为:1/2MS+NAA 0.5 mg/L,Agr 1.0%;培养条件为:25℃、14h光照/12h黑暗;确定卡那霉素的筛选浓度为2.5mg/L;确定头孢唑啉钠的除菌浓度为500 mg/L。结论:建立三倍体薄皮甜瓜高效再生体系和遗传转化体系,为今后的大量扩繁和转基因研究打下基础。