检测实验动物弓形虫感染的两种PCR方法的建立和比较

为了建立敏感、稳定、特异的PCR检测体系，用于实验动物弓形虫感染的检测。采用B1基因设计引物，建立常规PCR，用P30基因设计引物，建立巢式PCR；用两种PCR方法检测实验感染弓形虫小鼠血液和腹腔波中的DNA动态变化；用巢式PCR检测自然状态下的普通级豚鼠、教学和科研用兔的弓形虫感染率，并和常规PCR检到结果比较。结果，巢式PCR可检测到1fgDNA含量，比常规PCR敏感lOO倍；对其他微生物DNA无交叉现象，特异性强；对同一样品重复检测3次，阴、阳性结果一致，稳定性好。小鼠感染弓形虫2d后，巢式PCR对小民腹腔液的阳性检出率为83．3％，对血液的阳性检出率为33．3％；感染3d后，腹腔液阳性检出率为100％；而常规PCR在小鼠感染3d和4d后才能在腹腔液和血液中检测到，检出率各为16．7％。受检普通级豚鼠没有感染弓形虫，教学和科研用兔的弓形虫总感染率为14．3％。结论认为，巢式PCR方法可用于实验动物弓形虫早期感染的检测，具有敏感性高、特务性强、稳定性好的特点。     

Chinese1弓形虫对雄性小鼠生殖系统的病理损伤

雄性BALB/c小鼠腹腔注射10~4个绵羊源弓形虫TgSheepCHn1(Chinese1)速殖子,分别采集弓形虫感染后2,4,6,8,10 d(days post infection,DPI)和6周的小鼠血清、睾丸、附睾、输精管、精囊腺、尿道球腺和凝固腺,血清检测睾酮含量,采用HE和IHC染色方法分析生殖系统的病理损伤情况和弓形虫的分布。结果发现,与对照组比较,雄性BALB/c小鼠感染弓形虫后睾酮含量先增加,8 DPI后减少(P0.05)。6 DPI后,小鼠生殖器官出现病理损伤,特点为副性腺生殖器官:睾丸曲细精管内生精细胞层数减少,生精细胞数目减少并且排列紊乱;睾丸和附睾管内精子数量减少,精囊腺内分泌蛋白减少,实质少见炎症反应;精囊腺、尿道球腺和凝固腺上皮细胞变性、脱落。6 DPI后,在各器官均可观察到弓形虫,多分布在被膜疏松结缔组织和间质,且随感染时间延长,弓形虫数量显著增加(P0.05)。感染后6周,睾酮和生殖系统结构未见明显异常表现。结果表明,小鼠感染弓形虫,对睾酮含量影响不明显,但虫体可侵入雄性生殖系统和副性腺,并引起损伤,推测弓形虫急性感染可减弱雄性动物生育功能,并可能通过精液传播。     

上海市宠物门诊犬弓形虫病流行病学调查

为监测自2002年起弓形虫病防控技术实施以来上海市区犬弓形虫病的感染情况,本研究应用弓形虫PAPS快速诊断试剂和/或间接血凝诊断试剂,对2001～2009年间在宠物门诊就诊的共1 335只犬的血清样品进行抗体检测,对疑似病例犬再结合Nested PCR检测、染色镜栓及磺胺药物治疗进行验证.PAPS/IHA结果显示2001～2002年间、2003～2007年间及2008～2009年间犬抗体阳性率分别为11.67%,4.03%、4.51%和3.94%.疑似病例经犬血清学检测、基因检测及病原检测等结果表明上海存在少量感染弓形虫病犬.本次调查表明上海市区仍然存在犬弓形虫感染,但犬弓形虫病防控技术的实施对降低感染起到一定作用.     

猫弓形虫病

弓形虫病又称弓形体病、弓浆虫病.是由龚地弓形虫(简称弓形虫)引起的一种人兽共患的寄生虫病.弓形虫是猫的一种肠道球虫,猫是弓形虫的终宿主.人及其它动物是中间宿主.多数猫呈隐性感染,该病往往被忽视.有明显症状的猫很少见到,现将我们遇到的5只患弓形虫病猫的诊治情况汇报如下:     

法氏囊素对环磷酰胺诱导昆明小鼠免疫抑制的阻断试验

本试验旨在探究法氏囊素(BS)对环磷酰胺(CP)诱导的昆明小鼠(KM小鼠)免疫抑制的阻断作用.选取24只3周龄KM小鼠随机分成对照组(Ⅰ)、环磷酰胺组(Ⅱ)和环磷酰胺+法氏囊素组(Ⅲ)三个组,在22日龄时,第Ⅲ组小鼠按体重腹腔注射BS 0.02 mL/g,同时第Ⅰ、Ⅱ组小鼠腹腔注射等量生理盐水;25日龄时,Ⅱ和Ⅲ组分别按体重注射CP 0.5 mg/g,同时第I组注射等量生理盐水,7 d后测定小鼠的生长及免疫指标.结果表明:Ⅱ组在试验期间死亡2只小鼠,其余两组未出现死亡;Ⅰ组、Ⅲ组小鼠的肝脏指数、肾脏指数均高于Ⅱ组,但差异不显著(P>0.05);Ⅰ组与Ⅲ组小鼠脾脏指数极显著高于Ⅱ组(P<0.01);Ⅰ组和Ⅲ组胸腺指数极显著高于Ⅱ组(P<0.01);白细胞计数显示,Ⅲ组白细胞数显著高于Ⅱ组(P<0.05).CP可明显抑制小鼠脾脏和胸腺的发育,损伤免疫器官的组织结构,造成白细胞明显减少或消失,而BS可有效阻断CP的抑制作用.     

遵义市猪弓形虫病的血清学调查

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对采自遵义市种畜场和规模场的329份猪血清样本进行弓形虫病隐性感染抗体检测,结果显示,猪弓形虫隐性感染抗体阳性率高达82.37%(271/329),表明遵义市各县区存在不同程度的猪弓形虫隐性感染情况。其中,种畜场隐性感染抗体阳性率达92.00%(46/50),规模场为80.65%(225/279),种畜场猪弓形虫隐性感染情况比规模场略严重。试验结果为遵义市防控猪弓形虫病提供了理论依据。     

上海宠物犬弓形虫病流行情况调查

犬弓形虫病分布于世界各地，感染范围很大，可呈先天性感染或获得性感染。以犬的弓形虫滋养体进行静脉、腹腔、皮下和口内等不同途径的感染犬，均可引起发病。Lainson（1956）在犬静脉接种后3小时至5天，肠内感染第7天，发现虫血病。Chamkerlain等（1953）经静脉和肠腔途径感染5只1．5—2岁的怀孕犬，在怀孕的第30—52天观察到，5只母犬新生的28只小犬，有23只发生流产或早产，并在母犬的乳汁和子宫内也证明有弓形虫。     

刚地弓形虫PTS核酸疫苗的构建及免疫保护力评价

旨在构建弓形虫磷脂酰苏氨酸合成酶(Toxoplasma gondii phosphatidylthreonine synthase,PTS)基因DNA疫苗,评价其抗弓形虫的免疫保护力。利用RT-PCR技术扩增得到弓形虫PTS基因,构建真核表达质粒pVAXTgPTS,然后转染HEK 293-T细胞,分析pVAX-TgPTS在细胞中的表达情况。利用真核表达质粒pVAX-TgPTS对BABL/c小鼠进行3次免疫,并用空质粒pVAX1作为对照,在每次免疫前和第3次免疫后2周收集小鼠血清,经ELISA方法检测小鼠血清中的IgG水平。第3次免疫后2周每组取3只小鼠,将其剖杀取脾脏,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪测定CD4+和CD8+T细胞百分比。小鼠脾细胞经STAg刺激后,利用ELISA试剂盒检测脾细胞细胞因子的表达情况。第3次免疫后2周,每只小鼠腹腔注射1 000个弓形虫RH株速殖子,观察记录小鼠的存活时间。结果显示,pVAX-TgPTS能够在HEK 293-T细胞中表达;第3次免疫后2周pVAX-TgPTS组血清中IgG含量相比对照组有了显著提高;pVAX-TgPTS组淋巴细胞刺激指数(SI)略微高于对照组;CD4+和CD8+T细胞百分比含量明显高于对照组;pVAX-TgPTS组中脾细胞经STAg刺激后能够明显提高IFN-γ的表达量。攻虫试验结果表明,pVAX-TgPTS组小鼠存活时间比对照组明显增长。本试验成功构建真核表达质粒pVAX-TgPTS,证明pVAX-TgPTS能够诱导小鼠产生一定的体液免疫和细胞免疫反应,并对弓形虫感染产生一定程度的免疫保护力,该研究结果为进一步研发弓形虫核酸疫苗奠定基础。     

弓形虫病诊断方法研究进展

本文介绍了几种弓形虫诊断方法,包括染色试验、间接血凝试验、改良凝集试验、间接免疫荧光抗体染色试验、酶联免疫吸附试验、免疫胶体金技术和干扰素释放反应。在使用活的、有毒力的速殖子情况下,染色试验(DT)仍然是特异性、敏感性和重复性良好的弓形虫病检测手段;间接血凝试验(IHA)特异性不高,但由于其具有简便快速的特点,经常应用于流行病学调查;改良凝集试验(MAT)也可以用于流行病学调查,且因其特异和敏感性高,目前仍然是检测弓形虫病的金标准;亲和力ELISA省时省力,对于鉴定弓形虫急慢性感染有较高的应用价值;免疫胶体金技术(GICT)适用于弓形虫病早期检测和诊断,适合在基层推广应用;干扰素释放反应(IGRA)目前主要应用于人的弓形虫检验,在动物的检测中有待进一步发展。     

阿维菌素对小鼠初级精母细胞致突变性的研究

以小鼠初级精母细胞染色畸变分析方法研究阿维菌素（Avermectin)对小鼠雄性生殖细胞的诱变性。将昆明系雄性小鼠50只随机分为5组，每组10只，第1－3组为阿维菌素高、中和低剂是组，分别为9．60、4．80和1．92mg/kg体重（相当于1／2、1／4和1／10LD50）剂量的阿维菌素与1，2－丙二醇 1次灌胃；第4组为阳性对照组，以60mg/kg体重剂量的环磷酰胺1次腹腔注射；第5组为阴性对照组，仅灌服溶剂，于给药后第12d和13d每组取5只小鼠，每只按2mg/kg体重剂量腹腔注射秋水仙素2h后取材。试验结果表明，无论检药后第12d和13d，环磷酰胺阳性对照组与相应阴性对照组相比，其差异均极显著（P＜0．01），阿维菌素高、中和低3个剂量组与相应阴性对照相比，其差异均不显著（P＞0．05），证明阿维菌素对初级精母细胞不具诱变性。