注射pGRF基因质粒对猪血清生长轴激素变化规律的影响

本研究旨在探讨注射pGRF基因质粒在猪体内的表达效应及作用规律.试验选择8头体质量相近((15 0.43)kg)的健康长白×大白二元杂交阉公猪,随机分成2组.试验组颈部肌肉注射含4.5 mg pGRF基因质粒的注射液2 mL,对照组注射生理盐水2 mL.于处理后第1、4、7、11、16、21、26、31天空腹采血样制备血清,测定血清中生长激素(GH)、类胰岛素生长因子(IGF-I)、生长激素释放因子(GRF)、生长抑素(SS)的含量.结果表明:试验组在注射pGRF基因质粒后第7天,血清GH含量达峰值,比对照组高了113.47%,差异极显著(P<0.01);然后逐渐下降.到第11天时,比对照组高47.09%,差异显著(P<0.05).到第31天时,与对照组基本一致.试验组血清IGF-I和GRF含量虽然提高幅度不大,但其变化与GH含量存在着显著相关性,均在注射pGRF基因质粒后第7天达到峰值,然后降至对照组水平,其相关系数分别为0.589(P<0.05)和0.678(P<0.05).与对照组相比,试验组血清SS含量在11 d前一直呈下降趋势,第11天时降至最低点,但差异不显著.到第16天时2组均有所上升,21 d后缓慢下降,第31天时与对照组趋于一致.血清SS含量与GH、GRF的含量分别存在显著和极显著负相关,相关系数分别为-0.689(P<0.05)和-0.777(P<0.01).由此可见,pGRF基因质粒在体内快速表达并作用于机体,主要通过提高GRF的含量而促使GH的分泌,同时抑制SS的分泌,一定程度阻止其对GRF和GH的抑制作用,从而达到有效的促生长作用.同时本试验发现,虽然采用了颈静脉导管方法,猪血液中生长轴激素测定值变异仍较大,加强护理和增加测试猪的数量是取得更为客观结果的必要条件.     

生长肥育猪骨骼肌注射表达pGRF基因质粒的效应研究

将猪的GRF基因表达质粒注射于猪的骨骼肌后,研究其促生长效应与机理。选用始重6.3kg的44头去势长白×太湖仔猪,分6组,采用2×3因子安排的完全随机区组设计,按6～10kg、10～20kg、20～50kg、50～100kg4个阶段饲养。4个饲养阶段的饲粮低蛋白水平分别是20.70%,17.90%,15.03%,13.00%;高蛋白水平分别是23.70%,20.90%,18.02%,16.00%。pGRF基因质粒注射剂量设0mg、0.5mg、1.0mg3个水平,于试验开始与试验猪体重达60kg时共注射基因质粒2次。测定各阶段日增重,饲料消耗量,耗料增重比以及30、70、100kg时血液中GH、GRF、IGF-I的浓度。100kg时屠宰进行胴体品质测定。结果表明:饲粮蛋白水平对各阶段及全期试验猪日增重均有显著影响(P<0.05或P<0.01),对50～100kg阶段与全期日采食量和耗料增重比有显著影响(P<0.05或P<0.01)。注射pGRF基因质粒对各阶段及全期日增重均有显著影响(P<0.05),对6～10kg、10～20kg、50～100kg3阶段及全期日采食量有显著影响(P<0.05),对6～10kg阶段、50～100kg阶段及全期耗料增重比有显著影响(P<0.05)。注射pGRF基因质粒对30kg及70kg体重时猪血液中GRF、GH、IGF-I浓度均有显著影响(P<0.05)。提高饲粮蛋白水平与注射pGRF基因质粒均可明显降低超声波测膘厚及屠宰测膘厚、增大眼肌面积(P<0.05)。     

活体电穿孔方法提高外源GRF基因在小鼠肌肉组织中的表达

向小鼠后肢小腿肌注pGRF表达质粒并加以电穿孔条件,注射剂量分别为5,10,50μg,于注射前及注射后10,20,30d测体质量,并采血分离血清测血清GRF水平。结果显示,5μgpGRF质粒电穿孔组注射后10dGRF分别比对照组、5μgpGRF质粒组升高44.73%(P0.05),12.86%(P0.05);血清中GRF水平升高。30d累积增重,5μgpGRF质粒电穿孔组分别比对照组、5μgpGRF质粒组高11.46%,6.75%(P0.05);10μgpGRF质粒组分别比对照组和10μgpGRF质粒电穿孔组高19.52%(P0.05),19.42%(P0.05)。50μgpGRF质粒组45d累积增重分别比对照组、pGRF质粒电穿孔组高14.00%,12.00%(P0.05)。结果表明,电穿孔处理可提高GRF基因在小鼠肌肉中的表达。     

给猪注射pGRF基因质粒安全性的研究

将56头35日龄断奶DLY仔猪,随机分为4个处理,每个处理2个重复,每个重复7头猪。4个处理分别为对照组、3 mg组(第1天注射3 mg pGRF)、6 mg组(第1、45天分别注射3 mg pGRF)、9 mg组(第1天注射3 mgGRF、第45天注射6 mg pGRF)。到150 d时结束饲养试验,每个处理选择8头猪进行放血屠宰。屠宰前采试猪的全血10 mL制备血浆,分别测定血浆GH、SS和GRF的含量;屠宰后取心、肝、脾、肺和肾各一块用于制作组织切片;另取心、肝、脾、肺、肾、注射质粒部位肌肉和非注射部位肌肉各一块用于检测质粒的残留。结果表明:屠宰前各处理血浆激素的浓度没有显著差异(P>0.05),注射3 mg和6 mg使猪肝脏的器官系数显著下降(P<0.05),对其他器官和功能没有产生不良影响;注射9 mg使肝脏和肾脏产生广泛的颗粒变性。质粒的残留仅在9 mg组注射部位肌肉中能检测到。综合各项试验结果6 mg以下注射剂量的pGRF基因质粒在养猪生产上的使用是安全的。     

注射pGRF基因质粒对由脂多糖或三联疫苗诱导的免疫应激仔猪生长和免疫指标的影响

为研究猪生长激素释放因子(pGRF)基因质粒对由脂多糖或三联苗诱导的免疫应激仔猪生长性能和免疫指标的影响,选用36头(28±2)d断奶的杜长大(Duroc×Landrace×Yorkshire,DLY)三元杂交仔猪,按体重相近、阎公猪和母猪各1/2的原则,分为对照组(不注射pGRF基因质粒、大肠杆菌LPS或三联苗)、注射pGRF组、注射脂多糖(LPS)组、注射pGRF+LPS组、注射三联疫苗组(猪瘟兔化弱毒,猪丹毒杆菌G4T10弱毒,猪源多杀性巴氏杆菌E0630弱毒)和注射pGRF+三联疫苗6个处理,每个处理6个重复,每个重复1头猪.试验开始时,pGRF组、pGRF+LPS组、pGRF+三联疫苗组的仔猪大腿肌肉分别注射1.0 mg pGRF基因质粒;试验的第11天给LPS组、pGRF+LPS组仔猪注射100 ug/kg LPS生理盐水溶液,三联疫苗组以及pGRF+三联疫苗组注射2头份三联苗生理盐水溶液,对照组和pGRF组注射生理盐水;第18天时按照第11天的操作重复进行.结果表明,在2次注射LPS或三联苗后,即10～17 d和17～24 d阶段,pGRF+LPS组仔猪的ADG显著(10～17 d,P<0.05)或极显著(17～24 d,P<0.01)高于LPS组,F/G均显著低于LPS组(P<0.05);pGRF+疫苗组仔猪ADG均显著高于疫苗组(P<0.05),F/G显著低于疫苗组(P<0.05).在第11天和第18天,pGRF+LPS组仔猪的血清细胞因子(IL-1、IL-6)水平均极显著低于LPS组(P<0.01),类胰岛素生长因子(IGF-I)和IgG浓度均极显著高于LPS组(P<0.01);pGRF+疫苗组仔猪的血清IL-1和IL-6浓度显著低于疫苗组(P<0.05),lgG浓度极显著(11 d,P<0.01)或显著(18 d,P<0.05)高于疫苗组,IGF-I浓度显著(11 d,P<0.05)或极显著(18 d,P<0.01)高于疫苗组.证明pGRF基因质粒能缓解由LPS或三联疫苗免疫应激引起的仔猪生长抑制;能够抑制由脂多糖或三联苗诱导的血清IL-1和IL-6浓度的上升和血清IGF-I浓度的降低,同时能提高免疫应激仔猪的血清IgG浓度.     

生长抑素基因工程苗对绵羊外周血液某些代谢物浓度和激素水平的影响

选择4～5月龄体重相近的杂种雄性去势绵羊16只,随机分成试验组和对照组,对照组平均体重为21.25kg,试验组平均体重为21.54kg。试验组绵羊一次性皮内多点注射生长抑素基因苗(SS苗)1mL,对照组绵羊皮内多点注射生理盐水1mL。试验共持续63d。试验结束时对照组平均体重27.79kg,试验组平均体重29.71kg。注射SS苗和生理盐水当天(0d)、28d、51d、63d,早晨放牧前颈静脉采血制备血浆,分析代谢物及激素含量。结果显示,SS苗免疫对动物葡萄糖和非酯化脂肪酸(NEFA)和尿素氮浓度无明显影响;SS苗免疫后28d时,IGF-I、GH浓度分别比对照高10.81%和5.23%,在51d时高57.36%(P<0.01)和35.73%(P<0.05)。     

肌肉注射高剂量pGRF基因质粒对猪生产性能及血液激素水平影响的研究

为探讨高剂量注射pGRF基因质粒对动物生产性能及血液激素水平的影响,本试验选取平均体重为(6．78± 0．47)kg的断奶仔猪24头,随机分为3个处理,每个处理4个重复。在试验开始时按不同处理分别注射0、2．2 mg和 4．4mg的pGRF基因质粒。结果表明:注射2．2 mg和4．4 mg的pGRF基因质粒对动物的生产性能具有一定的改善作用(P<0．05或P>0．05),注射高剂量(4．4 mg)pGRF基因质粒相对于2．2 mg剂量并不能进一步改善动物的生产性能。高剂量(4．4 mg)pGRF基因质粒可相对延长其在动物体内的作用时间,可有效提高动物生长后期血浆GRF浓度。高剂量(4．4 mg)的pGRF基因质粒具有促进内源生长抑素(SS)分泌的作用,因而不利于其生物学效应的发挥。     

pGRF基因质粒对免疫应激断奶仔猪生长抑制的缓解作用

旨在研究pGRF基因质粒对免疫应激断奶仔猪生长的影响,探讨pGRF基因质粒缓解免疫应激引起的生长抑制作用及其可能的机理。选取18头日龄为（35&#177;2）d、体质量为（7.86&#177;0.59）kg未去势的杜洛克&#215;长白&#215;大白（DLY）三元杂交断奶仔猪,采用单向分类试验设计,按体质量相近、性别一致的原则配对,分为3个处理,即pGRF（pGRF基因质粒）组、pGRF＋LPS（脂多糖）组和LPS组,每个处理6个重复,每个重复1头猪。结果表明：pGRF基因质粒可以缓解因注射LPS导致的日增质量的降低（P〈0.05）,饲料转化率有所改善（P〉0.05）;能够抑制由LPS诱导的细胞因子（IL-1I、L-6）浓度的上升（P〈0.05或P〈0.01）和血清IGF-I浓度的降低（P〈0.05或P〈0.01）,同时显著提高血清IgG的浓度（P〈0.05）。结论：pGRF基因质粒缓解了断奶仔猪因注射脂多糖引起的生长抑制,降低了血清IL-1和IL-6的水平,提高了血清IgG的浓度,提高了仔猪的抗病力,从而缓解了断奶仔猪的免疫应激;pGRF基因质粒缓解免疫应激的作用与其促进IGF-I的分泌密切相关。     

仔猪骨骼肌注射pGRF基因质粒的促生长及代谢调控效应研究

给体重约 5 0kg的长白×太湖仔猪以 0 2 5、0 5、1 0、2 0mg剂量半腱肌部位注射 pGRF基因的表达质粒 ,5～ 10kg阶段终体重分别比 0mg组增加 4%、17%、2 0 %和 16 % ,日增重增加 8%、37%、43%和 36 % ,采食量提高 17%、2 7%、2 3 %和 11% ;耗料增重比 ,0 5mg组、1 0mg组及 2 0mg组分别比 0mg组降低 8%、14%和 18%。1 0mgpGRF基因质粒使血液中生长激素释放因子 (GRF)比对照组升高 1 6倍 (P <0 0 5 )、生长激素 (GH)升高2 5倍 (P <0 0 1)、类胰岛素生长因子 (IGF Ⅰ )升高 2 3倍 (P <0 0 1) ,血液中尿素浓度降低 2 0 % (P <0 0 5 ) ,血液中甘油三酯浓度 (TG)明显下降 (P <0 0 5 )。试验研究还证明生长抑素 (SS)分泌的增加是限制 pGRF基因质粒高用量时正效应发挥的重要因素 ,1mg为 5～ 10kg阶段仔猪注射 pGRF基因质粒的适宜剂量。     

沙棘提取物对断奶仔猪部分内分泌免疫指标的影响

试验选用28±2日龄长×大断奶仔猪24头,随机分成试验组和对照组,每组3个重复,每重复4头猪(公母各半),试验组饲粮添加0.1%沙棘提取物.结果表明:前3周IGF-I水平试验组均显著高于对照组(P<0.05);前两周SS水平试验组显著高于对照组(P<0.05);后两周Cor水平试验组显著低于对照组(P<0.05);脾脏指数和胸腺指数显著高于对照组(P<0.05);CD4 比例试验组显著高于时照组(P<0.05),CD8 比例试验组显著低于对照组(P<0.05);CD4 /CD8 值试验组极显著高于对照组(P<0.01).前两周试验组IL-2水平显著高于对照组(P<0.05);第1、3、4周试验组IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05).