猪卵巢卵母细胞的体外成熟和体外受精

将从屠宰母猪卵巢采得的卵母细胞-卵丘细胞复合体(Oocyte-cumulus Cell Complex.OCC)在含PMSG的M199培养40～44小时,卵丘细胞大部分扩散(86.4％)。48.1％(142/295)的卵母细胞排出第一极体(PBI)。将体外成熟的卵母细胞与体外获能精子授精后30～70小时,80.5％(103/128)的卵母细胞受精并可在体外发育到2～8细胞甚至桑椹胚。本文还对裸卵母细胞的体外成熟和体外受精进行了研究,对体外受精卵的早期发育作了观察。实验结果表明:PMSG对诱导卵丘细胞扩散及卵母细胞的全面成熟有重要作用,在OCC中的卵母细胞成熟率高于裸卵母细胞体外授精后8～10小时将受精卵放入改良KRB液培养可使卵裂比例明显提高。     

猪精子及卵子质量对猪体外受精胚胎发育的影响

应用体外受精(in vitro fertilization, IVF)等生物技术可以缩短种猪培育时间,地方猪精液的冷冻保存可以解决保存和运输问题。通过对不同个体冷冻前后的精子质量、获能方式、卵子质量及多精受精率对IVF的影响进行了研究。结果显示:当精子活率从83.26%降至74.20%时,IVF的卵裂率、桑椹胚率显著下降(P0.05)。不同的获能方式对IVF胚胎的卵裂率无显著影响(P0.05)。3层(及以上)卵丘细胞的卵子IVF的卵裂率、桑椹率显著高于3层以下组(P0.05)。冷冻精子的IVF中,2-细胞、4-细胞和囊胚的发育能力显著低于新鲜精子(P0.05),受精后6～12 h的多精受精率也显著高于新鲜精子组(P0.05)。猪体外受精胚胎的发育能力受精子和卵母细胞的影响。无论使用新鲜精液还是冷冻精液的IVF胚胎,在桑椹胚期后的发育能力都会受到阻碍,多精受精可能是原因之一,但具体原因还需要更多的研究。     

猪卵子体外受精方法研究

本试验分析研究了：（1）猪卵子体外成熟所需要的培养时间；（2）促性腺激素和猪卵泡液对猪卵子体外成熟的作用；（3）不同体外受精次数对猪卵子体受精率的影响；（4）不同精子获能辅助剂对猪精子体外获能的作用；（5）不同种类猪精液的体外受精能力。研究结果表明，猪卵子体外成熟所需培养时间是32－36小时，在体外成熟培养液中加入0.25IU/ml PMSG（或FSH）和10％猪卵泡液可以促进猪卵子体外成熟，在精子体外获能培养液中加入0.05mg/ml肝素，在体外受精培养液中加入2mg/ml咖啡因可以促进猪精子体外获能并可提高体外受精率，体外成熟后的猪卵子进行2次受精可以获得较高的体外受精率，本试验用新鲜射出精子，冷冻射出精子，新附睾精子，冷冻附睾精子对体外成熟猪卵子进行体外受精，受精后卵裂率（2－4细胞期）分别是24.26％、23.40%,22.65%和24.24%。     

牛卵用精子注入法受精

将体外获能处理的牛精子显微注入体外成熟的牛卵质中,以检验这样受精的卵子能否经历正常的原核形成和卵裂发育。从未经激素处理的卵巢上吸取直径为2—5mm 卵泡中的卵子,在改良的 TCM—199液中培养24～25小时,199液中含有50μg/ml 的丙酮酸钠、2.6mg/ml 碳酸氢钠、5.5mg/ml 葡萄糖和50μg/ml 的硫酸庆大霉素。培养液使用时添加20％(v/V)经热处理灭活的20日龄小牛血清,100μg/ml 的 LH 和1μg/ml 的17—β雌二醇。培养结束后的卵子用透明质     

猪精液处理对精子获能时间的影响

青年母猪的排卵时间,用口服 altreno-gest(17-allye-hydroxyestra-4,9,11-trien-3-one),接着注射促性腺激素的方法来控制。在注射绒毛膜促性腺激素之后的42—44小时,给母猪剖腹。精液按下述方法之一处理后用手术法把精子输入已暴露出的输卵管内。冷冻精液融解在贝兹维尔解冻液内(F—BTS)或精清内(F—SP);未冷冻精液直接稀释在贝兹维尔解冻液内(U—BTS)或精清内(U—SP)。在输精后5和24小时收集卵子,并确定其发育程度。在5小时,F-BTS 和 U—BTS 精子使卵受精的比率(分别为45%和69%)显著高于 F-SP 和 U—SP精子(分别为5%和34%)。在两次集卵时均发现,用 F—BTS 和 U—BTS 精子受精的卵子比用 F-SP 和 U-SP 精子受精的卵发育程度更高。在输卵管输精后5小时,未冷冻精子(U-BTS 或 U-SP)的受精卵子数超过 F—BTS或 F-SP精子(P<0.005);在24小时,各种处理方法的受精卵百分率相似。结果表明,精液处理将公猪精子的获能时间减少到与精子通过子宫长度的时间相似的程度。经冷冻—融解精子的获能时间同未冷冻精子相似。     

延迟交配对山羊受精的影响

本实验应用超数排卵,用乙烯雌酚(DES)延长发情期,并于发情后不同时间交配,光镜和电镜等方法研究了拖延交配对黑龙江地方山羊受精的影响。实验结果:(1)于排卵前6小时开始间隔12小时注射3(1+2)mg或5(2+2+1)mgDES可分别使山羊发情持续时间延长14.4和24.8小时;(2)注射乙烯雌酚对山羊排卵时间、获卵率、卵子形态及受精卵的发育都没有明显影响;(3)发情30和36小时交配山羊的受精率和胚胎的发育进程与发情12小时交配山羊受精率和发育进程没有明显差异;(4)发情42小时交配山羊受精率明显下降,3只山羊中只有1只产出2枚受精卵;发情48小时交配山羊无一产出受精卵;(5)电镜和光镜下检查受精时间后48小时未卵裂卵子未见有受精迹象,也未见有精子附着在透明带上。实验结果(1)和(2)说明:应用DES可达到延长动物发情持续时间的目的;可考虑用DES这种人工合成品取代价格贵的雌二醇—17β来进行动物发悄同步和改善超排效果等方面的研究。实验结果3说明:山羊精子可在交配后6小时左右运行到输卵管受精部位并完成获能;山羊精子和绵羊精子一样也不是在输卵管峡部贮存期间获能的;于发情后期输精的精子无需在输卵管峡部贮存便可上行获能,表明于发情末期对山羊进行配种或输精是可行的,便于人们在某些情况下小范围地调整输精时间。实验结     

牛卵泡卵体外成熟及其受精能力的研究

本试验主要研究了牛卵泡卵体外成熟、体外受精及其受精过程的发生。从屠宰场收集800枚牛卵泡卵进行体外成熟培养,并用体外获能的精子体外受精。在用m-TCM199培养21、22、24、26、28h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为33.89％、74.16％、77.78％、86.67％、85.71％;25h后,如果继续培养,成熟的卵母细胞比例不再显著增加。卵母细胞的自身形态显著地影响其成熟效果,A、B、C级卵培养24h后分别有94.60％、55.43％、31.25％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵在体外滞留8h后,其成熟率(47.11％)明显地低于45min(77.92％)或4h(74.60％)。肝素和钙离子载体A 23187都能诱发牛精子获能,二者在受精效报上差异不显著(P>0.05),并且都有多精入卵现象发生。授精后6h精子进入卵内,精子入卵后2～3h头部膨大,6h后出现早期原核,最早发生卵裂是在授精后30h。     

成熟培养基中添加卵泡液对牛体外受精卵发育的影响

从牛屠体卵巢采得卵母细胞后，置于ＣＯ２培养箱中作２４小时成熟培养。在成熟培养液中分别添加０％、１０％、２０％、３０％牛新鲜卵泡液９ＢＦＦ）或灭活卵泡液（ｈＢＦＦ）。分层Ｐｅｒｃｏｌｌ液将解冻精子离心洗涤后，悬浮于含有１０μｇ／ｍｌ肝素的修正Ｔｙｒｏｄｅ液滴中，将培养成熟的卵子移入后作授精培养。２０小时后，固定、染色一部分卵子，镜检其受精情况，其余卵子移入发生培养基与颗粒膜细胞作混合培养。试验结果表     

半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟、体外受精及GSH水平的影响

体外受精技术也称胚胎生产技术（invitro production,IVP）,包括卵母细胞的体外成熟、精子的获能、卵子的体外受精和受精卵的体外培养等几个连续的过程。半胱氨酸是GSH的前体物质,在牛体外胚胎生产过程中疏基复合物能增加细胞内GSH的合成,在受精和胚胎的开始阶段保持高浓度GSH可以增加发育率。试验的目的是评价半胱氨酸对猪卵母细胞的成熟率、受精率及成熟培养时期卵母细胞内GSH水平的影响,现报道如下。     

精子成熟和体外受精

无论在体内或体外,精子和卵子的成熟对于受精的成功都是必需的。精子的成熟不仅包括在雄性动物体内所发生的过程,亦包括在雌性动物所发生的获能过程。牛精子是在输卵管中获能。在体内,获能活性存在于发情时的输卵管液中,而不存在于黄化输卵管液中。实验证明,发情输卵管液的获能活性是因其中含有氨基多糖(Glycosaminoglycan):肝素或硫酸肝素。在体外,肝素可使牛精子获能,使鲜精或冻精的受精率超过70％。用肝素获能的精子作体外受精,已能使胚胎发育,并已出生犊牛。肝素使精子获能的机理尚不清楚。肝素可     

不同超数排卵方法所获羔山羊卵母细胞体外成熟率及体外受精率的比较

本研究观察了不同超排处理方法对羔山羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响，并将体外受精胚胎进行了移植，以便探讨利用羔山羊卵母细胞生产体外受精胚胎的技术途径。对２～４月龄羔山羊用ＦＳＨ、ＦＳＨ＋ＬＨ（静脉注射）和ＦＳＨ＋ＬＨ（肌肉注射）三种方法进行超排处理，平均分别回收１６．０、２０．３和１５．０枚卵母细胞。将这些卵母细胞进行２０～２４ｈ的成熟培养后，其成熟率分别为４５．５％，４４．４％和７６．５％。成熟卵母细胞经体外受精，体外发育培养后其２～４细胞胚胎的发生率分别为５．６％ａ、６．７％和３１．７％ｂ（ｂ，ｖｓ，ａ，Ｐ＜０．０５）。将９枚２～４细胞期胚胎移植给６只受体母羊，结果有２只妊娠并产羔２只。     

牛卵形巴贝斯虫的体外培养

本试验研究了长期在液氮或－80℃冷冻保存虫株－牛卵形巴贝斯虫（B.ovata)的体外培养方法，并探讨了培养条件，试验结果表明：液氮内保存2年之久的牛卵形巴贝斯虫809814号虫株，先经过BO－SCID小鼠体内大量增殖后，在完全埋头液和37℃，5％CO2，5％O2，90％N2培养箱内能够快速增殖，连续培养45天，继代9次，B.ovata在BO－RBC－SCID小鼠体内染虫率可达15％以上，体外培养最高染虫率为6．3％，染虫率5％以上红细胞可作诊断用抗原的制备材料或用液氮（或冷冻）继续保存。     

乳突类圆线虫人工培养初试

乳突类圆线虫人工培养初试陈刚（青海畜牧兽医学院，西宁８１０００３）孔繁瑶，蒋金书，韩谦（北京农业大学，北京１０００９４）作者对１．丝状幼虫的消毒和脱皮方法；２．不同培养基和不同附加因子对丝状动虫体外培养的影响；３．最佳培养气相组成及ｐＨ值；４．二步培...     

细胞培养筛选抗球虫剂程序的研究

本文作者在Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ细胞培养模型上研究了评价抗球虫剂的程序，包括投药时间、效果评定指标、药物有效浓度及毒性浓度、细胞培养有效浓度及鸡体中使用浓度之相关性等内容。试验结果表明药物溶剂影响药物效能的发挥。投药于球虫培养全期比其他几种投药时间更能准确地评价各种药物的效果。药物评价的指标，除子孢子的活力及裂殖体形成数量之外，卵囊形成数量更能显示出药物的作用效果。本试验确定的药物筛选程序     

RSS培养基体外培养结肠小袋纤毛虫的效果观察

目的利用实验生态学的方法,研究了结肠小袋纤毛虫在RSS培养基中种群生长情况。方法在不同米粉含量,不同血清含量,不同PH值的RSS培养基中接种相同量的结肠小袋纤毛虫滋养体,以及在同样的RSS培养基中接种不同量的结肠小袋纤毛虫,进行培养观察,计算其种群自然增长率及世代时间。结果米粉含量为20mg组的种群自然增长率最高;血清含量对种群自然,增长率影响不大,但在最高峰时,20％～25％血清组虫体密度最大;培养基在PH值为7．0和7．5条件下,虫体密度均在d4达到高峰,之后下降。结论培养基中适宜的米粉含量为20-30mg／安瓿,血清含量为20％～25％,最适宜的pH值范围为7．0～7．5。     

单胃动物体外消化模拟技术研究进展

本文从畜禽消化道模拟部位、消化酶的来源和分离已消化养分的方法等几方面对单胃动物体外消化模拟技术进行了归类和总结。并通过对各种体外消化模拟方法的特点、预测饲料养分体内消化率和评定饲料营养价值可靠性等方面的比较分析,总结了各种体外消化模拟技术的优缺点及所存在的问题。同时,针对单胃动物体外消化模拟技术今后的发展方向提出了建议。     

结肠小袋纤毛虫体外培养特性的初步观察

目的观察结肠小袋纤毛虫（Balantidium coli）在体外培养条件下的生长情况。方法取粪样分别置于4℃～8℃冰箱，28℃和37℃恒温培养箱中，观察记录虫体数量，统计不同温度条件下滋养体生存时间。28℃恒温条件下，将粪液加入不同稀释液（蒸馏水、生理盐水及洛克氏液）中，观察滋养体的活力及数量；采用同样的观察方法，统计滋养体在双相培养基以及免血水培养基内的生存时间。在28℃和37℃恒温条件下，分别观察滋乔体在RSS培养液（Ringer液＋血清＋米粉）及不加米粉的RSS培养液内的生存时间。结果结肠小袋纤毛虫滋养体在体外的最适生存温度为28℃，在洛克氏夜中生存时间明显长于生理盐水和蒸馏水，在RSS培养基及双相培养基中可在培养24h时达到高峰。在含有诺氟沙星的兔血水培养基中，滋养体的数量可在培养后96h达到高峰，生存时间可达到180h。结论结肠小袋纤毛虫体外培养受很多因素的影响，有待于进一步研究。