仔猪免疫前后外周血T细胞CD28表达的初步研究

为了分析免疫仔猪外周血T淋巴细胞CD28表达特点,采集接种蓝耳病弱毒疫苗和猪瘟弱毒疫苗的仔猪前后3d外周血液,并分离外周血单核细胞,采用实时定量PCR法检测仔猪外周血中T细胞CD28基因的相对表达量。结果显示仔猪在接种蓝耳病、猪瘟疫苗前后,CD28的表达有明显的提高,猪免疫前后CD28表达变化与机体接受抗原刺激有关。接种疫苗后,CD28在细胞内的表达明显增高,但与免疫的疫苗种类没有直接关系。     

为抵御猪瘟病毒接种C株疫苗对猪免疫细胞和细胞因子的影响

经典猪瘟病毒C株弱毒疫苗是目前最安全、最有效的减毒疫苗之一。然而,对C株疫苗接种后宿主的免疫应答却知之甚少。采集接种猪的血样,评价接种C株疫苗后免疫细胞数量、特异性CSFV(经典猪瘟病毒)抗体水平及相关细胞因子水平。结果表明,C株疫苗可诱导Th2细胞产生特异性抗体。疫苗病毒的复制水平很低。C株疫苗的复制与TLRs的表达密切相关,TLRs会启动先天免疫系统的过表达去清除疫苗毒,同时免疫系统表达的ILs诱导B细胞分化产生特异性抗体。     

USP18分子通过Ⅰ型干扰素通路影响猪瘟病毒复制的研究

猪瘟病毒(CSFV)感染无特定病原(SPF)猪后,分离猪外周血单个核细胞进行转录组分析,数据显示病毒感染后泛素特异性蛋白酶18(USP18)基因的转录水平明显上升。为研究USP18分子对CSFV复制的影响及其作用机制,本研究通过构建过表达USP18的细胞系及应用特异性小干扰RNA下调表达USP18的方法,采用荧光定量PCR验证USP18对CSFV增殖的影响,结果显示USP18分子能够促进CSFV的复制;通过检测IFN-β、NF-κB及ISRE的启动子活性及I型干扰素(IFN-I)信号通路的下游分子m RNA的转录水平,采用荧光定量PCR和双荧光酶报答试验分析USP18对IFN-I信号通路的影响,结果显示USP18分子抑制IFN-I信号通路。以上结果表明CSFV通过诱导USP18分子的上调表达,抑制了IFN-I途径,从而逃避天然免疫防御,进而促进自身的复制。本研究为明确CSFV与宿主之间的相互作用及CSFV致病机制提供参考依据和奠定基础。     

禽呼肠孤病毒强毒株和弱毒疫苗株感染鸡肝癌细胞的转录组学分析

本研究旨在研究禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)强毒株S1133和弱毒疫苗株aS1133分别感染鸡肝癌(LMH)细胞后,LMH细胞基因组的转录水平变化。将1 MOI的ARV强毒株S1133和弱毒疫苗株aS1133分别感染LMH细胞,感染后6、12和24h,收集感染细胞和阴性对照细胞,制备总RNA样品,使用Illumina HiSeq~(TM)2000测序仪进行转录组学测序。以感染组之间样品中上下调转录差异≥2且P≤0.001的基因为差异基因,进行生物信息学分析并进行荧光定量PCR验证。分析结果表明,与ARV aS1133感染组相比,S1133感染组共有4 013个差异表达基因,其中6hpi时,58个上调表达差异基因,5个下调基因;12hpi时,1 429个上调基因,354个下调基因;24hpi时,1 680个上调基因,481个下调基因。K-平均值聚类分析结果说明这些差异基因的表达模式主要呈上调表达模式,并且有10种共表达趋势。GO功能注释和分析结果表明差异基因主要具有GTP酶调节活性、信号转导活性、蛋白激酶活性等生物功能;主要参与机体应激、细胞信号转导、细胞凋亡等生物过程。Pathway富集分析结果表明差异表达基因主要参与Toll样受体信号通路、TGF-β信号通路、病原体感染应答等细胞信号通路。随机选择部分差异表达基因进行荧光定量RT-PCR验证,其结果表明与转录组学测序结果基本一致。以上数据比较分析了ARV强毒株和弱毒疫苗株感染后LMH细胞的基因表达的变化差异,探讨了宿主细胞对ARV不同毒力毒株的可能不同应答机制,有利于进一步阐明ARV致病机制。     

猪瘟脾淋苗与细胞苗免疫效果比较分析

为比较猪瘟脾淋苗和传代细胞苗的免疫效果,在陕西省汉中市某规模化养殖水平较高的猪场,选用编号为A的政府采购猪瘟脾淋苗和编号为B的某公司生产的猪瘟细胞苗,开展2种疫苗免疫效果比对试验。结果表明,2种疫苗免疫后都能刺激机体产生免疫应答反应,无论是标准剂量还是加大剂量,细胞苗的免疫效果都优于脾淋苗。此外,母源抗体和个体差异对疫苗免疫效果有一定影响。     

载脂蛋白CⅢ刺激猪主动脉血管内皮细胞差异表达基因的研究

本研究旨在探究载脂蛋白CⅢ (ApoCⅢ)刺激猪主动脉血管内皮细胞前后的差异基因表达谱,从而揭示ApoCⅢ的功能。利用酶解法成功分离猪主动脉血管内皮细胞并进行体外培养,采用高通量测序技术筛选出ApoCⅢ刺激前后的差异表达基因。结果表明,ApoCⅢ刺激猪主动脉血管内皮细胞前后共有647个差异表达基因,包括390个上调表达基因和257个下调表达基因。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测表明,高通量测序数据结果正确可靠。GO及Pathway分析结果显示,差异表达基因的功能涉及免疫应答、细胞凋亡及死亡等。这表明ApoCⅢ可通过炎症反应、细胞黏附、细胞凋亡等分子通路影响猪主动脉血管内皮细胞的生理功能,为进一步解析ApoCⅢ引发动脉粥样硬化发生的分子机制提供了理论基础。     

蓝耳病疫苗对猪瘟弱毒疫苗免疫效果的影响

为了探明猪蓝耳病阳性场猪蓝病TJM-F92株弱毒疫苗是否对猪瘟疫苗免疫效果存在影响,按照不同的免疫模式将试验动物分为7组,在注射疫苗前(第0周)、注射疫苗后(第2,4,6周)采集血样,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组试验猪猪瘟、蓝耳病抗体水平,用流式细胞术检测各组猪的淋巴细胞亚群水平,从体液免疫和细胞免疫两个方面分别验证猪蓝耳病阳性场猪蓝耳病TJM-F92株弱毒疫苗对猪瘟疫苗的免疫效果是否有干扰作用。结果表明:猪蓝耳病阳性猪场蓝耳病弱毒疫苗对猪瘟疫苗体液免疫和细胞免疫应答干扰作用不明显(P0.05),说明在蓝耳病阳性猪场猪蓝耳病TJM-F92株弱毒疫苗可以和猪瘟疫苗同时免疫。     

小反刍兽疫病毒感染对山羊外周血单核细胞源外泌体分泌水平的影响

提取小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)疫苗毒N75-1株感染以及未感染对照山羊外周血单个核细胞(PBMCs)源外泌体,通过纳米颗粒示踪分析技术(NTA)测定提取外泌体粒径和分布范围,并通过Western blot技术和流式细胞术检测外泌体表面标志物CD63和CD81的表达水平;然后将PPRV感染PBMCs源外泌体与正常山羊PBMCs共培养,同时设定正常山羊PBMCs源外泌体共培养组以及PBMCs培养对照组,通过荧光定量PCR法和Western blot技术检测以上各组受体细胞中PPRV特异性受体淋巴信号活化分子(SLAM)表达水平变化。结果显示,PPRV感染及对照山羊PBMCs中外泌体粒径主要分布在100 nm,且感染组外泌体(Exo-PPRV)分泌水平较正常对照组(Exo-Mock)显著升高(P0.05);Exo-PPRV共培养组SLAM mRNA和蛋白质表达水平较Exo-Mock组显著上调(P0.05),Exo-Mock组与PBMCs培养对照组间SLAM mRNA和蛋白质表达水平差异不显著。结果表明,PPRV感染能够诱导山羊PBMCs中外泌体分泌水平升高且该外泌体对未感染PBMCs中PPRV受体SLAM的表达水平具有显著的正调控作用。     

两种转移因子对调控犬淋巴细胞分泌IFN-γ的影响

细胞因子IFN-γ主要由活化的Thl细胞和NK细胞产生,它能促进巨噬细胞、B细胞等MHC-Ⅱ类分子表达上调,有利于机体T细胞识别抗原肽,提高机体对抗原的免疫应答效应,属于增强细胞免疫反应的细胞因子.     

猪瘟病毒感染对猪外周血细胞因子转录的影响

猪瘟是由猪瘟病毒引起的猪的高度致死性、接触性传染病.为了解CSFV毒株对猪体免疫系统的影响,本研究使用中等致病力CSFV毒株人工感染试验猪,定期采集猪外周血,提取总RNA,运用qRT-PCR技术对免疫相关因子的mRNA转录水平进行分析.试验结果表明,在临床症状早期和在临床症状明显期,11种细胞因子的转录水平均有不同程度上升(RQ＞1);在濒死期,除AMCF、IL-1α、IL-1β、IL-6转录升高外,其余细胞因子转录水平下降显著(RQ＜0.1).该试验结果证实,CSFV感染可以导致PBMC细胞分泌的细胞因子mRNA转录水平增高,从而影响机体的细胞免疫应答和体液免疫应答功能,这可能是CSFV对猪免疫功能影响的分子机制之一.     

PRRSV感染对猪外周血来源的树突状细胞免疫表型及Th1/Th2偏转潜能的影响

为了研究PRRSV感染对猪外周血来源的树突状细胞成熟及Thl及Th2型细胞因子分泌水平的影响,进一步探讨PRRSV调控树状细胞Th1和Th2型免疫应答的潜在机制,揭示PRRSV感染对机体免疫机能的影响。我们从猪外周血分离单核细胞,诱导培养为树突状细胞后接种PRRSV共培养,显微镜观察细胞的形态,流式细胞术分析细胞表面的共刺激分子,半定量RT-PCR法检测Thl型细胞因子IL-12和Th2型细胞因子IL-10的mRNA转录水平。结果显示:经鉴定证实获得形态及表型典型的树突状细胞;流式分析结果表明PRRSV接种组树突状细胞表面的SLA-II-DR类分子、CD40分子、CD80分子均明显低于未接种组,差异极显著(P0.01);RT-PCR半定量结果表明PRRSV接种组的IL-12mRNA转录水平低于未接种组,差异显著(P0.05),而IL-10mRNA转录水平高于未接种组,差异显著(P0.05)。结果表明:PRRSV感染影响树突状细胞的成熟,并能通过高效表达Th2型细胞因子IL-10降低Th2型细胞因子Th1而影响Thl/Th2的平衡。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和活疫苗对免疫鸡NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达的影响

为研究鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗和活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ等5种免疫因子mRNA表达的影响,试验用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,并设立空白对照组,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d取外周血,分离淋巴细胞,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法测淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达水平。结果表明:免疫后7～42 d,活疫苗组NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达均呈现上调,且上调时间主要在免疫后7～14 d;免疫复合物疫苗对NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达基本无影响。提示IBD活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞免疫功能影响大于免疫复合物疫苗。     

不同疫苗对猪瘟及猪口蹄疫抗体效价的影响

采用三种不同猪瘟疫苗分别对A、B、C三组猪群在30日龄进行首次免疫,65日龄加强免疫,采用两种不同口蹄疫疫苗分别对A、C组猪在40日龄首次免疫,75日龄加强免疫,与C组相同疫苗对B组40日龄只一次免疫,应用ELISA检测免疫后不同日龄猪瘟、口蹄疫抗体。猪瘟脾淋苗和猪瘟活疫苗（Ⅱ）相对猪瘟细胞苗首免效果好,口蹄疫多肽苗比浓缩苗抗体水平高,且一次免疫能达到较好免疫效果。     

五种猪瘟疫苗免疫效果的试验报告

选用21日龄体重相近的大白哺乳仔猪165头,根据体重、性别和日龄相近的原则,均匀分为五组(即A组、B组、C组、D组和E组)。25日龄首次免疫猪瘟疫苗1头份∕头次,66日龄二次免疫猪瘟疫苗1头份∕头次,每组猪两次免疫的猪瘟疫苗相同。A组免疫接种ZM猪瘟脾淋疫苗,B组免疫接种ZM猪瘟细胞苗,C组免疫接种QL猪瘟脾淋苗,D组免疫接种QL猪瘟细胞苗,E组免疫接种YS猪瘟ST传代细胞苗。对五组仔猪在首次免疫后40天、二次免疫后25天和二次免疫后76天分别检测猪瘟疫苗抗体效价。试验结果表明,E组、C组免疫效果优于其他各组。     

撒坝猪及长撒二元杂交猪SLA-DQB基因与繁殖性状的相关性分析

<正>猪主要组织相容性复合物(MHC),又称为SLA,即猪白细胞抗原。SLA位于7号染色体的短臂上,与J、C两血型系统连锁在一起,其结构与人的MHC极为相似。猪MHC的Ⅱ类基因位于SLA-D区,它控制着机体的免疫应答与调控,在调节机体的抗病能力方面起到非常重要的作用。有研究表明,具Ⅱ类不同     

猪场免疫失败的案例分析（下）

2.细菌及其他传染性疾病 猪肺炎支原体原体，感染猪只后，据资料介绍肺炎支可改变机体巨噬细胞、T细胞、B细胞的功能，抑制肺脏的免疫应答，造成免疫抑制导致机体免疫功能下降，使其对疫苗的免疫产生干扰作用，导致疫苗的免疫失败，从而无法抵御猪瘟野毒和其他外源病原体的侵袭，而容易诱导多种疾病的混合感染。     

PCV2多表位靶向性疫苗仔猪免疫应答及疫苗免疫效力评价

制备猪圆环病毒2型(PCV2)多表位靶向性疫苗探讨其免疫应答类型及对仔猪免疫效力。用参考疫苗和PCV2多表位疫苗免疫21日龄PCV2和PRRSV抗原、抗体双阴性仔猪,流式细胞仪检测外周血T、B细胞含量和Th1/Th2比值,荧光定量RT-PCR检测IL-17、TGF-β及IFN-γ基因转录和ELISA测定IL-2、IL-4和IL-10蛋白表达,以期确定免疫应答类型。通过PCV2抗体效价和仔猪免疫攻毒保护试验评价疫苗免疫效力。结果显示,参考疫苗(A组)和PCV2多表位疫苗(B组)T细胞含量于免疫后7,14 d显著升高;Th1细胞在7～28 d显著升高,而Th2细胞含量无明显变化,使得Th1/Th2比值发生明显偏移,其中B组发生偏移程度较A组轻,表明疫苗免疫发生以Th1为主的T细胞免疫应答。A和B组IL-17和IFN-γ转录水平均显著升高,其中B组在7～14 d达到峰值,显著高于A组,显示B组细胞免疫活化和非特异性反应更强。外周血中IL-2蛋白含量A和B组均有所升高,组间差异不明显;IL-4蛋白含量A组在免疫后35 d明显高于B组,说明A组体液免疫强于B组。TGF-β基因转录水平和IL-10蛋白含量在免疫后无明显变化,显示均未导致免疫抑制的发生。A和B组疫苗均能刺激机体产生抗体,保护仔猪抵御PCV2强毒攻击,但B组疫苗免疫效力高于A组。结果表明,PCV2多表位靶向性疫苗主要刺激Th1介导的细胞免疫应答,激活IL-17和IFN-γ基因转录和IL-2、IL-4蛋白表达,有效保护免疫仔猪抵御PCV2强毒的攻击,具有良好的免疫保护效力。该研究为PCV2新型疫苗的研制和推广应用提供了技术和数据支撑。     

捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶对山羊PBMCs免疫功能的影响

旨在探究捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶(Hc58)对山羊外周血单个核细胞(PBMCs)免疫功能的影响。采集健康山羊血液,分离出PBMCs和单核细胞,分别以质量浓度为0、10、20、40μg·mL-1的重组蛋白Hc58与细胞体外共培养,采用硝酸还原酶法测定不同浓度Hc58对单核细胞分泌一氧化氮(NO)的影响;采用流式细胞术检测重组蛋白对单核细胞吞噬FITC-dextran能力的影响;采用荧光定量PCR检测PBMCs中IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ和TGF-β的mRNA转录情况;采用迁移小室研究重组蛋白对PBMCs迁移的影响;采用流式细胞术检测不同浓度Hc58对PBMCs凋亡的影响。研究表明重组蛋白Hc58显著促进山羊单核细胞分泌NO;并且增强了山羊单核细胞的吞噬能力;Hc58显著上调IL-2、IL-4、IL-17、IFN-γ的表达量;Hc58显著提高山羊PBMCs凋亡比例,也使PBMCs迁移率增加。捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶能通过多种途径影响宿主PBMCs发挥免疫作用。     

羊口疮疫苗对兔体液免疫和细胞免疫的影响

为深入研究羊口疮疫苗诱导机体产生免疫效应的分子机理,用羊口疮疫苗免疫兔,并对其血清中的特异性抗体水平和外周血免疫相关细胞因子的表达水平进行研究。将500 m L灭活的羊口疮病毒感染细胞毒液和经超声波破碎的灭活羊口疮病毒感染细胞毒液分别浓缩至100 m L,按照佐剂说明书比例,分别与弗氏佐剂、201VG、1313VG、GEL01、11R VG混匀。另外,取灭活的羊口疮痂皮毒液10 m L与201 VG混匀,制备成疫苗。用所制备的不同佐剂疫苗各免疫2只兔子。在免疫后不同时间采集外周血,应用琼脂免疫扩散方法检测血清中特异性抗体效价,同时应用实时荧光定量PCR方法检测外周血中细胞因子表达水平。结果显示:在兔子接种羊口疮疫苗后期,血清中抗体效价除了"1313VG+未破碎病毒"组为1:8之外,其他组别的抗体效价均达到1:16或1:32;各组别外周血中Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α)的表达量与对照组相比总体上升,而Th2型细胞因子(IL-4、IL-6)的表达量总体呈下降趋势。结果表明,羊口疮疫苗可以同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答,但对该两种免疫应答的诱导水平不同。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染抑制猪瘟疫苗的免疫应答

对20日龄SPF猪和20日龄猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)血清阳性猪，人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北京分离株(BJ-4)后48小时接种猪瘟疫苗，利用ELISA方法检测仔猪针对PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫，利用MTS法检铡仔猪外周血单核细胞对有丝分裂原ConA的刺激反应。结果表明，不论是SPF仔猪还是带有PRRSV抗体的仔猪，在鼻内接种PRRSV后48小时接种猪瘟疫苗，其对猪瘟疫苗的抗体反应显著低于对照组，对有丝分裂原ConA的刺激反应也下降。由此说明，PRRSV感染使仔猪对猪瘟疫苗的免疫应答受到抑制。