少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物在捕食线虫过程中的作用研究

为了解捕食性真菌——少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物的性质及在捕食线虫过程中的作用,作者首先用氨基酸诱导产生大量捕食器(菌环和菌网)菌丝,然后分别应用5种不同化学性质的溶液、2种酶和7种蛋白酶抑制剂处理捕食器表面聚合物,观察对捕食和致死线虫作用的影响,同时使用上述物质或溶液处理菌丝以确定对菌丝生长的影响。结果表明:5 mol.L-1LiCl溶液和链霉蛋白酶E可明显降低真菌的捕获线虫的能力;0.1 mol.L-1NaOH、SDS-巯基乙醇-尿素PBS溶液、1.5%(w/v)SDS除可抑制捕获虫体外,同时还抑制了真菌菌丝的生长;除菲啰啉外,其余6种酶抑制剂对真菌的黏附捕获作用无明显影响;但其中丝氨酸蛋白酶类抑制剂还可抑制真菌对线虫的致死作用;另外用酶抑制剂处理线虫后,对真菌的黏附捕获作用也无明显影响。上述结果表明少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物在黏附捕获线虫过程中起关键作用,其为蛋白质或含蛋白质类物质;并间接证实黏附捕获阶段不需要蛋白酶参与,但其在致死线虫阶段会发挥重要作用。这为阐明捕食性真菌作用机理提供了非常有价值的资料。     

捕食线虫性真菌的分离培养及分布规律

对自然界中的捕食线虫性真菌进行了分离和种属区分，并对分布规律进行了研究。从土壤、粪便等材料中获得了2类活性较强的捕食线虫性菌株：即套捕型(hooping)捕食线虫性真菌和粘捕型(sticking)捕食线虫性真菌。主要的代表种类有3种。这些捕食线虫性真菌在捕食性结构分生孢子形态及某些生物学特性上有一定差异。套捕型捕食线虫性真菌代表种为少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospara)和梨形指环菌(Dactylaria pyriformis)，它们以菌环、菌网作为捕食性结构(器官)，以套捕方式杀灭线虫幼虫。梨形指环菌可产生多量厚垣孢子(chlamyalospore)。粘捕型捕食线虫性真菌代表种为纺锤隔指孢菌(Dactylella ellipsospora)。可形成菌结捕食线虫性结构，以粘捕的方式杀灭线虫幼虫。结果表明：捕食线虫性真菌在土壤和家畜粪便中的分离率是40．41％；此类菌适合于生存在阴暗、潮湿、富含腐植质的环境中。在温暖季节时，采用0．4g／L玉米粉琼脂培养基(CMA)易于对其进行分离培养。     

少孢节丛孢菌捕食器表面聚合物的诱导与提取方法研究

为研究捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)捕食器表面聚合物的生化性质与作用,建立一种高效的表面聚合物诱导与提取方法尤为关键。试验首先用大豆蛋白胨液体培养基在氨基酸诱导作用下,产生大量含捕食器菌丝,然后分别用了5种不同化学性质溶液提取表面聚合物,经透析和浓缩后,测定了其中蛋白质的含量及其对线虫幼虫的毒性作用,同时还进行了提取液对真菌菌丝生长及其捕食作用的研究。通过综合分析得出,用5 mol/L LiCl溶液提取表面聚合物最为有效,其提取的表面聚合物溶液对线虫没有明显的杀线虫活性,但与捕食性真菌黏附捕获线虫过程密切相关;并通过比较源自含捕食器菌丝和普通营养菌丝的表面聚合物物质之间的差别,找到了参与黏附捕获线虫过程的物质,这为今后深入开展对捕食线虫性真菌表面聚合物的研究,进而阐明其作用机理提供了有价值的资料。     

捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans冻干制剂临床模式

本试验选用耐高温高压的菌种袋作为玉米粒培养基的培养容器,对Duddingtonia flagrans厚壁孢子进行批量培养,然后经孢子洗脱液将孢子洗脱后,将其制备成冻干制剂,并在内蒙古地区的呼和浩特市和林格尔、包头市萨拉齐、呼伦贝尔西旗等地养殖场共165头绵羊中进行了临床应用研究。通过设立不同的试验组和对照组,使用常用驱虫药伊维菌素进行驱虫试验,同时配合口服捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans厚壁孢子,在不同时间进行动物直肠采粪,对粪便进行第三期幼虫培养,然后检测比较不同组别粪便中感染性幼虫的数量,评价捕食线虫性真菌临床应用模式效果。结果显示,将伊维菌素与D.flagrans冻干制剂联合应用于绵羊的寄生性线虫病防治,可使粪便中幼虫数量降低100%,效果优于单独用药组。结果表明,捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans冻干生物制剂与驱虫药物联合使用的临床应用模式,可以取得较好的家畜线虫病临床防控效果,值得进一步在生产实践中进行深入研究和推广。     

捕食线虫性真菌菌种保存技术的研究

本试验对捕食线虫性真菌菌种保存技术进行了研究,测定了在不同介质保存条件下,捕食线虫真菌分生孢子和菌丝的存活情况及其不是寄生性线虫的能力.结果表明:在设定的保存条件下,分别经过1周冷冻融化或2周反复冷冻融化,被保存的分生孢子接种于玉米粉琼脂培养基上能生长发育:在加入线虫第3期幼虫后,能生产捕食器,对虫体发挥捕食作用.     

捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌CIMH1株捕食特性研究

本研究首次对国内土壤中分离出的捕食线虫性真菌—少孢节丛孢菌ＣＩＭＨ１株（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓｏｌｉｇｏｓｐｏｒａｓｔｒａｉｎ：ＣＩＭＨ１）捕食马线虫第３期幼虫的活性、效力及杀虫机理进行了试验。结果表明菌株生长环境对其捕食活性有很大影响。在２０℃、有氧条件、玉米粉浓度相对较低（０．４ｇ／Ｌ）、菌丝生长较稀疏的ＣＭＡ培养基中,捕食活性最佳。捕食线虫时,在虫体运动刺激及虫体内部某些物质诱导下,菌株会产生一些特殊捕食性结构,如粘性菌丝（Ｓｔｉｃｋｙｂｒａｎｃｈｅｓ）、粘性菌环（Ｓｔｉｃｋｙｒｉｎｇｓ）和粘性菌网（Ｓｔｉｃｋｙｎｅｔｗｏｒｋｓ）等。通过这些功能性构造,菌株将线虫捕获并杀死消化。少孢节丛孢菌ＣＩＭＨ１株在最佳条件下,对马线虫第３期幼虫的平均捕食效力为７８．１５±３．８％。     

捕食线虫性真菌--少孢节丛孢菌体外杀寄生性线虫幼虫的研究

对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)菌株体外粪便捕杀马寄生性线虫幼虫进行了研究。结果表明：菌株可以在体外粪便中发育并发挥其捕食作用。在实验室条件下，其对寄生性线虫第一、二期幼虫的作用与对第三期幼虫的作用相比较．捕获致死速度快。菌株对马粪便中线虫幼虫的杀虫率高达98．7％；与对照组相比有显著差异。而且加入粪便的分生孢子数量在达到一定阈值后，再加入分生孢子，则杀虫率不再增加。此结论对捕食线虫性真菌今后临床的应用具有实际指导意义。     

高原地区少孢节丛孢菌超微结构观察

采用玉米粉琼脂培养法,从高原地区(海拔2 000~3 000 m)土壤分离得到一株捕食线虫性真菌,根据其菌丝形态、分生孢子和捕食器官形态等结构特征,鉴定其为少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)。为了进一步了解少孢节丛孢菌形态学特征,对少孢节丛孢菌进行了超微结构观察,结果发现该菌有隔膜,主干菌丝上隔的分布较密集,分布距离不等,分生孢子梗不分支。菌环是由瘤状突起延伸形成弧形而形成,多个菌环接连形成菌网,线虫幼虫是被捕食器菌环或菌网捕获致死。     

嗜线虫真菌捕食绵羊粪便中捻转血矛线虫幼虫的效果观察

采集感染捻转血柔线虫等胃肠道线虫绵羊粪便培养、分离三期幼虫，加入嗜线虫真菌纯培养物中，72h后84％的幼虫被真菌丝绕和捕获；将该真菌培养物与感染捻转向矛线虫等胃肠道线虫的绵羊粪便便混合后共同培养10d，粪便培养物中的三期幼虫减少82％。     

捕食线虫性真菌-少孢节丛孢菌理化特性研究

研究了捕食线虫性真菌一少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)的染色特性、分生孢子对外界理化因素的抵抗力以及菌丝对线虫第三期幼虫的吸引作用等。结果表明少孢节丛孢菌用革兰氏、瑞氏、姬姆萨氏液染色都能很好的着色；分生孢子对高温敏感，对抗生素不敏感，高浓度的氢离子或氢氧根离子能杀死分生孢子：但分生孢子耐低温，因此可用低温冷冻法保存捕食线虫性真菌分生孢子，其方法简便易行。首次解决了国内外在捕食线虫性真菌菌种保存中的难题。研究显示菌丝对线虫第三期幼虫无明显吸引力。     

氨基酸对少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)捕食器产生的影响

为了解氨基酸对少孢节丛孢菌产生捕食器的影响,在少孢节丛孢菌的基础,菌丝生长的不同时期将浓度为0.5、0.05、0.005 g.L-1的不同氨基酸溶液均匀加入CMA培养基,观察捕食器的产生情况。结果表明：不同种类氨基酸对少孢节丛孢菌产生捕食器的影响不同,其中以浓度为0.05 g.L-1的L-苯丙氨酸、L-蛋氨酸、DL-缬氨酸的诱导效果较好;DL-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、DL-亮氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸属于中等;L-赖氨酸、L-谷氨酸和L-组氨酸溶液效果较差。新生菌丝对氨基酸刺激比较敏感,易产生捕食器;与线虫诱导产生的捕食器相比,氨基酸诱导产生的捕食器对虫体的捕食能力无明显变化,可见少孢节丛孢菌在没有线虫诱导的情况下,加入一定浓度某些种类的氨基酸同样可以产生捕食器,并能捕食线虫幼虫。这为深入开展对捕食线虫性真菌生化方面的研究提供了有价值的资料。     

捕食性真菌Duddingtonia flagrans原生质体的快速制备与再生

为快速获得大量捕食性真菌Duddingtonia flagrans原生质体并使其再生,本试验研究了酶质量浓度、酶解温度、菌龄、酶解时间对D.flagrans原生质体产生的影响,以确定D.flagrans原生质体最佳快速制备条件。结果表明,在溶壁酶2mL/L、蜗牛酶8g/L、纤维素酶8g/L时,35℃恒温条件下,酶解菌龄为2d的菌丝7h,捕食性真菌D.flagrans产生原生质体数量最多且能够再生。这为下一步转化并标记和克隆捕食性相关基因奠定了重要基础。     

新疆石河子地区捕食线虫性真菌的分离鉴定

以山羊捻转血矛线虫第三期幼虫作为诱饵线虫,利用撒布分离法对新疆石河子地区土壤中的捕食线虫性真菌进行分离,并对所分离的捕食线虫性真菌进行了形态学及分子生物学鉴定.结果成功分离出了9株捕食线虫性真菌,其形态学符合少孢节丛孢菌.将分离株5.8S rDNA和ITS2基因序列与国内外已知少孢节丛孢菌菌株的对比分析,证明少孢节丛孢菌新疆分离株具有区域性特征,其捕食活性高于报道的菌株.分离出适合本地区生态环境的当地菌株对以后家畜线虫病的生物防控尤为必要.     

食线虫真菌防治寄生线虫的研究概况

文章综述了近年来食线虫真菌防治寄生线虫的研究概况，包括食线虫真菌的捕食机制和食线虫真菌防治线虫实践以及今后研究方向。从此文还可以看出，Arthrobotrys oliosopra和Duddingtonia flagrans两株真菌是最有发展潜力的食线虫真菌，且D．flagrans比A.oligosopra的捕食效果更好，研究者已把D．flagrans厚壁孢子制成片剂和团块，饲喂后，能显著减少羊的寄生性线虫的幼虫。     

不同培养基及诱导物对捕食性真菌Duddingtonia flagrans发酵液中蛋白质的产生及杀虫作用的影响

为研究捕食性真菌Duddingtonia flagrans发酵液中蛋白质的产生及杀虫作用,使用不同营养成分组成的液体培养基及诱导物,对Duddingtonia flagrans进行培养和诱导,测定其发酵液中的蛋白质含量、蛋白酶活性、磷酸酶活性和杀虫作用,进而确定Duddingtonia flagrans产生胞外蛋白质和杀虫作用最适的培养基与诱导物。结果显示,不同培养基及诱导物对Duddingtonia flagrans的代谢过程会产生明显影响,导致其分泌的蛋白质种类、浓度以及蛋白酶和磷酸酶的活性显著不同;Duddingtonia flagrans发酵液不仅具有杀线虫活性,而且有杀蝇蛆作用。上述结果为进一步研究捕食线虫性真菌的杀虫机理提供了重要参考依据。     

嗜线虫节丛孢(Arthrobotrys flagrans)用于生物防治动物寄生线虫的研究进展

<正>捕食线虫性真菌Arthrobotrys flagrans首次由Duddington于1948年从腐烂的蔬菜里发现^[1]，并将该菌命名为Trichothecium flagrans。Cooke于1969年重新定义后为该种建立了一个新属(Duddingtonia属)^[2]，称为Duddingtonia flagrans，是该属唯一的种。Scholler等于1999年通过分析捕食线虫性真菌的18S r DNA和内部转录间隔区(ITS)的基因序列，认为捕食线虫性真菌的捕食器官类型在其属的分类上有重要意义。因此将捕食线虫性真菌划分为4个属，即Arthrobotrys、Monacrosporium、Dactylella及Gamsylella属^[3]。     

节丛孢属食线虫真菌对体外奥斯特线虫幼虫的捕食效果

本文在国内首次报道了几株节丛孢菌食线虫真菌（５株寡节丛孢菌和２株葡萄串状节丛孢菌）在体外对山羊奥斯特线虫第３期幼虫的捕食效果。结果表明：７株真菌对奥斯特线虫幼虫的捕获率分别在７５．０％￣９６．４％之间,具有较高的捕杀线虫能力,食线虫真菌对线虫的作用方式主要是通过在线虫周围形成菌网。     

新疆乌鲁木齐地区捕食性真菌圆锥节丛孢菌的分离鉴定

为了给动物线虫病的防治工作提供适应本地生存的候选捕食性真菌菌株，对新疆乌鲁木齐地区采集的土壤进行筛选，采用土壤撒布法，以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为诱饵线虫对土壤中的捕食性真菌进行分离鉴定，成功分离出具有捕食线虫功能的真菌1株。通过形态学观察，该菌捕食器官为黏性菌网，分生孢子无色，呈圆锥形，中央有一分隔，形态结构与节丛孢属相符。分子生物学分析显示，该分离株的ITS2基因序列与圆锥节丛孢菌(Arthrobotrys conoides)的同源性为99%～100%,判定该菌为圆锥节丛孢菌的新疆分离株。在实验室条件下，利用该菌株进行捕食线虫活力测定，结果发现该菌株在CMA培养基中对马圆形线虫三期幼虫的捕食率为97.47%,具有较强的捕食效率，可作为新疆地区动物线虫病生物防治工作的候选菌株。     

捕食线虫性真菌的分离培养技术与形态学

分离培养捕食线虫性真菌的最佳培养基为 0 .4g/ L 玉米粉琼脂培养基 (CMA) ;0 .4g/ L 玉米粉液体培养基可作为保存菌种培养基。在分离培养过程中 ,必须加入活的线虫第 3期幼虫 ,以诱导菌株产生捕食性器官——菌环、菌网 ,并与其他真菌鉴别。捕食线虫性真菌有菌丝和孢子 2种形态 ,其发育时期不同。本试验分离的少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora) ,菌丝发达 ,无色有隔 ,隔距不等 ;分生孢子梗直立不分支 ,分生孢子围绕着分生孢子梗呈轮状排列 ,似梅花瓣状 ,2层以上 ;孢子呈倒卵形 ,丰满无色 ,有横隔 ,游离端大而钝圆 ,梗端小而稍尖。     

少孢节丛孢菌超微结构的观察研究

观察了捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌的超微结构，以探讨捕食线虫性真菌的杀虫机理。结果显示，少孢节丛孢菌属于隔膜类真菌，隔膜中央有孔，菌丝细胞一般呈长形竹节状；菌株的捕食器为黏性菌环和菌网，形成捕食器的菌丝细胞结构不同于一般的营养菌丝，胞质中含有许多电子密集体，呈大小不等的黑色类圆形颗粒状，多数排列在捕食器菌丝细胞的边缘区域，这是捕食线虫性真菌捕食器菌丝细胞的一个重要特征。