灵芝菌丝体对4种抗生素的敏感性研究

[目的]检测灵芝菌丝对4种抗生素卡那霉素、头胞霉素、氨苄青霉素、潮霉素的敏感性。[方法]在PDA培养基中分别添加不同浓度的4种抗生素,观察抗生素对灵芝菌丝生长的影响。[结果]头孢霉素、氨苄青霉素、卡那霉素对灵芝菌丝生长基本没有影响,在某些试验浓度中对菌丝生长还具有微弱的促进作用。潮霉素对灵芝菌丝生长具有较强的抑制作用,20mg/L的潮霉素能完全抑制灵芝菌丝的生长。[结论]为建立农杆菌介导的灵芝遗传转化提供理论依据。     

秀珍菇对4种抗菌素的敏感性研究

测试了卡那霉素、头孢霉素、氨苄青霉素、潮霉素4种抗菌素对秀珍菇菌丝体、菌肉和孢子萌发及萌发菌丝生长的影响.结果表明:头孢霉素、氨苄青霉素、卡那霉素对秀珍菇菌丝体、菌肉组织和孢子的萌发及萌发菌丝的生长没有显著的影响;潮霉素对秀珍菇孢子、菌丝体和菌肉组织的萌发及萌发菌丝的生长具有很大的抑制作用,12.5、20、25 mg/L的潮霉素能完全抑制秀珍菇菌丝体、菌肉和孢子的萌发.     

抗生素对剑麻愈伤组织生长和植株再生的影响

研究卡那霉素、潮霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对剑麻愈伤组织生长、不定芽分化及生根的影响,并确定抑制农杆菌生长的头孢霉素、羧苄青霉素的质量浓度。结果表明:潮霉素明显抑制剑麻愈伤组织生长和不定芽分化,卡那霉素次之,头孢霉素和羧苄青霉素相对较小;4种抗生素均能抑制剑麻生根,其抑制效果依次为头孢霉素>卡那霉素>羧苄青霉素>潮霉素。头孢霉素和羧苄青霉素的浓度大于200 mg/L时,农杆菌生长完全被抑制。在筛选剑麻转化体时,卡那霉素和潮霉素的使用浓度分别以100、50 mg/L为宜,羧苄青霉素和头孢霉素的使用浓度均为200 mg/L。     

抗生素对刺芹侧耳菌丝生长的影响

为给进一步建立并优化根癌农杆菌介导的刺芹侧耳的遗传转化体系提供理论基础,选择刺芹侧耳"国森一号"菌丝体作为试验材料,进行卡那霉素、氨苄青霉素、头孢噻肟钠、潮霉素4种抗生素对刺芹侧耳菌丝生长影响的试验研究。结果表明,浓度为125 mg/L的卡那霉素能轻微抑制刺芹侧耳菌丝生长,抑制率为10.18%;潮霉素可强烈抑制刺芹侧耳菌丝生长,且随着浓度的提高,抑制效果十分显著,当浓度达到50 mg/L时,刺芹侧耳菌丝生长完全被抑制,抑制率为100%;氨苄青霉素、头孢噻肟钠对刺芹侧耳菌丝生长没有抑制效果。     

抗生素对非洲菊试管苗不定芽分化的影响研究

以卡那霉素和潮霉素作为非洲菊抗性植株的选择剂,头孢霉素和羧苄青霉素为抑菌剂,分别采取不同浓度,分析其对非洲菊试管苗不定芽分化的影响.结果表明,25 mg·L-1的卡那霉素或5 mg·L-1的潮霉素可作为非洲菊抗性植株的临界筛选浓度.头孢霉素浓度愈大,213品种不定芽分化频率愈低,当头孢霉素浓度较高(400～500 mg·L-1)时,愈伤组织生长受到抑制;而羧苄青霉素对愈伤组织影响很小,在适宜的浓度下能促进不定芽分化,213品种在羧苄青霉素浓度为200 mg·L-1时,分化频率达到最大值68.8.     

杉木遗传转化中抗生素种类和浓度的筛选

【目的】筛选适用于农杆菌介导的杉木遗传转化的抗生素种类和浓度,为杉木遗传转化体系建立提供理论依据。【方法】以杉木组培苗茎段和嫩芽为材料,探讨了潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对其生长的影响以及对农杆菌GV3101的抑菌效果。【结果】潮霉素浓度为40 mg/L和60 mg/L时,杉木嫩芽和茎段培养42 d存活率分别为8.78%、13.97%和7.05%、5.93%,表现出良好的效果;80 mg/L时,其生长完全被抑制。卡那霉素浓度为100 mg/L时,杉木嫩芽和茎段在80 d时存活率仍高达75.04%和80.37%。300 mg/L的抗生素抑菌剂头孢霉素能有效抑制农杆菌GV3101生长,且该浓度下杉木嫩芽及茎段增殖效果良好。【结论】在以杉木嫩芽和茎段为受体材料的遗传转化体系中,40~60 mg/L和60~80 mg/L的潮霉素可作为杉木遗传转化抗性苗二次筛选的选择压,300 mg/L头孢霉素可作为农杆菌GV3101的抑菌浓度。     

银白杨遗传转化中抗生素浓度优化的研究

该文探讨了卡那霉素、G418、羧苄青霉素和头孢霉素4种抗生素对银白杨不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响,确立了由农杆菌介导的银白杨遗传转化研究中抗生素种类和转化体的筛选浓度.结果表明:在叶片转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为15和10 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素的适宜浓度为200～600 mg/L和200～400 mg/L;在抗性芽生根培养时,卡那霉素和G418浓度分别为20～25 mg/L和15～20 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素浓度为200～800 mg/L和200～600 mg/L.头孢霉素或羧苄青霉素的抑菌效果因农杆菌菌株的不同而存在差异,羧苄青霉素对农杆菌LBA4404抑制效果好,头孢霉素对农杆菌C58抑制效果理想.      

黄梁木遗传转化受体系统对筛选物敏感性研究

【目的】明确农杆菌介导的黄梁木遗传转化体系对筛选物的敏感浓度,为黄梁木遗传转化研究奠定基础。【方法】以黄梁木子叶、胚轴和无菌苗为材料,探讨筛选物卡那霉素、潮霉素、头孢霉素对试验材料生长的影响,以及对农杆菌LBA4404的抑菌效果。【结果】在不定芽分化、生根阶段,卡那霉素的临界浓度分别为20、10 mg/L,潮霉素的临界浓度均为10 mg/L;当头孢霉素的浓度为100 mg/L时,完全抑制农杆菌生长,而且该浓度对黄梁木不定芽分化、生根影响较小。【结论】在黄梁木子叶和胚轴为试验材料的遗传转化体系中,20和10 mg/L的卡那霉素可作为不定芽分化、生根阶段的筛选选择压,10 mg/L的潮霉素可作为两个阶段的筛选选择压;而100～200 mg/L的头孢霉素可作为农杆菌LBA4404的抑菌浓度。     

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500 mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250 mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75 mg/L为宜.     

3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

抗生素对根癌农杆菌的抑菌作用及对新西伯利亚黑杨组培叶片再生的影响

以新西伯利亚黑杨(Populus nigra×Populus pyramidalis)为试材,探讨了不同质量浓度的头孢霉素、羧苄青霉素、头孢曲松钠和头孢唑啉钠对叶片不定芽分化的影响,并利用4种不同质量浓度的抗生素对农杆菌EHA105的抑菌效果进行了分析,确立了由农杆菌介导的新西伯利亚黑杨遗传转化中最佳抑菌抗生素是头孢霉素和羧苄青霉素,抑菌的适宜质量浓度为300～400mg·L-1.此外还研究了不同质量浓度的G418、卡那霉素和新霉素对新西伯利亚黑杨叶片不定芽分化及组培苗生根的影响,确定了各阶段筛选转化体的G418、卡那霉素和新霉素的适宜质量浓度,即叶片转化筛选培养时,G418质量浓度为3～4mg·L-1、卡那霉素质量浓度为30～40mg·L-1、新霉素质量浓度60～80mg·L-1;在抗性芽生根培养时,G418质量浓度为3～4mg·L-1、卡那霉素质量浓度为20～30mg·L-1、新霉素质量浓度60～80mg·L-1.     

抗生素对甘菊愈伤组织诱导和植株再生的影响

以甘菊叶片为外植体,尝试不同浓度羧苄青霉素(Carb)、卡那霉素(Kan)和潮霉素(Hyg)对甘菊愈伤组织诱导和植株再生的影响.结果表明,潮霉素和卡那霉素都对愈伤组织诱导有抑制作用:对不定芽分化而言,以潮霉素和卡那霉素作为抗性筛选标记时,选择压都以5mg·L-1为宜.羧苄青霉素的抑菌效果较好,质量浓度应在300～500mg·L-1范围;潮霉素3mg·L-1、卡那霉素20mg·L-1为合适的转化植株生根培养的抗生素临界浓度.     

杜氏盐藻无菌体系的建立

为建立杜氏盐藻无菌培养体系,试验选用卡那霉素、头孢霉素、氯霉素、链霉素、潮霉素和氨苄青霉素6种抗生素,分别测试盐藻细胞的抗生素耐受性和对盐藻藻液的除菌效果。结果表明,盐藻对氯霉素耐受性低,对头孢霉素和氨苄青霉素的耐受性较高;氯霉素、头孢霉素和氨苄青霉素单独处理对盐藻藻液的抑菌效果明显,卡那霉素、潮霉素和链霉素单独处理的抑菌效果较差;抗生素组合处理对盐藻藻液的除菌效果更强;应用50μg/mL氯霉素、100μg/mL氨苄青霉素和100μg/mL头孢霉素组合,经3次除菌处理和5次继代培养,建立了盐藻无菌培养体系。     

不同抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响

以紫雨桦无菌叶片为试材,研究头孢霉素、头孢曲松钠、羧苄青霉素和特美汀4种不同浓度的抑菌抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响,分析4种抑菌抗生素对农杆菌 EHA105（pCHS）的抑菌效果。结果表明,抗生素是头孢霉素、头孢曲松钠、特美汀比羧苄青霉素抑菌效果好,其中头孢霉素和头孢曲松钠的适宜浓度范围为200～400 mg／L、特美汀为400～800 mg／L。30～40 mg／L的卡那霉素、15～20 mg／L的G418或潮霉素还可用于紫雨桦为受体的遗传转化中筛选转化体。     

葡萄叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

本研究以优良无核葡萄品种莫利莎葡萄试管苗为试材,研究了卡那霉素（Kan）、潮霉素（Hyg）对葡萄继代苗生长和离体叶片再生的影响,以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度;同时研究了不同浓度的头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对葡萄离体叶片再生的影响,以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。试验结果表明葡萄继代苗对Hyg的敏感性强于Kan,葡萄遗传转化更适合使用潮霉素磷酸转移酶基因作为选择标记。Hyg 3.0mg/L即达到继代苗致死浓度,可作为转化后抗性苗的筛选浓度,Hyg 0.8mg/L完全抑制叶片不定芽的分化,可作为叶盘法转化时抗性芽的选择压。葡萄叶盘法基因转化中抑制农杆菌生长的抗生素可选用Cef 300mg/L或Carb 400mg/L,但对不定芽的分化有抑制作用。     

不同抗生素对刺槐遗传转化受体系统的影响

本试验研究了卡那霉素(Kana)、头孢霉素(Cef)、氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Carb)、红霉素(E)对刺槐形成层为外植体的遗传转化受体系统的影响。结果表明:刺槐形成层诱导愈伤时Cef对受体材料伤害最小,抑菌效果最好,浓度为200 mg/L时能完全抑制农杆菌生长;用Kana作为刺槐转基因植株的筛选,刺槐形成层愈伤组织分化时选择剂浓度为100~125 mg/L最佳,生根培养时选择剂浓度为75 mg/L最佳。     

蛋白核小球藻无菌培养体系的建立

[目的]为了建立蛋白核小球藻无菌培养体系。[方法]选取卡那霉素、链霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、潮霉素和头孢霉素6种常用抗生素,比较蛋白核小球藻的除菌和纯化效果。同时,对比蛋白核小球藻对不同浓度的卡那霉素和潮霉素的耐受性以及单独使用卡那霉素和潮霉素的多次除菌效果。[结果]卡那霉素和潮霉素对涂布带菌藻液的抑菌和除菌效果明显,其他4种抗生素的抑菌效果较差;小球藻对不同抗生素的耐受性不同,蛋白核小球藻对潮霉素敏感,50 mg/L就可以明显抑制其的生长,而对卡那霉素的敏感性要低得多,在200 mg/L时其生长受到显著抑制。[结论]考虑到高浓度卡那霉素对蛋白核小球藻生长的抑制作用,最终确定用50 mg/L卡那霉素连续3次除菌处理的方式建立蛋白核小球藻的无菌培养体系;同时,测得纯化培养的蛋白核小球藻藻液在685 nm处具有最大吸收峰,在此波长下小球藻的细胞浓度与吸光值呈线性相关,可用A685来估测蛋白核小球藻浓度。     

二色胡枝子遗传转化中抗生素浓度优化研究

探讨了卡那霉素、G418和头孢霉素3种抗生素对二色胡枝子不同培养阶段外植体生长、分化和生根的影响及对农杆菌的抑菌效果.确立了由农杆菌介导的二色胡枝子遗传转化研究中抗生素转化体的筛选浓度和头孢霉素对菌株的抑菌浓度.结果表明:在子叶节转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为20 mg/L和7.5 mg/L;在抗性芽增殖培养阶段.卡那霉素和G418浓度分别为150 mg/L和15.0 mg/L;在生根阶段,卡那霉素和G418浓度分别为20 mg/L和5.0mg/L.而头孢霉素在各阶段适宜浓度为0～300 ms/L;头孢霉素对农杆菌LBA4404和C58抑制浓度为200～300 mg/L时效果理想.     

抗生素对台湾青枣茎段和愈伤组织生长的影响

探讨了卡那霉素 (Kan)、羧苄青霉素 (Cb)、头孢霉素 (Cef)和氨苄青霉素 (Amp) 4种抗生素对台湾青枣幼嫩茎段和疏松的愈伤组织生长的影响 ,初步确立了对台湾青枣 (ZiziphusmauritianaLam .)进行农杆菌介导的遗传转化研究中的抑菌和转化体的筛选策略 .Kan 75mg·L-1时 ,5 0d后茎段基本停止生长并开始变成白色 (白化 ) ;Kan2 5mg·L-1时 ,胚性愈伤组织生长受到明显的抑制 ,Kan 5 0mg·L-1时 ,其生长基本停止且开始褐变 ,Kan 75mg·L-1以上时胚性愈伤组织完全变褐 .适当浓度的Cb或Cef对芽的伸长生长有一定的促进作用 ,Cb +Cef却对芽的伸长出现轻微的抑制效应 .Amp对茎段生长有抑制作用     

中国野生毛葡萄叶盘法遗传转化中抗生素种类及体积质量分数的筛选

为获得毛葡萄遗传转化体系中合适的抗生素种类和体积质量分数,以毛葡萄单株“花溪-4”为试材,研究了选择抗生素潮霉素(Hygromycin,Hyg)、卡纳霉素(Kanamycin,Kan)和抑菌抗生素羧苄青霉素(Carbenicillin,Carb)及头孢霉素(Cefotaxime,Cef)对其离体叶片再生和再生芽成苗的影响.结果表明:0.1 mg/L的Hyg和10 mg/L的Kan可完全抑制不定芽再生,适合遗传转化中转基因再生芽筛选;再生芽在添加5 mg/L Hyg和40 mg/L Kan培养基中表现黄化致死,不能成苗,可用于转基因苗选择.300 mg/L的Cef或400 mg/L的Carb均可促进花溪-4不定芽再生,同时对根癌农杆菌抑制效果良好,适宜于毛葡萄遗传转化中抑制农杆菌生长.