成年摇晃小鼠海马组织中小清蛋白的表达

为探讨小清蛋白(PV)在成年摇晃小鼠海马中的表达情况,用免疫荧光组织化学法对野生型小鼠(R^+/+)、杂合子摇晃小鼠(R^+/-)、纯合子摇晃小鼠(R^-/-)海马CA1区、CA3区、齿状回中PV的分布和表达进行研究。结果表明,PV在摇晃小鼠海马CA1区、CA3区和齿状回中均有分布,主要表达于CA1区和CA3区的锥体细胞层及齿状回的颗粒细胞层。与野生型相比,杂合子摇晃小鼠CA1区PV阳性细胞数显著降低(P<0.01),而纯合子摇晃小鼠增加;CA3区和齿状回中的PV阳性细胞数均降低,但纯合子摇晃小鼠高于杂合子摇晃小鼠。提示摇晃蛋白(Reelin)影响PV的表达,且PV的表达异常可能与摇晃小鼠的表现型有关。     

急性应激后小鼠空间学习记忆及脑内HIF-1α表达的变化

目的研究急性应激强度下小鼠学习记忆能力的变化以及海马和前脑皮层HIF-1α的表达。方法采用电击足底方式对小鼠急性应激处理,通过Morris水迷宫实验检测小鼠的空间学习记忆能力,采用免疫组织化学方法检测小鼠海马和前脑皮层缺氧诱导因子(HIF-1α)的表达。结果急性应激组小鼠在水迷宫实验中的空间学习记忆能力比正常对照组小鼠明显增强(P<0.05);脑内海马CA1区、CA3区、齿状回和前脑皮层HIF-1α的表达显著增加(P<0.01)。结论急性应激后,HIF-1α在海马和前脑皮层表达增加,可能参与应激引起小鼠学习记忆功能的增强。     

中药复方对抑郁模型小鼠学习记忆能力及脑内SDF-1的影响

目的 :探讨中药复方枳菊解郁汤对抑郁模型小鼠空间学习记忆能力的影响及其机制。方法 :采用多种因素慢性轻度不可预见性应激方式建立抑郁模型小鼠,分别给予小鼠低、中、高剂量枳菊解郁汤处理。采用Morris水迷宫实验,检测小鼠的空间学习记忆能力的变化;通过免疫组织化学方法检测脑内基质细胞衍生因子(SDF-1)的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠的空间学习记忆能力明显下降(P0.01),SDF-1在海马CA1,CA3,DG及前脑皮层的表达明显降低(P0.05);与模型组相比,枳菊解郁汤中剂量组小鼠的空间学习记忆能力明显增高(P0.05),SDF-1在海马CA1,CA3,DG及前脑皮层的表达明显增加(P0.05)。结论 :枳菊解郁汤的抗抑郁作用可能与SDF-1的表达上调有关。     

急性应激对小鼠空间学习记忆功能及脑内NT-3表达的影响

目的 :研究急性应激对小鼠空间学习记忆的影响及其机制。方法 :以足底电击来建立急性应激小鼠模型,采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,以免疫组化方法检测神经营养因子-3(NT-3)在小鼠海马和前脑皮层的表达。结果:水迷宫实验中,急性应激组小鼠与对照组相比,空间学习记忆显著提高(P0.01)。在海马CA1区、CA3区、齿状回及前脑皮层NT-3的表达显著增强(P0.05,P0.01)。结论:急性应激所致小鼠空间学习记忆功能的提高可能与脑内NT-3表达上调相关。     

BDNF在急性应激所致小鼠空间学习记忆功能改变中的作用

目的研究急性应激对小鼠空间学习记忆功能及脑内BDNF表达的影响。方法采用足底电击急性应激动物模型,通过Morris水迷宫实验检测试小鼠空间学习记忆能力;以免疫组织化学方法检测脑源性神经营养因子(BDNF)在海马和前脑皮层的表达。结果与正常对照组小鼠比较,急性应激组小鼠在水迷宫实验中的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01),而在目标象限的停留时间显著延长(P<0.05);急性应激组小鼠海马CA1、CA3区,齿状回和前脑皮层BDNF的表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论急性应激导致小鼠空间学习记忆功能增强,这可能与海马和前脑皮层BDNF表达的上调有关。     

慢性应激后小鼠空间学习记忆功能及脑内BDNF表达的变化

目的 :研究慢性应激后小鼠海马和前脑皮层BDNF表达的变化,探讨小鼠学习记忆功能变化的机制。方法 :建立多因素慢性应激小鼠模型,通过Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力;免疫组织化学方法检测小鼠海马和前脑皮层BDNF表达水平的时序变化。结果:与对照组小鼠比较,慢性应激后即刻和24h组小鼠在水迷宫中的空间学习记忆能力明显减退(P<0.05,P<0.01),海马CA1、CA3、DG和前脑皮层BDNF的表达明显减少(P<0.05,P<0.01);而慢性应激后一周组小鼠的学习记忆能力有部分恢复,海马各区和前脑皮层BDNF的表达亦有所增加,无显著性差异。结论:BDNF在海马和前脑皮层表达的下调,可能与慢性应激后小鼠学习记忆功能的损伤有关。     

KDM2B在小鼠卵母细胞及早期胚胎发育过程中的表达分析

本研究旨在分析KDM2B在小鼠卵母细胞和早期胚胎中的表达规律,为KDM2B在卵母细胞减数分裂及胚胎发育过程中的生物学作用奠定基础。选择20只6～8周龄小鼠为试验动物,收集GV期、MⅡ期卵母细胞、2-细胞、4-细胞、8-细胞、囊胚各阶段胚胎,根据GenBank上已公布的小鼠(Mus musculus)KDM2B序列设计引物,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测KDM2B在胚胎各阶段mRNA的表达水平;通过免疫荧光染色定位KDM2B蛋白在胚胎各阶段的分布。结果显示,GV期卵母细胞KDM2B mRNA的表达量极显著高于MⅡ期(P<0.01);在2-细胞、4-细胞和8-细胞mRNA表达量较低,囊胚期其表达量极显著升高(P<0.01);卵母细胞成熟过程中,KDM2B在GV期主要表达于细胞核中,MⅡ期卵母细胞核中的荧光信号极显著减弱(P<0.01),早期胚胎发育过程中,KDM2B蛋白在2-细胞、4-细胞、8-细胞胚胎中均不表达,囊胚期重新表达于细胞核。综上表明,本研究成功建立KDM2B在小鼠卵母细胞及胚胎细胞中的时空及时序表达模式,关于KDM2B参与调控减数分裂与胚胎发育过程具体的作用机制有待进一步研究。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇暴露对仔猪海马神经细胞神经递质、脂质过氧化及钙稳态的影响北大核心CSCD

本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对体外培养的仔猪海马神经细胞中神经递质、脂质过氧化及钙稳态的影响,探讨DON的神经毒性作用。以不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng/m L)处理仔猪海马神经细胞24 h后,检测细胞中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、乙酰胆碱(ACH)、γ-氨基丁酸(GABA)、去甲肾上腺素(NE)含量,总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量,钙离子(Ca2+)、钙调蛋白(Ca M)含量以及Ca M m RNA相对表达量。结果表明:与对照组相比,1)当DON浓度为1 000 ng/m L时,5-HT、DA、ACH含量显著升高(P<0.05),GABA含量极显著升高(P<0.01),而NE含量显著降低(P<0.05);当DON浓度为2 000 ng/m L时,5-HT、DA、ACH含量极显著升高(P<0.01)。2)当DON浓度为250 ng/m L时,SOD活性和T-AOC极显著降低(P<0.01);当DON浓度为1 000 ng/m L时,GSH-Px活性显著降低(P<0.05),NO含量极显著降低(P<0.01),而MDA含量极显著升高(P<0.01);当DON浓度为2 000 ng/m L时,CAT活性显著降低(P<0.05),GSH-Px活性极显著降低(P<0.01)。3)当DON浓度为125 ng/m L时,Ca M含量极显著升高(P<0.01);当DON浓度为250 ng/m L及以上时,Ca2+含量和Ca M m RNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。综上,DON暴露可改变仔猪海马神经细胞神经递质的分泌及脂质过氧化,并影响钙稳态,对仔猪海马神经细胞具有一定的神经毒性作用。     

小花棘豆中毒对小鼠脑组织α-甘露糖苷酶表达的影响

探讨小花棘豆对小鼠脑组织α-甘露糖苷酶(AMA)表达的影响,进一步揭示小花棘豆的毒性作用机理。将40只小鼠随机分为4组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,3个试验组分别按照每千克体重1、5、10 g的剂量饲喂小花棘豆,攻毒后第63天采集小鼠脑组织,检测小鼠不同脑区AMA分布与表达的变化。结果显示,小花棘豆中毒可导致小鼠脑组织AMA mRNA表达水平的下降,但试验Ⅰ组与对照组差异不显著(P0.05),试验Ⅱ组和试验Ⅲ组小鼠小脑、大脑和丘脑AMA mRNA表达量均显著低于对照组(P0.05),但3个试验组海马和脑干AMA mRNA表达量与对照差异均不显著(P0.05)。AMA在海马与脑干中表达极弱,在其他区域均有表达,表达量与神经细胞和颗粒细胞的数量正相关。结果表明,不同剂量小花棘豆可降低小鼠脑组织AMA mRNA表达量,小脑、大脑和丘脑是其主要作用的靶区。     

睾丸肾上腺素能受体和胆碱能受体的分布及神经递质对睾丸间质细胞增殖的影响

试验旨在研究不同发育时期小鼠睾丸肾上腺素能受体(β1AR、β2AR、β3AR、α1A、α1B和α1D)和胆碱能受体(M1、M2、M3、M4和M5)mRNA的表达,以及神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对发育期小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。RT-PCR结果表明,β1AR和β2AR mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,β3AR、α1A和α1B mRNA在小鼠发育早期的睾丸表达,在成年期睾丸不表达,α1D mRNA在睾丸发育的早期不表达,成年期表达;胆碱能受体M1R、M2R、M3R和M5R mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,而M4R mRNA主要在成年期表达。另外通过NE和Ach处理体外培养的发育期睾丸间质细胞,发现Ach处理组BrdU阳性细胞的数量明显增加(P＜0.01)。结果表明,肾上腺素能受体和胆碱能受体在小鼠睾丸的整个发育时期都表达,Ach可促进发育期小鼠睾丸间质细胞的增殖。     

母体铅暴露对仔鼠海马内Calsyntenin-1表达的影响

探讨母体铅暴露对仔鼠海马内钙结合蛋白-1(Calsyntenin-1,Clstn-1)表达的影响。采用自由饮水模式建立铅暴露动物模型,将40只孕小鼠,随机分为对照组和低、中、高剂量染毒组,分别饮用去离子水和1、5、10g/L的乙酸铅水溶液。仔鼠21日龄,分别测其血液和海马组织中铅的含量,然后取其海马组织,分别通过免疫组化方法和Western blot技术检测各组仔鼠海马组织中Clstn-1的蛋白表达情况。结果显示,21d仔鼠血铅、海马铅水平均明显高于对照组(P0.01);免疫组化染色结果显示,Clstn-1免疫组化阳性反应主要定位于胞浆,在仔鼠海马组织的CA1区域中,每个铅暴露组仔鼠Clstn-1免疫组化阳性反应物的面密度与对照组相比增加显著,但平均灰度值明显降低(P0.01);Western blot结果显示,与对照组相比,铅暴露组仔鼠Clstn-1蛋白的表达明显高于对照组,并随染毒剂量增加,表达量增高,差异具有统计学意义(P0.01)。母体铅暴露可能通过上调仔鼠海马内钙结合蛋白的表达进而造成海马损伤,引起神经毒性。     

激动素对AlCl_3和D-半乳糖联合诱导的AD小鼠模型大脑病理变化和Aβ表达的影响

旨在研究激动素对AD小鼠模型的神经保护作用。首先用AlCl_3和D-半乳糖联合处理制备AD小鼠模型,然后用不同浓度的激动素进行干预处理,再通过HE染色对大脑海马CA3区进行病理学观察,并对大脑皮层和海马部位β淀粉样蛋白(βamyloid protein,Aβ)进行免疫组化染色。结果表明,AlCl_3和D-半乳糖处理过的小鼠其海马CA3区锥体细胞发生明显的病理变化,而激动素的干预减轻了这一病变,且表现出剂量依赖性。同时,AlCl_3和D-半乳糖处理过的小鼠与空白组小鼠相比,大脑皮层和海马区Aβ1-42分布均显著增加,但激动素干预能够使Aβ1-42的表达和分布明显减少,且显示出剂量依赖性的特点。这些结果说明激动素对AD小鼠模型具有一定的正向干预作用,表明激动素可能具有抗AD的潜力。     

小型猪复合麻醉剂对大鼠不同脑区LKB1基因mRNA转录和p-LKB1蛋白表达的影响

旨在研究小型猪复合麻醉剂(XFM)对大鼠不同脑区LKB1基因mRNA转录和p-LKB1蛋白表达的影响。将30只SD大鼠随机分成XFM组(M组)和生理盐水对照组(C组),M组又按照时间点的不同分为4个亚组。各组大鼠到达试验设计时间点后分别采取脑组织并分离各脑区,采用PCR和Western blot技术,分别检测各试验组中大鼠不同脑区LKB1基因mRNA的相对表达量和p-LKB1蛋白表达量。结果显示:在试验的麻醉早期阶段(即M1和M2),各脑区LKB1基因mRNA转录与对照组相比均未出现显著变化(P0.05);大脑皮层、海马及小脑p-LKB1蛋白表达与对照组比较并无显著变化(P0.05),而丘脑与脑干p-LKB1蛋白表达与对照组比较则明显升高,且丘脑差异显著(P0.05),脑干差异极显著(P0.01)。而在麻醉后期阶段(即M3和M4)各脑区LKB1基因mRNA转录表达明显上升,尤以M4突出,差异极显著(P0.01),其中丘脑和脑干变化最为明显;大脑皮层、海马及小脑p-LKB1蛋白表达与对照组比较均无明显变化(P0.05),但丘脑和脑干p-LKB1蛋白表达呈现显著升高(P0.05)。研究表明,XFM麻醉作用可能影响大鼠中枢神经系统中LKB1基因mRNA的转录和p-LKB1蛋白的表达。     

钩吻素子和钩吻素己对轻度认知功能障碍模型小鼠的影响

旨在探讨钩吻素子和钩吻素己对东莨菪碱诱导的轻度认知功能障碍小鼠模型的神经保护作用。将C57BL/6小鼠随机分为4组,即对照组、钩吻素子剂量组、钩吻素己剂量组、东莨菪碱模型组,每组6只。对照组和模型组给予生理盐水,其余组连续腹腔给药12 d,第8天开始除对照组外均注射东莨菪碱溶液,通过水迷宫试验观察小鼠在钩吻生物碱干预作用下的动物行为学指标变化。再通过HE染色观察钩吻素己对海马组织CA1、CA3、DG和PC区的病理学变化。水迷宫定位航行试验结果表明,模型组与对照组相比逃避潜伏期延长,钩吻素子组与模型组相比逃避潜伏期缩短,且都具有显著性差异;空间探索结果表明,模型组小鼠平台穿越次数和所在象限运动路程显著少于对照组,而钩吻素子组平台所在象限运动路程显著少于模型组。海马HE染色结果显示,钩吻素己组与对照组相比,海马CA1和CA3区细胞固化萎缩,整个细胞深染;CA3区和PC区的活细胞数量变少,但细胞坏死的数量增多。试验结果说明钩吻素子能改善东莨菪碱诱导的轻度认知功能障碍,改善小鼠学习记忆能力,而钩吻素己对东莨菪碱造成的认知功能障碍不具有保护作用,并对海马组织造成损伤。     

抗传染性支气管炎病毒S1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

选取传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)M41毒株S1蛋白的重要抗原区,RT-PCR扩增选定的S1基因并构建pET-28a-S1重组表达载体,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE以及Western blot结果显示重组S1蛋白表达正确。以纯化的S1蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备并获得了抗IBV M41 S1蛋白的单克隆抗体3D9。免疫过氧化酶单层试验(immunoperoxidase monolayer assay, IPMA)结果显示,单克隆抗体3D9可与IBV M41毒株反应。成功表达了截短的IBV S1蛋白并获得了能识别IBV M41毒株的单克隆抗体,为IBV检测方法的建立奠定了基础。     

牛坏死杆菌对EPH4细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

为探究牛坏死杆菌对小鼠乳腺上皮细胞系(EPH4细胞)增殖和凋亡的影响，本研究将坏死杆菌(牛A25菌株)以感染复数(MOI)为100感染EPH4细胞，用EdU细胞增殖法检测细胞增殖率，用Hoechst染色以及DNA Ladder检测细胞凋亡，并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测凋亡基因的mRNA相对表达量变化。EdU检测结果显示，坏死杆菌可抑制EPH4细胞增殖；Hoechst染色以及DNA Ladder检测结果均显示，坏死杆菌可促进细胞凋亡的发生；RT-qPCR结果显示，与对照组相比，坏死杆菌感染EPH4细胞2 h时，促凋亡基因Bax、Bax/Bcl-2的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),感染4 h时，促凋亡基因Caspase-3和Caspase-9的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001),感染6 h时，促凋亡基因AIF的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001)。由此可见，牛坏死杆菌能够抑制EPH4细胞增殖且诱导细胞凋亡，为进一步研究坏死杆菌致病机制提供了相关数据支持。     

黄芩苷对自噬介导H6N6禽流感病毒致病损伤的作用

探究黄芩苷对H6N6亚型禽流感病毒诱导小鼠肺脏致病损伤的作用。选用40只昆明小鼠随机分为4组，即对照组、模型组、黄芩苷治疗组、3-MA抑制剂组。通过HE染色观察肺组织病理形态学变化，ELISA法检测血清中IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α的含量，透射电镜检测小鼠肺脏中自噬体的水平，Western blot检测肺组织LC3、Beclin-1及ATG7蛋白表达水平，免疫荧光法检测肺组织LC3蛋白表达水平，免疫组化法检测肺组织LC3、Beclin-1及ATG5蛋白表达水平，RT-qPCR检测肺组织自噬关键基因LC3、Beclin-1、ATG3、ATG5、ATG7及ATG12 mRNA转录水平。结果显示，经黄芩苷治疗后能显著缓解H6N6亚型禽流感病毒对小鼠肺组织的损伤，血清中IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α含量显著下降(P<0.01),肺组织中自噬体数量减少，LC3、Beclin-1、ATG5及ATG7蛋白表达水平显著下降(P<0.01),肺组织中LC3、Beclin-1、ATG3、ATG5、ATG7及ATG12 mRNA转录水平显著下降(P<0.01)。结...     

miR-24-3p对猪颗粒细胞雌二醇合成的作用

旨在探究miR-24-3p对猪颗粒细胞雌二醇合成的影响。本试验收集180日龄健康母猪的卵巢组织,每次试验取20对卵巢进行颗粒细胞的分离培养,将miR-24-3p的mimics及inhibitor转染进颗粒细胞,通过ELISA、RT-qPCR、Western blot、双荧光素酶报告试验等技术探究miR-24-3p对猪颗粒细胞雌二醇合成的作用。结果表明,过表达miR-24-3p可显著促进雌二醇的合成(P<0.01),并加快StAR、CYP19A1和CYP11A1的转录和翻译(P<0.05);而干扰miR-24-3p则显著抑制雌二醇的合成(P<0.05),并显著下调CYP11A1、CYP19A1的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。进一步研究发现,TOP1是miR-24-3p的直接靶基因,过表达miR-24-3p可显著抑制TOP1的表达(P<0.05),干扰miR-24-3p可显著上调TOP1的表达(P<0.05)。而过表达TOP1则可减弱miR-24-3p对颗粒细胞雌二醇合成的促进作用(P<0.05)。综上所述,miR-24-3p通过靶向TOP1...     

玉米RNA对小鼠脂肪沉积的影响

本试验旨在探讨玉米RNA对小鼠脂肪沉积的影响。将20只28日龄C57BL/6J小鼠随机分为2组,每组10个重复,每个重复1只小鼠。对照组灌服生理盐水,试验组灌服玉米RNA(100μg/d),试验期4周。试验结束时检测小鼠的生长性能、血清生化指标、体组成、体成像、器官指数及脂肪相关基因的表达。结果显示:试验组小鼠体重和附睾脂肪组织指数显著低于对照组(P<0.05),且整体脂肪含量明显减少,表明小鼠脂肪沉积减少。血脂检测结果显示,与对照组相比,试验组血清球蛋白(GLB)含量显著增加(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和总胆固醇(TC)含量极显著增加(P<0.01);脂肪相关基因检测结果显示,与对照组相比,试验组脂肪合成相关基因脂肪酸合成酶(FAS)和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBP-α)mRNA相对表达量极显著上调(P<0.01),过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)及脂肪分解基因脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)和激素敏感脂酶(HSL)mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),表明小鼠脂肪合成和脂肪分解增加。综上所述,玉米RNA能同时促进小鼠脂肪合成代谢和脂肪分解代谢,最终抑制脂肪沉积,为植物源核酸调控动物脂肪沉积影响因素的探索提供新证据。     

鸡传染性支气管炎病毒QX基因型S1蛋白重组乳酸菌的构建及小鼠免疫应答

为探究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白重组乳酸菌对小鼠免疫应答情况,本研究将IBV CH/LN/2019毒株的S1基因进行密码子优化,构建重组质粒pNZ8149-S1,电转至乳酸乳球菌NZ3900中,应用Western blot及间接免疫荧光试验评价重组乳酸乳球菌表达水平,免疫SPF小鼠,通过间接ELISA方法分析小鼠特异性抗体、CD4⁺、CD8⁺和细胞因子(IL-4和IFN-γ)分泌情况;结果显示,成功构建重组乳酸乳球菌pNZ8149-S1/NZ3900并表达目的蛋白;小鼠免疫试验结果显示,免疫组小鼠IgG抗体水平均高于pNZ8149/NZ3900、NZ3900和PBS组(P<0.05);特异性sIgA抗体水平显著高于对照组(P<0.01);此外,重组乳酸乳球菌能诱导小鼠产生较高水平的IL-4和IFN-γ(P<0.05)。结果表明,重组乳酸乳球菌pNZ8149-S1/NZ3900可以有效刺激小鼠机体产生体液免疫和细胞免疫,为IBV新型口服疫苗的研制提供了理论参考。