一种适用于棉花种子的DNA快速提取方法

对已报道的小麦、玉米等作物基因组DNA快速提取方法进行改良,首次在棉花上进行了尝试。以棉花种子为材料,用SDS法、NaOH法和简化法提取基因组DNA。结果表明,3种方法提取的DNA条带均较为清晰,完整性好,PCR扩增效果明显,结果稳定可靠。但DNA简化提取法整个提取过程操作简单、花费时间少、成本低,能在较短时间内完成大量样品的DNA提取。相比常规的以棉花叶片为材料的DNA提取法,本方法在降低试验成本的同时大大提高了工作效率。     

芝麻高纯度线粒体DNA提取技术研究

以2个芝麻品种黄化苗为试验材料,通过比较植物线粒体DNA(mtDNA)提取过程中的关键影响因素DNase处理时间,建立了一种经济、快速、高效的芝麻mtDNA提取方法.该方法分别通过匀浆化处理、2 400 g离心15min结合12 000 g离心12 min的差速离心方法分离获得粗制线粒体,再经过DNase酶切处理1.5...     

胡萝卜肉质根线粒体DNA提取方法研究

本研究以胡萝卜根为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心两种方法提取线粒体DNA。通过改变缓冲液、使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体。用SDS和蛋白酶K裂解线粒体,经酚:氯仿:异戊醇抽提除去蛋白,并用RNaseA消化从而得到单纯线粒体DNA。本实验还特别设计了叶绿体特异性引物检测线粒体DNA纯度。结果表明:利用优化后的蔗糖沉淀差速离心法提取胡萝卜线粒体DNA,所得线粒体DNA纯度高、产量高,每克肉质根能够得到27.60μg线粒体DNA。     

胡萝卜叶片线粒体DNA的提取方法

提取高质量的线粒体DNA,对植物细胞质雄性不育的研究起着关键性的作用。以胡萝卜叶片为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心2种方法提取线粒体DNA。通过改变分离和沉淀线粒体离心力大小、使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体。用SDS和蛋白酶K裂解线粒体经酚/氯仿/异戊醇抽提除去蛋白,并用RNaseA消化从而得到单纯线粒体DNA。还特别设计了叶绿体特,异性引物检测线粒体DNA纯度。结果表明:利用优化后的蔗糖沉淀差速离心法提取胡萝卜线粒体DNA,不仅操作简单,而且所得线粒体DNA纯度高、产量高,每克叶片能够得到34.46μg线粒体DNA。     

胡萝卜叶片线粒体DNA提取方法研究

本实验以胡萝卜叶片为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心两种方法提取线粒体DNA。通过改变分离和沉淀线粒体离心力大小、使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体。用SDS和蛋白酶K 裂解线粒体,经酚/氯仿/异戊醇抽提除去蛋白,并用RNase A 消化从而得到单纯线粒体DNA。本实验还特别设计了叶绿体特异性引物检测线粒体DNA纯度。结果表明：利用优化后的蔗糖沉淀差速离心法提取胡萝卜线粒体DNA,不仅操作简单,而且所得线粒体DNA纯度高、产量高,每克叶片能够得到34.46 μg 线粒体DNA。     

表面活性剂LAS在棉花高通量DNA提取中的应用

本研究以棉花种子和叶片为材料,探索一种适用于棉花DNA高通量提取的方法。通过在裂解液中加入APG、LAS、CPB、DTAB、Tween80、SDS和CTAB 7种不同表面活性剂,比较其在棉花种子和叶片中的DNA提取效果,并与磁珠法和氯仿抽提法两种高通量纯化方法结合,对比传统SDS和CTAB提取液提取效果。结果表明,加入LAS表面活性剂的裂解液提取的DNA效果较好,提取棉花种子和叶片的浓度可达2 127.61和572.70 ng/μL,OD260/280分别为1.97和1.98,上清液清澈透明。LAS与两种纯化方式结合的DNA提取效果都明显优于传统CTAB和SDS提取液的提取效果,其中LAS与氯仿抽提的纯化方法结合提取效果最好,且DNA提取通量可达到600个样品/2 h。LAS表面活性剂能在棉花种子和叶片DNA提取中都能起到促进作用,与氯仿抽抽提纯化方法相结合可兼顾DNA提取通量与质量,能满足后续大部分分子实验要求。     

基于TksGlfex DNA聚合酶SSR扩增的棉花DNA一步提取法

DNA提取是SSR-PCR检测的前提,但因棉花中富含多酚、多糖和蛋白质等干扰物质,使得提取棉花DNA较其他植物困难,这也导致棉花分子辅助育种明显滞后。本研究探索出适用于SSR技术的一步快速提取棉花DNA的方法。该方法 DNA提取液成份包括0.1 mol/L Na OH、0.7 mmol/L NaCl、20 mmol/Lβ-巯基乙醇、2%SDS和2%PVP。该方法的具体步骤是:将液氮下研磨成粉状的棉花幼嫩叶片,放入含0.5 m L DNA提取液的离心管中。热裂解后加入盐酸离心,取上清,直接用于SSR-PCR扩增。将该方法提取的DNA片段较大,质量较好,能很好地用于TksGlfex DNA聚合酶的SSR-PCR扩增,扩增电泳条带清晰。此棉花DNA提取操作简单、高效,相比传统的棉花DNA提取而言,显著地节约DNA提取时间。     

梭梭属2种植物线粒体基因组的提取

为了分离提取高质量梭梭(Haloxylon ammodendron)、白梭梭(Haloxylon persicum)线粒体DNA,以藜科梭梭属植物梭梭、白梭梭黄化苗为材料,通过采用蔗糖密度梯度离心和差速离心相结合的方法,使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体,用3% CTAB裂解线粒体,经氯仿/异戊醇抽提除去蛋白,从而得到单纯线粒体DNA。结果表明,所提取的线粒体DNA经电泳检测条带清晰,无拖尾现象,且A260/A280≈1.8,说明纯度较高、质量好,可满足后续有关线粒体DNA的相关实验。梭梭、白梭梭高纯度线粒体DNA提取技术的建立,为开展梭梭、白梭梭线粒体基因组研究奠定了基础。     

一种适于SSR-PCR的棉花基因组DNA提取法

本文是一种适合于棉花这样高含酚类植物进行DNA提取的方法,提取程序中增加了DIECA、PVP40等对棉花酚类物质氧化有抑制作用的试剂,简化并改进了本实验室常用的棉花总DNA提取方法的步骤,使棉花总DNA能够快速高质量提取,避免了以往的棉花总DNA提取过程中棉酚的氧化对DNA提取质量的影响,提取的DNA能很好地进行SSR-PCR分析.本法提取的棉花总DNA呈乳白、疏松的丝状、干后为透明状,能很好的溶解在TE或ddH2O中.用本方法提取的棉花总DNA作为模板用JESPR系列SSR标记对其进行SSR-PCR扩增,可以扩增出清晰的条带.     

单粒棉花种子DNA快速提取方法

本研究以棉花干种子为材料,探索一种适用棉花品种SSR分析的DNA快速提取方法。先采用SDS提取液进行一步裂解,并将RNA的去除操作融入抽提过程,从而简单快速的获得高质量棉种基因组DNA。紫外检测与琼脂糖凝胶电泳检测结果均表明,所得DNA纯度高,完整性好。另外,SSR分析结果也显示,扩增带型清晰易辨,重复性与稳定性好。相比常规的以棉花幼苗叶片为材料的DNA提取法,本方法在降低实验成本的同时大大提高了工作效率。