以PCR为基础的分子生物学方法及其在寄生虫学方面的应用

扼要介绍了以聚合酶链反应（ＰＣＲ）为基础的随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）ＰＣＲ连接的限制性酶切片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）等和ＤＮＡ序列分析在寄生虫学方面的应用及其优势和不足；叙述了检测寄生虫序列变异的几种新方法。     

PCR技术在兽医卫生检验中的应用

ＰＣＲ技术，即聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｃａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是８０年代中期发展起来的一项体外基因扩增技术。该技术问世以来，已在医学工程、疾病诊断、遗传工程、考古学及法医学等领域得到广泛应用。我所于１９９６年引入该技术，检测样品２４５份，提高了兽医卫生监督检验的科技含量，满足了检疫、科研、生产的需要。本文依据操作体会，对ＰＣＲ技术的原理、特点及应用作一综述。１ＰＣＲ技术原理 ＰＣＲ技术的原理是双链ＤＮＡ通过热变性，解链成两条单链，此两条单链均可作为ＤＮＡ合成的模板。寡核苷…     

RAPD技术及其在桑树上的应用

ＲＡＰＤ技术及其在桑树上的应用浙江农业大学蚕学系楼程富，张有做随着分子生物学技术的迅猛发展，新的研究手段和方法不断涌现，ｇｏ年代初在ＰＣＲ（聚合酶链式反应）基础上发展起来的ＲＡＰＤ．（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｌｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｌｉｃＤＮＡ）就...     

马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白D基因的分离克隆,定序及其在大肠杆…

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进行ｐＵＣ１８质粒载体中。将ｇＤ重组ｐＵＣ１８质粒ＤＮＡ用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（Ｄｉｇ）标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的Ｂａｍ ＨＩ－Ａ克隆中的Ａ     

应用聚合酶链反应检测伪狂犬病病毒DNA

选用标准的伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）闽Ａ株，经ＢＨＫ２１细胞培养，提取ＰＲＶＤＮＡ作为摸板；合成１对２０－ｍｅｒ寡核苷酸作为引物；选择扩增序列由２６２个碱基对组成的位于编码多糖蛋白ｇｐ５０基因，用耐热的Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶经３０个循环以后，扩增的产物直接用凝胶电泳检测，并用标准分子量确定。结果表明：以ＰＲＶＤＮＡ作为模板进行扩增，有扩增产物生成，以同科的疱疹病毒ＤＮＡ作为模板在相同的条件下进行ＰＣＲ扩增，无扩增产物生成，说明ＰＲＶＰＣＲ扩增是特异的。ＰＣＲ技术检测ＰＲＶＤＮＡ敏感度为２８．５ｐｇ．ＰＲＶＰＣＲ技术的建立，为伪狂犬病诊断和流行病学研究提供了更敏感、可靠的手段。     

PCR技术在兽医学中的应用

ＰＣＲ技术在兽医学中的应用李文刚，甘孟侯近２０年来，一系列新技术的诞生使分子生物学的发展日趋加快，如各种ＤＮＡ工具酶（限制性内切酶和ＤＮＡ连接酶）的使用；原核质粒及噬菌体载体用于克隆和产生大量特异性ＤＮＡ序列；ＤＮＡ序列分析技术及ＲＮＡ合成，首次报道...     

多聚酶链反应及其在检测病原微生物上的应用

多聚酶链反应及其在检测病原微生物上的应用舒黛廉杨增岐（西北农业大学动物医学系陕西杨陵７１２１００）随着分子ＤＮＡ重组技术的发展，１９８５年Ｓａｉｋｉ等建立了一种称为多聚酶链反应（ＰＣＲ）的ＤＮＡ扩增新技术，这种方法近几年来在分子生物学和临床医学领域中...     

氟烷基因型PCR—RFLP诊断技术在种猪性能测定中应用

在国内首先将氟烷基因型ＰＣＲ－ＲＦＬＰ诊断技术用于种猪性能测定中心的种猪测定。通过从猪毛、猪血中提取的ＤＮＡ，用特异性的引物进行ＰＣＲ扩增均能得到６５９ｂｐ的ＤＮＡ片断，并用ＨｈａⅠ内切酶消化ＰＣＲ产物，酶切结果能准确检测猪应激综合症，即ＲＹＲ１基因（氟烷基因）的突变。在测定的长白、约克、杜洛克猪中，发现长白猪Ｈａ１＾ｎ基因基因频率较其它品种高，为９．０％，杜洛克为４．２％，在大约克中未发现。     

聚合酶链反应检测鸡贫血因子DNA序列

本实验建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测鸡贫血因子（ＣＡＡ）ＤＮＡ，所用的一组２０个碱基的引物与位于ＣＡＡ复制型（ＲＦ）ＤＮＡ基因组的４８５－５０４及１０４８－１０６７位置的序列互补，扩增产物为５８３ｂｐ，并通过在扩增的序列上只有一个ＨｉｎｄⅢ位点而证实扩增的是ＣＡＡ，用地高辛标记的２５个碱基作为探针进行斑点杂交，表明扩增片段对ＣＡＡ ＲＦ ＤＮＡ是特异的。优化的ＰＣＲ方法检测ＣＡＡ不仅特异而且     

应用聚合酶链反应技术克隆猪源大肠杆菌耐热肠毒素基因

以质粒ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增和克隆了猪大肠杆菌耐热毒素基因ＤＮＡ片段；核苷酸序列分析表明，阳性克隆为猪大肠杆菌ＳＴｌａ基因缺失ＣｏｏＨ端最后两个编码密码和终止密码的ＤＮＡ片段     

PCR的基本原理及在兽医科学中的应用

ＰＣＲ的基本原理及在兽医科学中的应用宋长绪，杜伟贤（广东省农科院兽医研究所广州５１０６４０）聚合酶链式反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃ－ｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是１９８５年Ｓａｉｋｉ等建立的，是以一段双链ＤＮＡ为模板，一对引物为引导，在四种脱氧...     

常用PCR技术及其在禽病研究中的应用

聚合酶链式反应技术（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是１９８５年美国Ｃｅｔｕｓ公司Ｍｕｌｉｓ等人开发的一项专利，特点是所需样品极少，获得结果相当准确，因而用途越来越广泛。一ＰＣＲ基本原理类似于天然ＤＮＡ的复制机制根据已知的待...     

鸭不同品种的随机扩增多态性DNA分析

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡＳ,ＲＡＰＤ）是利用含有１０个（或９个）碱基的随机引物（单引物）通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对模板ＤＮＡ进行随机扩增,根据扩增的某一ＤＮＡ片段的有无来比较不同基因组ＤＮ...     

应用PCR扩增检测伊氏锥虫的研究

本文建立了伊氏锥虫ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增技术,并用于分裂工锥虫的检测,经ＰＣＲ增后的ＤＮＡ片断分子量约为２３７ｂｐ,可以检测到０．１ｐｇ总ＤＮＡ或１条虫体,可以诊断小鼠的早期感染（第一天）和重复感染,还可以用来考核抗锥虫药物疗效,该项技术对锥虫具有特异性,且灵敏性和准确性都很高。     

聚合酶链反应检测牛白血病病毒的研究

试验针对牛白血病病毒（ＢＬＶ）前病毒基因的特点，设计一对引物，对ＢＬＶ前病毒的ＤＮＡ提取物和细胞毒直接煮沸产物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增３０个循环后，经电泳分离，紫外灯下可见到一条明显的ＤＮＡ带，其大小为４４０ｐｂ。对连续３年琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）ＢＬＶ阳性的２０头牛血样ＤＮＡ提取物进行ＰＣＲ扩增，阳性率为７０％。本法具有敏感、特异、快速及良好的重复性等特点。     

聚合酶链反应检测牛白血病病毒的研究

试验针对牛白血病病毒（ＢＬＶ）前病毒基因的特点，设计一对引物，对ＢＬＶ前病毒的ＤＮＡ提取物和细胞毒直接煮沸产物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增３０个循环后，经电泳分离，紫外灯下可见到一条明显的ＤＮＡ带，其大小为４４０ｐｂ。对连续３年琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）ＢＬＶ阳性的２０头牛血样ＤＮＡ提取物进行ＰＣＲ扩增，阳性率为７０％。本法具有敏感、特异、快速及良好的重复性等特点。     

应用PCR技术诊断初生犊牛牛白血病病毒

研究了特异的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测１／万淋巴细胞感染牛白血病病毒（ＢＬＶ）的试验，通过检查持续淋巴细胞增多症（ＰＬ）的母牛传递病毒给犊牛的比率。评价了ＰＣＲ技术野外应用效果，检测４３头犊牛出生时和６月龄时血清中病毒抗体和淋巴细胞中病毒前ＤＮＡ，结果出生进３６头犊牛ＢＬＶ阴性，３头犊牛上述两种检测结果都呈阳性，另外的４头犊牛中２头ＢＬＶ抗体阴性，ＤＮＡ阳性，另两头结果正相反；６月龄时，出生时ＢＬ     

通过随机扩增的多态性DNA鉴别七种艾美球虫的研究

通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）随机扩增的多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）鉴别艾美球虫。用七种长度１０到２０个核苷酸的引物任意同七种艾美球虫卵囊的ＤＮＡ结合产生唯一的ＤＮＡ指纹。在不同的反应申合成了长度２００—２２００碱基对（ｂＰ）的ＤＮＡ片Ａ。在大多数情况下观察到种特异性ＤＮＡ片断迁移率图谱。在几次试验中，合成了多种ＤＮＡ片断，在大多数试验中，较易鉴别出艾美球虫种类．在４９次试验中，仅６次没有产生ＤＮＡ片断。     

几种分子生物学技术在兽医领域中的应用

第三讲聚合酶链反应技术及其应用１概念聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）用于扩增位于两段已知序列之间的ＤＮＡ区段。在由ＤＮＡ聚合酶催化的一系列反应中，使用了两段长度为１６～２４ｂｐ的寡核苷酸作为反应的引物（ｐｒｉｍｅ...     

噬菌体肽库的构建及抗狂犬病病毒肽的筛选

体外合成编码６肽的随机ＤＮＡ片段以及用于随机。ＤＮＡ片段扩增的１对ＰＣＲ引物，经ＰＣＲ扩增ＢｇｌⅠ酶切扩增产物，得到编码６肽的随机ＤＮＡ克隆片段，将随机ＤＮＡ克隆片段与噬菌体表达载体（ＦＵＳＥ５）相连接，连接产物电转化ＭＣ１０６１宿主菌，经抗性和插入复活筛选，获得１．６×１０＾８个独立克隆。文库经ＰＣＲ扩增、斑点杂交、序列测定等综合鉴定，结果表明已成功构建了噬菌体６肽表面表达文库。用生物素化的抗狂