褪黑素膜受体在泌乳期奶山羊乳腺的表达及褪黑素对乳腺β-酪蛋白表达的影响

此试验旨在研究褪黑素膜受体(Melatonin membrane receptors, MT)在奶山羊乳腺中的分布和表达及褪黑素对奶山羊乳腺β-酪蛋白(β-casein)表达的调节作用。以泌乳期奶山羊为研究对象,采用Real-time PCR和免疫组织化学染色方法检测MT1和MT2在泌乳期不同阶段奶山羊乳腺中的表达和分布;褪黑素处理体外培养的泌乳期乳腺组织,Real-time PCR方法检测其β-酪蛋白mRNA的表达情况。结果发现:(1)MT1和MT2 mRNA在泌乳期奶山羊乳腺都有表达,并具有相同的表达趋势,泌乳高峰期(泌乳期60 d)显著高于泌乳上升期(泌乳期30 d)和泌乳下降期(泌乳期120 d)(P0.05);(2)MT1和MT2主要定位于乳腺上皮细胞,泌乳高峰期为强阳性,泌乳上升期和下降期阳性反应较弱;(3)褪黑素处理能显著下调乳腺组织β-酪蛋白mRNA的表达(P0.05)。结果表明,褪黑素能直接作用于乳腺,调节泌乳期奶山羊泌乳活动。     

褪黑素受体MT1和MT2在绵羊胃中的分布及表达

【目的】应用分子生物学技术探究绵羊不同胃室组织褪黑素(MT)特异性膜受体MT1和MT2的分布规律及表达模式,以初步探明绵羊不同胃室组织褪黑素调节胃消化的生物效应机制。【方法】采集绵羊瘤胃背囊、瘤胃腹囊、网胃、瓣胃和皱胃5个组织部位,用ELISA、实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blotting方法检测褪黑素特异性膜受体MT1和MT2在绵羊胃组织不同部位的分布规律及表达模式。【结果】ELISA结果显示,绵羊各胃组织中均含有褪黑素,且皱胃中褪黑素含量最高,瓣胃次之,瘤胃背囊、瘤胃腹囊和网胃中均较低。实时荧光定量PCR结果显示,MT1和MT2基因mRNA在皱胃中含量均最高,其次是瘤胃腹囊,在瘤胃背囊和网胃中含量较低。免疫组化结果显示,MT1和MT2蛋白在绵羊各胃组织中均有分布,主要表达于各胃组织的黏膜层,且在皱胃腺体中的分布呈从底部到颈部逐渐增多的趋势。Western blotting结果显示,MT1和MT2蛋白在网胃中表达均最高,瓣胃次之,在瘤胃背囊、瘤胃腹囊和皱胃中表达均较低。【结论】褪黑素在绵羊各胃组织中差异化表达从而发挥多样性生理功能,可能通过与胃组织上特异性受体MT1和MT2结合,通过信号传导系统而调控前胃受食糜刺激后发生反刍生理过程。     

褪黑素受体在未妊娠和妊娠牦牛子宫表达的研究

旨在研究褪黑素对妊娠牦牛子宫的调控作用,采用real-time PCR法和免疫组织化学S-P法,对未妊娠和妊娠不同时期牦牛子宫中褪黑素受体(MT1)mRNA和褪黑素受体(MT1)蛋白的表达进行研究。结果表明:牦牛未妊娠和妊娠的不同时期,牦牛子宫基质细胞(SC)和肌层平滑肌细胞(MM)中均有MT1蛋白表达(P0.05);血管内皮细胞(EBV)和血管平滑肌细胞(VSM)中的MT1蛋白表达,在妊娠28~35d差异不显著,随妊娠时间的增加,MT1蛋白表达增加(P0.05);腺上皮细胞(GE)中的MT1蛋白,在妊娠初期(妊娠28~35d)差异不显著,妊娠50~60d时,差异显著(P0.05),妊娠90~100d时,差异极显著(P0.01)。而在腔上皮细胞(SE)中,MT1蛋白表达量在妊娠28~35d比未妊娠时低(P0.05),而这种趋势随妊娠时间的增加继续降低(P0.01)。未妊娠牦牛子宫中MT1mRNA表达量显著高于妊娠牦牛(P0.01)。综上表明,在妊娠期,牦牛子宫对褪黑素的需求量降低,褪黑素主要作用于牦牛GE,调节子宫腺功能,使牦牛子宫产生适应妊娠的生理反应。     

绵羊松果体及生殖轴系褪黑素受体MT1的克隆

采用RT-PCR技术从绵羊松果体、下丘脑、垂体及卵巢组织中克隆到褪黑素受体MT1基因,扩增序列全长650 bp.同源性分析表明与GenBank中已知序列的同源性均达到99%,证明这些组织存在MT1基因的mRNA表达.序列分析发现绵羊下丘脑、垂体和卵巢组织中的基因序列为Mella α基因,而松果体组织中的基因序列为Mella β基因.绵羊卵巢组织中存在有MT1褪黑素受体,暗示褪黑素可能直接作用于绵羊卵巢,参与生殖功能的调节.     

褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制的探究

旨在研究外源性褪黑素(melatonin,MT)对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制。进行以下试验:1)通过免疫荧光技术检测了水牛卵丘细胞和卵母细胞上褪黑素的两种受体MT1和MT2的表达情况。2)在体外成熟培养液中添加不同浓度褪黑素(0、10^-9、10^-8、10^(-7 )mol·L^-1),观察褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟及其随后体外受精胚胎发育的影响。3)根据褪黑素最优浓度,成熟液中添加不同处理组合:未处理组、褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)、褪黑素受体拮抗剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU)、褪黑素受体激动剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )IIK7)、同时添加褪黑素受体拮抗剂和褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU+10^(-8 )mol·L^(-1 )MT),处理卵母细胞24h后,统计卵母细胞第一极体排出率,并对第一极体的卵母细胞进行ELISA Kit检测,同时,成熟后的卵母细胞分别进行体外受精,并统计其分裂率和囊胚率。结果显示:1)在水牛卵丘细胞和卵母细胞上均发现有褪黑素受体MT1和MT2;2)褪黑素处理的各组卵母细胞成熟率均显著高于0 mol·L^-1组(P<0.05)。随后,各组受精后的分裂率也显著高于0mol·L^(-1 )MT组(P<0.05),而且10^-8和10^(-7 )mol·L^(-1 )MT组的囊胚率显著高于0mol·L^(-1 )MT组(P<0.05);3)褪黑素受体拮抗剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU)组的卵母细胞成熟率、体外受精胚胎分裂率和囊胚率与未添加组相比,差异均不显著(P>0.05);褪黑素受体激动剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )IIK7)组的水牛卵母细胞成熟率、体外受精胚胎分裂率和囊胚率均显著高于未添加组(P<0.05),但与褪黑素组(10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)相比差异不显著(P>0.05);同时添加褪黑素受体拮抗剂和褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU+10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)组的水牛卵母细胞成熟率、体外受精后胚胎的分裂率和囊胚率与未添加组相比,差异不显著(P>0.05)。4)褪黑素处理组的卵母细胞内cAMP的含量显著低于未处理组,而cGMP含量显著高于未处理组(P<0.05)。综上表明,褪黑素通过与细胞膜G蛋白偶联受体MT1和MT2结合,从而抑制了cAMP合成,提高cGMP含量,进而促进卵母细胞成熟及早期胚胎发育。     

褪黑素受体基因MTR1在绵羊生殖轴系的表达定位

褪黑素(Melatonion,MT)通过分布于生殖系统不同部位的褪黑素受体(Melatonin receptor,MTR)来调节动物的生殖活动。研究褪黑素受体1型(MTR1)在繁殖期与非繁殖期动物生殖系统不同组织的分布和表达对于了解动物的生殖活动规律以及褪黑素对动物生殖活动的调节机制具有重要意义。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)等方法研究了MT1在绵羊繁殖期与非繁殖期生殖轴系不同部位分布和表达情况。HE染色结果表明,各组织都呈现了正常的细胞形态;IHC结果表明,MTR1在绵羊繁殖期与非繁殖期卵巢和睾丸组织中均有表达,其中繁殖期绵羊卵巢组织中颗粒细胞表达信号较强;qRT-PCR和WB法结果均表明,绵羊在繁殖期附睾组织中MTR1的相对表达量极显著高于其他组织(P0.01),在非繁殖期下丘脑组织中MT1的相对表达量极显著高于其他组织(P0.01)。综上,MT在绵羊繁殖期与非繁殖期生殖轴系不同部位均有表达并存在显著差异,为进一步探讨MTR在绵羊生殖轴系中的作用机制提供了科学的数据参考。     

产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴褪黑素受体mRNA表达规律的研究

为阐明不同繁殖阶段鹅HPG轴褪黑素受体mRNA表达的变化规律,应用实时荧光定量PCR技术检测产蛋前期和产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体、卵巢组织中3种褪黑素受体亚型(Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c)mRNA相对表达量。结果表明:产蛋前期鹅下丘脑Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的5.25倍(P<0.01)、0.43倍(P<0.01)和1.20倍(P<0.01);产蛋前期鹅垂体Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的3.01倍(P<0.01)、7.51倍(P<0.01)、7.25倍(P<0.01);产蛋前期鹅卵巢组织中Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的1.55倍(P<0.01)、0.55倍(P<0.01)、2.86倍(P<0.01)。以上结果提示,褪黑素可通过其特异性受体的介导在HPG轴的各级水平发挥其调节作用,并且下丘脑褪黑素主要通过Mel-1a介导、垂体褪黑素主要通过Mel-1b和Mel-1c,卵巢褪黑素主要通过Mel-1a和Mel-1c介导来发挥其调控作用。     

雌激素受体基因在崂山奶山羊乳腺中的表达及其甲基化分析

实验利用Real-time PCR技术检测青春期、妊娠期、泌乳期及退化期崂山奶山羊乳腺组织中雌激素受体α基因的表达情况,通过亚硫酸盐测序法分析相应时期的甲基化水平,并分析二者之间的关系。结果表明:雌激素受体α(ERα)基因在青春期的崂山奶山羊乳腺中高度表达,妊娠早期表达量进一步上升,妊娠中期达到最高值,妊娠晚期表达量急剧下降,在此后的泌乳期及退化期表达量维持在较低水平;而甲基化检测结果显示,青春期、妊娠早期、妊娠中期、妊娠晚期、泌乳早期、泌乳晚期及退化期ERα基因的甲基化比率分别为5.0%、3.8%、3.8%、0%、9.4%、10.6%、10.6%。结果显示,DNA甲基化与ERα基因的表达呈现滞后性的强负相关关系(P<0.01,γ=-0.982)。可见,崂山奶山羊乳腺组织中ERα基因的甲基化水平与基因表达之间有一定的关联。     

溶血磷脂酸受体1-3在牦牛不同时期卵巢中表达定位

为探究正常生理下条件下溶血磷脂酸受体(LPAR)1-3在牦牛不同时期卵巢(卵泡期、黄体期、妊娠期)表达及生物学作用,利用RT-qPCR检测LPAR1-3基因在不同时期卵巢上的表达,同时利用蛋白质免疫印迹、免疫组织化学(IHC)等方法对LPAR1-3基因和蛋白的表达进行分析和定位。结果显示,LPAR1-3在牦牛不同时期卵巢上均有表达,其中LPAR1-3的表达量在妊娠期显著高于卵泡期和黄体期(P0.05),卵泡期表达量最低;在卵泡期、黄体期、妊娠期LPAR3的表达量均显著高于LPAR1和LPAR2(P0.05),LPAR2的表达量最低;IHC结果显示,LPAR1-3在卵巢生殖上皮、颗粒细胞、卵泡液、卵泡膜和黄体细胞均有表达。研究结果提示LPAR1-3可能在卵泡生长、发育、排卵以及维持妊娠等一系列生殖过程中发挥重要的作用,其中LPAR3可能在这一过程中起主要作用,该结果有助于对牦牛繁殖机能的进一步研究,可为高原哺乳动物生殖生理的研究提供理论依据。     

绵羊甲状腺自主合成并分泌褪黑素的研究

本研究旨在探讨绵羊甲状腺是否表达催化褪黑素合成的关键酶基因AANAT、HIOMT以及褪黑素受体基因MT1,并自主合成和分泌褪黑素,为研究甲状腺在绵羊季节性繁殖中的功能奠定基础。利用RT-PCR、组织免疫荧光、细胞免疫荧光和ELISA技术,分别在基因、蛋白质和细胞水平对绵羊甲状腺中合成褪黑素的关键酶基因AANAT、HIOMT以及褪黑素受体基因MT1的表达、细胞定位以及褪黑素的合成与分泌进行了研究。结果表明:绵羊甲状腺表达褪黑素合成酶基因AANAT、HIOMT和褪黑素受体基因MT1,并能够自主合成和分泌褪黑素。该研究首次证实了绵羊甲状腺具有自主合成并分泌褪黑素的功能,表明甲状腺内部可能存在有通过褪黑素调控甲状腺素合成的新通路,为进一步研究绵羊甲状腺自主合成褪黑素的功能奠定了基础。     

Melatonin membrane receptors MT1 and MT2 are expressed in ram spermatozoa from non-seasonal breeds

Tropical Animal Health and Production - In mammals, many melatonin biological functions are mediated through its interaction with the membrane receptors MT1 and MT2. We have previously reported...     

褪黑激素在毛皮动物生产上的应用

本文论述了褪黑激素（MT）植入物在水豹、狐猩、貉等毛皮运动生产上的应用，MT能促进其冬皮不同程度的早熟；也能让绒山羊、牦牛在非生绒期长绒、让安哥拉兔夏毛产量增加。     

饲粮添加锌对蛋鸡金属硫蛋白基因表达的影响

选用66只18周龄商品代伊莎蛋鸡,随机分为3组,每组22只。对照组饲喂基础饲粮,试验1、2组在基础饲粮中分别添加60和180 mg/kg锌(以ZnSO4.H2O形式),10周后屠宰采样。采用相对定量反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测不同锌添加水平对蛋鸡肝脏和肾脏中金属硫蛋白(Metallothionein,MT)mRNA表达水平的影响。结果表明:试验1组蛋鸡肝脏中MT mRNA表达丰度显著高于试验2组和对照组(P<0.05),而试验2组与对照组之间无明显差异(P>0.05)。试验1组蛋鸡肾脏MT mRNA表达丰度显著高于试验2组(P<0.05),而试验1、2组与对照组之间均无显著性差异(P>0.05)。在饲粮中添加低水平锌可显著上调蛋鸡肝脏和肾脏中MTmRNA的表达。     

Avian pathogenic Escherichia coli MT78 invades chicken fibroblasts

Avian pathogenic Escherichia coli (APEC) are responsible for extraintestinal diseases, called colibacillosis, in avian species. The most severe manifestation of the disease is colisepticemia that usually starts at the respiratory tract and may result in bird death. However, it is not yet clear how APEC cross the respiratory epithelium and get into the bloodstream. In this work, we studied the interaction between 8 APEC strains (UEL31, UEL17, UEL13, UEL29, MT78, IMT5155, IMT2470, A2363) and a chicken non-phagocytic cell, the fibroblast CEC-32 cell line. We investigated the association profile, the invasion capability, the cytotoxicity effect and the induction of caspase-3/7 activation in an attempt to understand the way the pathogen gains access to the host bloodstream. Association to cells was determined after 1 h of infection, while cell invasion was determined after 4 and 24 h of infection. The cytotoxic effect of bacterial infection was measured by lactate dehydrogenase (LDH) release and the activation of the apoptotic program was verified by caspase-3/7 activation. Also, the presence of genes for adhesins, invasins and other related virulence-associated factors was verified by PCR. All bacterial strains showed similarity in relation to adhesion, LDH release and caspase-3/7 activation. However, one APEC strain, MT78, showed high invasion capability, comparable to the invasive Salmonella typhimurium strain SL1344. Since an APEC strain was capable of invading non-phagocytic cells in vitro, the same may be happening with the epithelial cells of the avian respiratory tract in vivo. CEC-32 monolayers can also provide a useful experimental model to study the molecular mechanisms used by APEC to invade non-phagocytic cells.     

Components of growth in mice hemizygous for a MT/bGH transgene.

The objective of this study was to determine the effects of a metallothionein/bovine GH transgene on duration and rate of growth of lean and fat in mice. Mice were produced by mating hemizygous transgenic males to nontransgenic females. Ten weights and six measurements of total body electrical conductivity to estimate body composition were taken on 147 progeny between birth and 84 d of age. Growth traits for fat-free mass (FFM) and body fat mass (FM) were obtained by fitting FFM and FM to a logistic curve y = A/(1 + exp(k(b - t))), where y is FFM or FM, A is asymptotic mass, k and b are curve parameters, and t is time in days. The function and its first, second, and third derivatives for FFM and FM were used to model growth. A mixed model was used with animal and litter as random effects and trans-genotype, sex, and transgenotype x sex as fixed effects in analyses of growth traits. Estimates of transgeno-type and transgenotype x sex interaction were tested by using their corresponding standard errors. Males had greater response to the transgene than females in final FFM and growth rate during the entire growth period. Transgenic males and females had greater duration of lean growth than nontransgenics. Transgenic males began to accumulate fat later, but they eventually gained more fat than transgenic females.     

微量元素锌的吸收、代谢及金属硫蛋白基因表达

本文通过分析锌吸收、代谢与金属硫蛋白(MT)的关系,表明锌可以直接调控金属硫蛋白基因表达,而金属硫蛋白的生物合成诱导也将调节体内锌的吸收、代谢,维持体内锌的稳态,为从分子水平研究锌的营养提供参考.     

猪金属硫蛋白抗体的制备及应用

以自猪肝提取的Zn—MT与BSA的偶联物为抗原，免疫昆明小鼠制备了多克隆抗体。获得的抗体经鉴定后用于建立检测猪MT的间接竞争EI。ISA。结果表明：制备的IgG达到电泳纯，是猪MT的特异性抗体。所建立的间接竞争ELISA的灵敏度为4．1ng／mL，批内变异系数是9．976％，批间变异系数为14．3858％，可用于猪体MT的定性、定量测定。