羊源波氏希瓦氏菌的鉴定及其生物学特性

为了探究从川南黑山羊体内分离获得的1株细菌LZS-01的致病性和生物学特性，本试验采用革兰染色、细菌形态观察、生化鉴定、16S rDNA基因序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验对其进行研究。结果显示：菌株LZS-01为短杆状革兰阴性菌，16S rDNA基因扩增后得到的DNA片段长度为1 446 bp,与GenBank中波氏希瓦氏菌(Shewanella baltica)的同源性为100%,在系统进化树中与波氏希瓦氏菌(NCTC10737)聚为一支，综上结果推测该菌株为波氏希瓦氏菌；该菌株对小鼠致病性较强，可导致其肺泡壁增厚、肺泡腔狭窄，纤维样物质充满肺泡，肾小管上皮细胞水肿严重、管腔狭窄等；该菌株对环丙沙星、四环素等抗菌药物敏感，对氟苯尼考、青霉素和氧氟沙星等抗菌药物耐药。结果表明，波氏希瓦氏菌对动物具有一定致病性和耐药性。本试验结果为波氏希瓦氏菌感染性疾病的研究和临床防治积累了科学资料。     

耗儿鱼松鼠葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了探讨松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)的病原学特性,本试验从耗儿鱼(Corydoras)分离出菌株YDE0916,并对其进行生理生化鉴定、16S rDNA基因PCR扩增、序列分析及耐药性分析。结果显示,该菌株为革兰氏阳性球菌,呈串形,无芽孢,无荚膜。该菌不运动,β-半乳糖苷酶、VP反应为阴性,蔗糖、麦芽糖为阳性。扩增的16S rDNA基因序列长度为1 476 bp (GenBank登录号:KP031644),与GenBank中的松鼠葡萄球菌16S rDNA基因序列的相似性达99%。系统进化树显示,菌株YDE0916和松鼠葡萄球菌聚为一簇,由此判定菌株YDE0916为松鼠葡萄球菌。药敏试验结果显示,该菌株对诺氟沙星、杆菌肽耐药,对美满霉素、庆大霉素、氨苄西林等22种药物高度敏感。本研究为松鼠葡萄球菌的分离鉴定及预防积累参考依据。     

一株门多萨假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析

试验旨在确定感染黄颡鱼的病原菌并探讨其耐药性。采用细菌培养、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析方法进行菌株分离鉴定,运用PCR方法扩增耐药基因,用纸片扩散法对分离菌进行药敏试验。结果显示,分离菌与门多萨假单胞菌基本一致,16S rDNA基因长度为1 442 bp。同源性及系统进化树分析显示,该菌16S rDNA序列与门多萨假单胞菌NK-01同源性为99.6%,亲缘关系最近。综合判定分离菌为门多萨假单胞菌,命名为fsznc-01。耐药基因检测结果显示,分离菌fsznc-01含有β-内酰胺类耐药基因TEM,氨基糖苷类耐药基因aph（3'）-Ⅱa、aac（6）-Ⅰb、aac（3）-Ⅱa及磺胺类耐药基因Sul1和Sul2,未检测出磺胺类耐药基因Sul3。药敏试验结果显示,分离菌fsznc-01对头孢他啶、庆大霉素和哌拉西林等药物敏感,对头孢氨苄、头孢唑林和头孢拉定耐药。本试验结果可为预防门多萨假单胞菌感染导致的鱼类疾病提供参考依据。     

一株门多萨假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析

试验旨在确定感染黄颡鱼的病原菌并探讨其耐药性。采用细菌培养、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析方法进行菌株分离鉴定,运用PCR方法扩增耐药基因,用纸片扩散法对分离菌进行药敏试验。结果显示,分离菌与门多萨假单胞菌基本一致,16S rDNA基因长度为1 442 bp。同源性及系统进化树分析显示,该菌16S rDNA序列与门多萨假单胞菌NK-01同源性为99.6%,亲缘关系最近。综合判定分离菌为门多萨假单胞菌,命名为fsznc-01。耐药基因检测结果显示,分离菌fsznc-01含有β-内酰胺类耐药基因TEM,氨基糖苷类耐药基因aph(3′)-Ⅱa、aac(6)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱa及磺胺类耐药基因Sul1和Sul2,未检测出磺胺类耐药基因Sul3。药敏试验结果显示,分离菌fsznc-01对头孢他啶、庆大霉素和哌拉西林等药物敏感,对头孢氨苄、头孢唑林和头孢拉定耐药。本试验结果可为预防门多萨假单胞菌感染导致的鱼类疾病提供参考依据。     

哺乳仔猪渗出性皮炎的病原学诊断及综合防治

对发生渗出性皮炎(exudative epidermitis,EE)的病死仔猪进行病原学诊断,通过染色特性、生化试验、致病性试验及药敏试验,结合PCR方法对其16S rDNA基因序列分析进行鉴定。结果表明,病原为猪葡萄球菌和松鼠葡萄球菌混合感染,对小鼠均有致病性,且能从死亡小鼠上分离到相同病原菌。分离菌株混合培养物对头孢类等药物高度敏感,对氯霉素等药物中度敏感,对四环素和红霉素耐药。提示可使用敏感药物进行预防和治疗,注重平时的饲养管理和环境消毒是预防本病的重要措施。     

一例棘腹蛙“白内障”的病原分离鉴定

在患"白内障"棘腹蛙眼部、口腔和胃部分离到一株圆形或椭圆形、葡萄状堆积的革兰氏阳性菌,经培养特性观察和致病性实验,确定候选菌株CQWU201401为"白内障"的病原;通过针对该菌株的生理生化特性鉴定和16S rDNA测序鉴定结果判定该候选菌株为金黄色葡萄球菌。采用药敏纸片法对该菌株进行药敏试验,在10种药物中的仅对四环素有耐药现象;针对该病原菌的分离鉴定和药敏试验为临床上防治该病提供了参考。     

广西猪流产胎儿溶血葡萄球菌的分离鉴定及其16S rDNA基因系统进化分析

为了查清引起母猪流产的原因,从送检流产胎儿的内脏组织中分离培养细菌,对分离菌株进行革兰氏染色镜检、药敏试验、生化试验、16S rDNA基因序列测定、同源性分析及系统进化树构建。结果表明,分离菌株为革兰氏阳性球菌,其生长特性、菌落特征、生化试验鉴定结果基本符合《常见细菌系统鉴定手册》中溶血葡萄球菌的生化特性;但在血琼脂培养基上并未出现溶血现象。药敏试验结果表明,分离菌株仅对新生霉素、利福平和米诺环素敏感,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物严重耐药。分离菌株16SrDNA基因与12株不同来源的溶血葡萄球菌同源性在99.8%～99.9%之间,与溶血葡萄球菌MER TA39菌株(KT719446.1)遗传进化距离最相近。小鼠致病性试验表明,分离菌株能导致小鼠出现行动迟缓、扎堆和被毛燥乱等临床症状,并能从小鼠体内分离出相同形态特征和菌体特征的菌株。表明从猪流产胎儿体内分离到的菌株是存在多重耐药性的γ-溶血葡萄球菌。     

一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验从甘肃肃南县某羊场死亡羊中分离出疑似某球菌菌株XCP,为进一步确定该致病菌株及其耐药性情况,进行了病原菌分离、革兰氏染色、生化试验、16S rRNA PCR扩增鉴定、小鼠致病力试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因扩增试验研究。结果发现,该菌革兰氏染色阳性,高盐、蜜二糖、蔗糖等生化反应阳性,VP、马尿酸盐、阿拉伯糖等生化反应阴性;16S rRNA基因PCR扩增后,进行BLAST比对,结果与GenBank中的屎肠球菌16S rRNA基因序列同源性为100%;小鼠致病力试验发现,该菌株具有很强的致病性;该菌株对β-内酰胺类抗生素苯唑西林、青霉素G,喹诺酮类抗生素诺氟沙星、环丙沙星、左氟沙星,以及四环素等高度耐药,对红霉素、万古霉素、克林霉素等抗生素敏感;毒力基因Asal、cylA、acm和耐药基因TetM、ant（6）-Ⅰ、aac（6'）-aph（2"）、ermB扩增均为阳性。结果表明,该菌为屎肠球菌（Enterococcus faecium）,具有较强的致病性和耐药性,可能与毒力基因和耐药基因的高阳性率有关。     

奶牛乳房炎乳样产色葡萄球菌的分离鉴定及酸性电解水体外杀菌试验

为了解某奶牛养殖场奶牛临床乳房炎的致病菌及酸性电解水对奶牛乳房炎致病菌的体外杀菌效果,本试验采集该奶牛养殖场临床乳房炎患病奶牛乳样,对乳样中的病原菌进行分离后通过革兰氏染色和镜检、生化试验、16S rDNA基因序列分析鉴定病原菌种类,并对分离菌株进行药敏试验和动物致病性试验,通过体外杀菌试验分析酸性电解水对分离菌株的杀菌效果。结果表明：分离菌株在Baird-Parker(BP)培养基上生长良好,培养24 h后可见菌落表面光滑,呈灰黑色,无透明圈。革兰氏染色、镜检可见分离菌株呈蓝紫色并排列成葡萄串状,将该分离菌株命名为QSPT2023。分离菌株QSPT2023与葡萄球菌属的生化特性基本一致;16S rDNA基因序列与GenBank收录的产色葡萄球菌OP068076.1的基因序列相似性最高,为99.93%;与产色葡萄球菌OP068076.1位于系统发育树的同一分支,亲缘关系最近;与产色葡萄球菌KJ783397.1、LC317309.1、ON715882.1的亲缘关系较近,与金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌等的亲缘关系较远;对氯霉素、头孢噻肟、头孢呋辛、头孢氨苄、头孢他啶、头孢唑啉...     

一株黑叶猴源鸟肠球菌的分离鉴定及耐药分析

黑叶猴是我国一级重点保护动物,2018年11月贵州某动物园中黑叶猴出现死亡,为调查其原因,本研究采集病死黑叶猴的肺脏样品进行细菌分离纯化,并对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因序列鉴定、小鼠致病性试验及分离株的药敏试验和耐药基因检测。结果显示:经形态观察、培养特性鉴定以及16S r RNA的PCR鉴定,该分离株为鸟肠球菌,将其命名为GZ1811;16S rRNA基因的同源性分析及进化树结果显示,GZ1811株与GenBank中鸟肠球菌的一致性为100%;小鼠致病性试验结果显示,小鼠出现临床症状,甚至死亡,解剖可见其肺脏有散在出血点;药敏试验结果显示,分离株对四环素等药物耐药。耐药基因PCR检测结果显示分离菌株的四环素类耐药基因tetM呈阳性,表明耐药表型和耐药基因型一致。本实验为黑叶猴鸟肠球菌病的诊断和防治提供具有科学价值的参考依据。     

种鸡场空舍期禽舍空气中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解种鸡场空舍期禽舍空气中金黄色葡萄球菌的耐药性情况,采用自然沉降法对山东省某大型种鸡场空舍期空气中金黄色葡萄球菌用Baird-parker培养基进行分离,得到一株细菌,通过培养特性、染色镜检及生化特性对分离菌株进行鉴定,用PCR法扩增16S rRNA基因片段,克隆测序,进行BLAST比对,并用30种常用抗菌药物对分离菌株进行药敏试验。结果表明:分离菌株在BP培养基上有金黄色葡萄球菌的典型菌落特征;染色镜检呈革兰氏阳性葡萄球菌的特性;生化特性试验符合金黄色葡萄球菌特性;与金黄色葡萄球菌的16S rRNA基因序列同源性达99.7%,确定其为金黄色葡萄球菌;分离菌株对氨基糖苷类、β-内酰胺类、大环内脂类和喹诺酮类抗生素产生耐药性,对青霉素的抑菌圈直径为0,呈现完全耐药。说明养禽场空舍期消毒后空气中存在金黄色葡萄球菌,该菌株呈现一定的耐药性;试验结果可以为规模化种鸡场抗菌药物和消毒剂的使用提供依据。     

竹鼠源棒状杆菌分离鉴定及致病性分析

从病死竹鼠体内分离到1株细菌,通过形态学观察、生化试验鉴定、16S rDNA基因测序分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,并采用纸片扩散法进行药敏试验,PCR方法检测耐药基因和毒力基因,人工感染小鼠试验确定分离菌的致病力。病原鉴定显示,分离菌为革兰阳性杆菌,16S rDNA基因测序及BLAST比对显示其与棒状杆菌序列相似度达92.1%～99.2%,结合生理生化鉴定结果确定分离菌为棒状杆菌;药敏试验显示,该分离菌对氟苯尼考、头孢氨苄和青霉素等药物敏感,对复方新诺明、四环素和红霉素等药物表现耐药,耐药基因检测结果显示为oqxB、tetX、sul1和ermF阳性,与药敏试验表型一致;该菌对小鼠有致病性,毒力基因检测发现,分离菌携带fyuA和papA。本研究为竹鼠棒状杆菌病预防及合理用药提供依据。     

一株母猪产道致病性粪肠球菌的分离鉴定

为了确定景德镇某养殖场患子宫内膜炎母猪感染的病原菌、筛选有效的治疗药物,试验无菌采集景德镇某养殖场患子宫内膜炎母猪产道中段阴道分泌物进行分离纯化,通过生化试验、16S rDNA测序完成菌种初步鉴定,利用毒力基因检测和小鼠致病性试验验证菌株致病性,并进行药敏试验。结果表明:分离到一株优势菌株,为粪肠球菌;检测证实该菌株携带毒力基因cylA和gelE,并且对小鼠有致病性;该分离菌株分别对头孢哌酮和恩诺沙星表现为极敏和高敏,对万古霉素、氯霉素、多黏菌素B、环丙沙星等高敏,对其他抗菌药物表现为不同程度的耐药,将敏感药物应用于临床治疗效果明显。说明本试验在母猪产道内成功分离到一株致病性粪肠球菌,该细菌可能是母猪子宫内膜炎的病原菌之一,头孢哌酮和氟喹诺酮类药物可以作为治疗该养殖场母猪子宫内膜炎的首选药物。     

羊源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及毒力基因检测

为了调查内蒙古通辽市某羊场发病羊死亡的原因,对疑似致病菌进行分离、鉴定及部分生物学特性研究。对病死羊进行剖检,无菌条件下采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏等组织脏器进行细菌分离培养;对分离菌进行小鼠致病性试验、细菌生化检测、16S rDNA基因扩增及同源性比对分析和药物纸片扩散法敏感性试验。结果显示,分离菌株符合肺炎克雷伯菌生化特性;16S rDNA序列与GenBank中已登录的肺炎克雷伯杆菌序列同源性为99.59%;小鼠致病性试验结果表明分离株有较强的致死性;分离株携带多种毒力基因致病性较强。药敏试验结果表明分离株对诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、多西环素等药物高度敏感,对复方新诺明、卡那霉素等中度敏感,对庆大霉素、头孢哌酮、头孢氨苄等耐药。结果表明,分离株为肺炎克雷伯菌,是该羊场发病羊死亡的致病菌。     

鱼源蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为探究鱼源蜡样芽孢杆菌的致病性和耐药性及指导科学用药,本试验采用形态学观察、生理生化特性分析、16S rDNA基因扩增及系统进化树构建等方法鉴定分离菌,人工感染试验确定分离菌的致病性,耐药基因检测和药敏试验确定菌株耐药性。结果显示,分离菌株形成边缘不规则、不光滑的乳白色菌落,为需氧型革兰氏阳性菌。葡萄糖、硝酸盐、明胶液化等生化反应为阳性,木糖、阿拉伯糖、甘露醇等生化反应为阴性。16S rDNA基因片段长度为1 457 bp,在系统发育树中,分离菌与蜡样芽孢杆菌RTR菌株亲缘关系最近,与蜡样芽孢杆菌的同源性均达到99%以上,从而综合判定分离菌株为蜡样芽孢杆菌。人工感染试验发现,分离菌株对黄颡鱼有一定的致病性。耐药基因检测结果显示,分离菌株中检测出Sul1和Sul2两种耐药基因。药敏试验发现,该菌株对庆大霉素、哌拉西林、米诺环素等敏感,对头孢哌酮中度敏感,对青霉素、头孢曲松、氨苄西林等耐药。本试验结果为有效防控蜡样芽孢杆菌感染的疾病提供了科学参考资料。     

鱼源蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为探究鱼源蜡样芽孢杆菌的致病性和耐药性及指导科学用药,本试验采用形态学观察、生理生化特性分析、16S rDNA基因扩增及系统进化树构建等方法鉴定分离菌,人工感染试验确定分离菌的致病性,耐药基因检测和药敏试验确定菌株耐药性。结果显示,分离菌株形成边缘不规则、不光滑的乳白色菌落,为需氧型革兰氏阳性菌。葡萄糖、硝酸盐、明胶液化等生化反应为阳性,木糖、阿拉伯糖、甘露醇等生化反应为阴性。16S rDNA基因片段长度为1 457 bp,在系统发育树中,分离菌与蜡样芽孢杆菌RTR菌株亲缘关系最近,与蜡样芽孢杆菌的同源性均达到99%以上,从而综合判定分离菌株为蜡样芽孢杆菌。人工感染试验发现,分离菌株对黄颡鱼有一定的致病性。耐药基因检测结果显示,分离菌株中检测出Sul1和Sul2两种耐药基因。药敏试验发现,该菌株对庆大霉素、哌拉西林、米诺环素等敏感,对头孢哌酮中度敏感,对青霉素、头孢曲松、氨苄西林等耐药。本试验结果为有效防控蜡样芽孢杆菌感染的疾病提供了科学参考资料。     

猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定

为确定四川某猪场导致猪细菌性感染死亡的病原,本研究从送检病死猪肺脏样品中分离得到一株细菌,对该菌株进行培养特性观察、生化试验、动物致病性试验、药敏试验、16S r RNA基因的扩增及测序鉴定。结果显示其16S r RNA基因序列与肺炎克雷伯菌(Kpn)序列同源性达99%,表明该菌株为Kpn肺炎亚种;致病性试验结果显示其对小鼠具有强致病性;并且在血平板上出现α溶血现象;药敏试验结果显示分离菌株表现出多重耐药性,毒力较强,并且在培养特性上发生一定的改变。本实验为进一步研究Kpn耐药机制和致病机理奠定了基础。     

一株松鼠猴源粪肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了确定引起松鼠猴死亡的致病菌株及其耐药性情况,试验采用病原菌分离、革兰氏染色、生化试验、16S rRNA PCR扩增鉴定、致病性试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因扩增试验等方法对致病菌进行了研究。结果表明:该菌革兰氏染色阳性,马尿酸盐、V-P、6.5%Na Cl等生化反应呈阳性,阿拉伯糖、蔗糖等生化反应呈阴性;16S rRNA基因BLAST比对,与粪肠球菌相似性为100%;致病性试验显示,该菌株致病性不是很强;该菌株对苯唑西林、红霉素、复方新诺明、四环素等耐药,对青霉素G、呋喃妥因敏感,对万古霉素、米诺环素中等耐药;毒力基因hyl、asal、gelE、cylA、esp、acm和耐药基因TEM、ant(6)-I、ermB、aac(6')-aph(2″)、TetM扩增试验均为阳性。说明该菌株为粪肠球菌(Enterococcus faecalis),具有较强耐药性,但致病性不是很强,可能与毒力基因和耐药基因的高阳性率有关。     

1株山鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定

为查明秦皇岛市某山鸡养殖场山鸡大批量死亡病因,试验对分离到的致病优势菌株进行生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,并测试分离菌对21种抗生素的敏感性,进一步采用PCR方法检测分离菌的耐药基因。利用清洁级昆明小鼠和SPF鸡胚分别对分离菌进行致病性试验,并采用PCR方法检测分离菌的毒力基因。结果显示：分离菌为革兰氏阴性杆菌,在伊红美蓝培养基上生长出有金属光泽的菌落,生化特性与大肠杆菌生化特性符合率高达99%。BLAST分析发现,分离菌16S rRNA序列与大肠杆菌的基因相似性高达99.8%。分离菌对恩诺沙星和阿米卡星高度敏感,对青霉素、头孢曲松等15种药物耐药。分离菌的磺胺类、β-内酰胺类、四环素类的耐药基因与耐药表型基本相符,其余耐药基因与耐药表型不符,提示该分离菌可能存在其他的耐药机制。致病性试验结果显示,分离菌具有较强致病性,共检测到12种大肠杆菌主要毒力基因。研究表明,分离菌为山鸡源致病性大肠杆菌,且耐药情况复杂,具有较强的毒力和致病性。     

牦牛产色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】了解西藏拉萨地区牦牛源产色葡萄球菌的致病性及耐药性情况,以期为牦牛感染产色葡萄球菌的防治提供一定参考。【方法】采用细菌分离培养、生化试验鉴定、16S rDNA测序、相似性比对分析的方法对从西藏拉萨地区采集到的65份牦牛样品中的产色葡萄球菌进行鉴定,并研究其耐药性与致病性。【结果】在65份样品中共获得9株分离菌,分别命名为XZ1～XZ9,分离率为13.85%;分离菌均在5%绵羊血平板上呈淡黄色的小菌落,革兰氏染色为阳性球菌;生化试验鉴定显示,分离菌株对甘露糖、果糖、蔗糖、硝酸盐还原反应为阳性,符合产色葡萄球菌特性;经16S rDNA测序、相似性比对分析发现,9株分离菌均与产色葡萄球菌相似性最高,达96%以上;药敏试验结果显示,9株分离菌最多对3种抗菌药耐药,最少对1种抗菌药耐药;用分离菌株对SPF小鼠进行攻毒试验发现,分离菌对小鼠的致病性较强,导致小鼠肺脏及肾脏淤血、肿大,肠道发生病变,出现黄色稀便。【结论】本研究结果表明,牦牛源产色葡萄球菌在拉萨地区的牦牛中存在一定的致病性,且耐药性较强,应当引起一定的重视。