莴苣原生质体的分离方法

以莴苣无菌苗的幼叶为试材,研究了不同的分离材料、质壁分离时间、苗龄、酶液组合、酶解时间及酶液渗透压等对原生质体分离效果的影响。结果表明:幼叶在含有13%甘露醇的CPW溶液里质壁分离2h,获得的原生质体产量存活率均高于其它质壁分离时间;苗龄为20d的幼叶分离得到的原生质体质量高,原生质体呈圆形、内含物多、活力强;酶液组合为1.0%纤维素酶+0.2%离析酶,25℃黑暗条件下酶解12h可获得大量有较高活力的原生质体;酶解液中添加浓度为9%的甘露醇较适合原生质体分离。     

凤尾菇菌丝原生质体的分离与再生

本文利用一种自制的真菌细胞壁溶解酶——溶壁酶(Lywallzyme),通过酶解试验比较了菌龄、渗透压稳定剂、酶解温度及酶解时间等对凤尾菇菌丝原生质体分离的影响。通过原生质体的再生试验,系统地比较了菌龄、渗透压稳定剂和酶解时间及再生培养基对凤尾菇菌丝原生质体再生频率的影响,从而找到凤尾菇茵丝原生质体分离和再生的较适条件。在适宜的酶解条件下可分离到大量有活力的原生质体,其产量最高可达3×10~7个/me以上。本试验中,原生质体的再生频率最高为4.98％。同时,本文还对凤尾菇菌丝原生质体再生过程的形态变化作了适当描述。     

银耳菌丝原生质体分离和再生研究

以菌株Tr01为材料，研究了不同菌龄、溶壁酶浓度、酶解温度、稳渗剂对银耳工力丝在的原生质体产量及不同稳渗剂对原生质再生的影响。结果表明，原生质体分离的最佳条件为：菌丝菌龄9天，酶液浓度2％，稳渗剂0.4mol/L硫酸镁，在34℃下酶解4h，原生质体以0.4mol/L甘露醇作稳渗剂再生率较高，为1.13%。     

新疆雪莲胚性愈伤组织的诱导及原生质体分离

以新疆雪莲无菌叶片为材料,诱导其产生胚性愈伤组织,再以胚性愈伤组织为分离原生质体的起始材料,研究质壁分离时间、渗透压浓度、酶液组合、酶解时间等因素对其原生质体分离效果的影响。结果表明:对诱导胚性愈伤组织有较好效果的培养基组合为:MS+2,4-D 0.1mg/L+BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+葡萄糖30 g/L;原生质体分离最佳体系为:含纤维素酶2.5%、离析酶0.2%、果胶酶1%、MES 0.1%和甘露醇10%的酶解液,在温度(26±1)℃,pH 5.8条件下酶解14~16 h,游离原生质体的产量和活性均较高。     

大杯蕈原生质体菌株筛选的研究

对野生大杯蕈（Ｃｌｉｔｏｃｙｂｅ ｍａｘｉｍａ）原生质体的分离再生及再生菌株的构建进行研究，以纤维素酶、溶壁酶、崩溃酶、β－葡萄糖苷酸酶的去壁效果最好，而新生酶，几丁质酶，蜗牛酶的云壁效果较差。２种以上的酶液混合使用能提高去壁效果。酶解液在０．１％￣２．０％浓度范围内原生质体释放量随酶解液的浓度升高几乎呈直线上升。酶解３￣５ｈ释放的原生质体最多。酶解液ｐＨ值在５．０￣６．０范围内原生质体的产量较高     

‘富士’苹果花粉原生质体分离初探

以‘富士’苹果（Malus × domestica Borkh.‘Fuji’）成熟花粉为试材,采用“萌发—酶解二步法”,初步探讨了影响原生质体分离的关键因子,获得了花粉原生质体分离的最佳条件：用萌发后45 min的花粉,转入含1%纤维素酶和1%离析酶的混合酶液中,以18%甘露醇调节渗透压,静置酶解6 h,花粉原生质体分离效率可达6.83%,用0.1%荧光增白剂检测表明脱壁完全,用0.01% FDA检测表明其具有生活力,可以作为后续细胞融合等的材料。     

香菇原生质体工程菌株的构建研究：Ⅰ.香菇原生质体的分离与再生行为

本研究通过电镜观察与酶解分析确定香菇菌丝细胞壁组成，并进行了双核菌丝原生质体的分离和培养。酶解过程中，菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来，合适的渗透剂，菌龄和酶解温度是原生质体得率的重要保证；原生质体再生菌丝过程是一个间歇性的依赖于原生质团涌动流向的过程，再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起－哑铃状－分枝状等不同形态类型的再生阶段；再生菌丝体在形态上没有观察到锁状联合，栽培后末能结实，     

滲透压稳定剂对桑黄菌原生质体分离与再生的影响

用6种无机盐和有机糖醇作渗透压稳定剂，研究桑黄菌原生质体的分离与再生情况。结果表明，用不同的酶解渗透压稳定剂，桑黄菌原生质体的分离产量差异很大，体积形态也有差异。酶解和培养基渗透压稳定剂对桑黄菌原生质体的再生有显著影响，甘露醇为培养基渗透压稳定剂时再生率较高。     

盐胁迫对珠美海棠和山定子膜保护酶系统的影响

实验以耐盐种珠美海棠(MaluszumiMats)和盐敏感种山定子[Malusbaccata(L.)Borkh]为试材,比较研究了在盐胁迫下叶片质膜透性、叶绿素和丙二醛(MDA)含量、膜保护酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性及根质膜透性的变化,为探索苹果属植物耐盐机制提供素材。结果表明,盐胁迫对根质膜透性没有明显的影响;但导致叶片质膜透性增加,盐敏感种山定子的质膜透性高于耐盐的珠美海棠。随盐胁迫加重,叶绿素a、b含量降低,叶绿素a/b比值增加,类胡萝卜素变化不明显。MDA含量随盐胁迫而升高,但珠美海棠低于山定子。山定子叶片中SOD、POD、CAT活性随盐胁迫加重而降低,而珠美海棠SOD活性在盐胁迫下保持稳定,POD、CAT活性增高。由此可见珠美海棠在盐胁迫条件下有活性较高的膜保护酶系统。     

滑菇原生质体分离条件的研究

本文研究了渗透压稳定剂的种类与浓度、pH值、菌龄、酶解温度与时间等因素对滑菇原生质体分离效果的影响。结果表明 ,利用菌龄为 13天的菌丝和 2 0 %的溶壁酶 ,以pH值 6 0M的甘露醇作为渗稳剂 ,在 2 5℃下酶解 5小时是滑菇原生质体分离的较适宜条件。     

葡萄愈伤组织制备原生质体的影响因素研究

【目的】为了获得高质量的葡萄原生质体,【方法】以"鄞红"葡萄茎段愈伤组织为材料,对葡萄原生质体制备过程中的若干影响因子,如酶解液成分、甘露醇浓度、酶解时间、离心条件等方面进行了研究。【结果】0.5 mol.L-1的甘露醇+1%纤维素酶+0.025%～0.05%果胶酶为最佳的酶解液组成;酶解14 h、120×g离心3 min条件下原生质体数量和质量最佳。【结论】研究获得的高质量葡萄原生质体,为下一步的植株再生及葡萄品种遗传改良提供了良好的材料。     

马铃薯花粉原生质体分离的研究

以马铃薯减数分裂二分体和四分体时期的小孢子为材料，对原生质体分离的主要影响因素进行了研究。结果表明，１％蜗牛酶和０．５％崩溃酶的混合酶液游离效果最好，原生质体的最高得率达６５．４％。渗透压调解剂以蔗糖最好，甘露醇次之，最适浓度分别为１６％和１８％。０．１％荧光增白剂检测表明脱壁完全，ＦＤＡ荧光检测表明花粉原生质体具有生活力。     

NaCl胁迫对苹果属植物矿质营养吸收的影响

Na Cl胁迫对作物的危害方式主要有三种 :一是离子毒害 ,土壤中含盐量高时 ,作物吸收盐分并在体内积累造成盐害 ;二是营养胁迫 ,Na Cl使许多作物细胞内 K 、Ca2 含量下降 ,导致作物缺乏某些元素而引起生长发育障碍 ;三是渗透胁迫 ,盐胁迫使根际水势降低 ,当其接近或低于细胞水势时 ,根吸水就会受到抑制 ,甚至发生水分倒流 ,原生质体失水收缩死亡。本试验通过对八棱海棠、山定子、小金海棠、珠眉海棠在 Na Cl胁迫条件下吸收利用矿质营养特性的研究 ,以探讨 Na Cl胁迫对苹果属植物生长发育的营养生理机制。1　材料与方法1 .1　试验材料　…     

香菇原生质体工程菌株的构建研究——I.香菇原生质体的分离与再生行为

本研究通过电镜观察与酶解分析确定香菇(Lentinula edodes)菌丝细胞壁组成.并进行了双核菌丝原生质体的分离和培养.研究发现:酶解过程中,菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来.合适的渗透剂、菌龄和酶解温度是原生质体得率的重要保证;原生质体再生菌丝过程是一个间歇性的依赖于原生质团涌动流向的过程,再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起-哑铃状-分枝状等不同形态类型的再生阶段;再生菌丝体在形态上没有观察到锁状联合,栽培后未能结实,初步判断为单核菌株.     

茶薪菇原生质体制备及诱变的研究

对茶薪菇原生质体的分离及再生进行研究 ,结果表明以溶壁酶的去壁效果最好 ,不同酶组合可提高去壁效果 ,酶解液在 2 0 %时原生质体释放量很高。酶解适宜温度为 30℃ ,培养 4～ 5d的菌丝酶解 3h释放的原生质体最多。以甘露醇作为渗透压稳定剂 ,原生质体的释放量及再生率均较高 ,再生率达到 5 %左右 ,经紫外线照射 2 0s,致死率即达 70 %以上     

黄瓜幼苗子叶原生质体的分离纯化及融合条件优化研究

以黄瓜幼苗子叶为试材,采用正交实验,探讨了不同酶浓度、渗透剂浓度、酶解时间对原生质体产量和活性的影响,并研究了不同蔗糖浓度对原生质体纯化和不同PEG浓度对原生质体融合率的影响.结果表明:黄瓜幼苗子叶在含1.0％纤维素酶、0.8％果胶酶和0.3 mol/L甘露醇的混合酶液中酶解3h,获得具有活力的原生质体最高,为7.2×106个/g,原生质体活力为83.72％.蔗糖浓度为20％时纯化效果最好,得到有活力原生质体7.1×106个/g; PEG浓度为40％时融合率最高,融合率为32％.     

酶解桔皮制汁中试生产报告

前文介绍了用里氏木霉(Trichoderma reesei CDR-29)菌种产生的纤维素酶酶解桔皮,再用黑曲霉(Aspergillus niger PU-4)菌种产生的果胶酶澄清酶解液制取桔汁,实为两步酶解法。黑曲霉是国际上公认的安全菌种,是食品工业酶的     

糙皮侧耳和佛罗里达侧耳菌丝原生质体的形成与再生

本文报道了使用蜗牛酶和纤维素酶从糙皮侧耳和佛罗里达侧耳双核菌丝体中,成功地分离了高产量的原生质体。菌丝体培养时间,混合酶液 pH 值,一定浓度的酶液用量,酶解温度和时间与原生质体形成相关。原生质体的两种再生型被观察到,并计算了再生频率,糙皮侧耳为2.5%.佛罗里达侧耳为2.3%。     

微型结球白菜原生质体游离与纯化研究

以微型结球白菜无菌苗子叶为材料,探讨酶液浓度、酶解时间、酶液渗透压、离心转数对其原生质体分离效果的影响以及蔗糖浓度对纯化结果的影响。结果表明:以1.0%CellulaseR-10,0.08%Pectinase,0.4 mol/L甘露醇,酶解6 h,第1次离心转速1 200 r/min,24%蔗糖的条件组合最佳,原生质体产量为2.10×107个/g(FW),活力达91.20%。     

硫磺菌原生质体的制备

试验分析了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解温度和时间等因素对硫磺菌原生质体产出量的影响。结果表明：采用液体发酵培养第5天的菌丝体，以0．6mol／L KCl作渗透压稳定剂，加入1．5g/L混合酶（即纤维素酶与蜗牛酶按1：1混合）在30℃下酶解3．5h，制备原生质体效果最佳，原生质体产出量可达8．9×10^7个／mL。