石河子地区临床奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与药敏试验

为研究新疆石河子地区某奶牛养殖场临床奶牛乳房炎的病原菌及耐药情况,对送检的15份乳样进行病原菌的分离鉴定、形态学观察、16S rRNA基因序列对比以及药物敏感性试验.结果显示,分离到1株大肠杆菌和5株金黄色葡萄球菌.菌株16S rRNA序列比对,大肠杆菌同源性大于99.9％,金黄色葡萄球菌的同源性在97.49％～99....     

外敷药防治隐性乳房炎的临床研究

试验采用杨凌莱夫尔公司生产的“乳炎宁” 搽剂，对隐性乳房炎奶牛进行治疗试验。将年龄、胎次、分娩时间、日产奶量接近的14头患隐性乳房炎的奶牛随机分为试验组和对照组，另选7头年龄、胎次、分娩时间与以上两组接近的健康牛作为健康对照组。试验组外敷用药，每日两次，对照组和健康组不用药，其它饲养管理条件相同。一周后，进行 BMT检测隐性乳房炎情况，并采混合乳测定体细胞数和乳成分。试验结果显示：实验组奶牛乳中体细胞数显著下降67.3%，与对照组相比，差异极显著（P<0.01），药物对隐性乳房炎的有效率为 79.8%，表明“乳炎宁”对奶牛隐性乳房炎有显著疗效。     

不同药物对干奶前期奶牛隐性乳房炎的治疗效果比较

用LMT隐性乳房炎检测液检测干奶前7-14 d干奶牛，检测结果在“＋＋”及“＋＋”以上乳区分别用以下8组药物：干乳宁（对照）、乳炎肿立消、青霉素和链霉素合用、林可霉素和庆大霉素合用、恩诺沙星、庆大霉素、磺胺嘧啶钠、头孢噻呋钠经乳池灌注进行对比治疗。结果显示：头孢噻呋钠、乳炎肿立消作用迅速，防治效果明显，有效率分别为86.20%和78.57%；干乳宁、青霉素与链霉素合用、林可霉素与庆大霉素合用治疗效果较好，有效率分别为75.0%、77.78%和70.97%。     

鸡源沙门氏菌多重耐药和Ⅰ型整合子的流行调查

为了研究沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的流行情况,本研究从山东省鸡场分离沙门氏菌,根据Kauffmann-White方法测定其血清型,采用微量稀释法测定了沙门氏菌对19种常用抗菌药物的MIC值,并且采用PCR技术测定了Ⅰ型整合子及其携带的耐药基因盒。结果显示：本次分离得到311株沙门氏菌,包括印地安纳沙门氏菌（133株）和肠炎沙门氏菌（178株）2种血清型;药物敏感性试验表明：分离菌株对磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、萘啶酸、氨苄西林、四环素、多西环素和甲氧苄啶普遍耐药,菌株多重耐药率为91.0 %(283/311),99%的分离株对阿米卡星、多黏菌素敏感;PCR测定Ⅰ型整合子结果：Ⅰ型整合子的检出率为65.0%(202/311),其中多重耐药表型菌株Ⅰ型整合子阳性率为92.6%,202株整合子阳性菌株中有6株的携带基因盒dfr17-aadA5。上述结果表明,Ⅰ型整合子普遍存在于沙门氏菌中,并且与沙门氏菌的多重耐药性密切相关。     

四川地区猪场中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型与耐药性分析

为研究四川猪场分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药现状及其SCCmec基因型情况,讨论猪源MRSA对公共卫生带来的隐患。于2013年3-12月在四川地区12个规模化猪场采集的120份样品中分离金黄色葡萄球菌(SA),对PCR初步鉴定出SA,再鉴定mec A、fem A耐药基因,阳性菌株判定为MRSA。对鉴定出的猪源MRSA进行SCCmec分型与耐药性试验及分析。共分离出60株金黄色葡萄球菌,其中22株MRSA,检出率18.3%(22/120),饲养员手棉拭子、猪鼻捻子、猪场水样中均分离出MRSA。药敏试验结果表明,22株MRSA菌株的多重耐药性明显,耐药性主要表现为4、6耐,其中SCCmecⅣa型17株、SCCmecⅠ型5株。目前四川地区猪源MRSA不仅对猪场人员存在感染隐患,同时也对公共卫生安全存在一定的威胁。     

中草药治疗奶牛急性乳房炎的疗效观察

应用乳康散,以青、链霉素和公英散为对照,对150头奶牛的急性乳房炎进行临床治疗试验。结果显示:乳康散、青链霉素和公英散对奶牛急性乳房炎的治愈率分别为86.0%、72.0%和60.0%,在2个疗程(6 d)内的治愈率分别为72.0%、30.0%和44.0%。经统计学分析,试验与对照组的治愈率和疗程都存在显著差异,说明乳康散疗程短,临床疗效好。     

不同中药对奶牛乳房炎病原菌抑菌效果的观察

本试验采用琼脂平板扩散法(打孔法),研究了黄芩等21种中药对从乳房炎奶牛乳汁中分离出的3种主要致病菌的体外抑菌情况。结果发现,大肠杆菌对黄芩高度敏感,对丹参、青翘属中度敏感;金黄色葡萄球菌对黄芩、青翘、丹参、地榆、红花、蒲公英高度敏感,对枳壳、忍冬藤、萹蓄、苦地丁、蟾酥、木通中度敏感;无乳链球对地榆、当归属高度敏感,对青翘、黄芩、蒲公英、丹参、苦地丁、红花、川芎、枳壳中度敏感。为防治奶牛乳房炎有效中药复方的筛选提供了理论依据。     

牛源性无乳链球菌分离鉴定及 cfb 基因的克隆和真核表达载体的构建

为研制奶牛乳房炎无乳链球菌的基因工程疫苗,采集隐性奶牛乳房炎奶样,利用THB （ Todd-Hewitt Broth ）固体选择培养基和色素试验,并结合无乳链球菌种属特异性基因cfb,采用PCR技术从隐性乳房炎奶样中分离和鉴定无乳链球菌。根据GenBank已报道的链球菌cfb基因序列,经ORF分析和B细胞表位预测,利用Primer 5．0软件设计cfb因子富含B细胞表位区域引物,添加酶切位点和真核表达元件,以分离株无乳链球菌的基因组为模板,PCR扩增cfb基因并连接T载体克隆测序,经测序确定无误后,连接pcDNATM 3．1 V5-His A（ pcDNA-cfb）真核载体,转化DH5α感受态细胞,提取重组质粒进行酶切和测序鉴定。结果显示,从89份隐性奶牛乳房炎奶样中分离得到8株无乳链球菌,成功构建了真核表达载体（ pcDNA-cfb）。 THB和色素试验初步筛选,可以作为快速分离无乳链球菌的一种方法,利用Bcepred和Lasergene-Protean软件对分离得到的无乳链球菌cfb基因序列分析,在所克隆的cfb基因序列内有多个优势抗原表位,因此,有望作为无乳链球菌基因工程疫苗研制的抗原靶标基因序列,为进一步研究其基因工程疫苗提供基础条件。     

壳聚糖对奶牛隐性乳房炎血清蛋白质的影响

为研究壳聚糖对隐性乳房炎奶牛血清蛋白质含量的影响,选择体重、胎次、泌乳期、泌乳量相近的隐性乳房炎奶牛30头,随机分成5组,每组6头。组成对照组和试验1、2、3、4组。每天在各组奶牛的基础日粮中分别添加0g、10g、20g、40g、80g壳聚糖,连续饲喂两周,每周每头定期采集静脉血约10ml,测定血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白的含量。结果表明,试验1、2组血清总蛋白和白蛋白有升高趋势,但差异均不显著(P>0.05),而3、4组均显著升高(P<0.05),其中试验4组总蛋白差异极显著(P<0.01)。结论:壳聚糖能够提高血清总蛋白和白蛋白的含量,有利于恢复患病奶牛的血浆胶体渗透压,增强机体抗病能力,促进康复过程。其用量以40￣80g/(d·头),持续两周以上为宜。     

西门塔尔牛bLF-exon11基因多态性及其与乳房炎易感性和部分乳性状的相关分析

为了探讨西门塔尔牛乳铁蛋白基因第11外显子多态性,及其与乳房炎和部分乳性状的关系,利用PCR-SS-CP和DNA测序技术,对118头健康牛和38头感染乳房炎牛个体,进行了第11外显子的基因多态性分析。结果发现,健康牛和感染乳房炎牛个体的第11外显子基因型和基因频率分布差异均极显著(P<0.01),感染牛中AA基因型和A基因频率均极显著高于健康牛(P<0.01)。而且,AA基因型个体SCS显著高于AB和BB型个体(P<0.05),AA型个体的乳蛋白极显著高于AB型(P<0.01)、显著高于BB型(P<0.05),而BB型显著高于AB型(P<0.05)。这表明乳铁蛋白基因第11外显子的A基因,可能是一个西门塔尔牛乳房炎的易感基因。     

基于ipaH基因的志贺菌LAMP检测方法的建立及应用

为建立一种快速、特异、敏感的志贺菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法,试验针对志贺菌属侵袭性质粒抗原H基因(invasive plasmid, ipaH)设计一套特异性引物,条件优化及特异性和敏感性验证后建立了该菌的LAMP检测方法,并应用于临床样本的检测。结果显示,62℃恒温扩增1 h能得到明显的扩增产物,除志贺菌标准菌株扩增结果为阳性外,沙门菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和阴性对照均为阴性,检测限值达到120 fg/μL。利用建立的方法检测了20株疑似菌株和38份粪样样品,结果显示20株疑似菌和27份粪样样品为阳性,阳性率分别为100%和71.05%,说明建立的LAMP检测法具有良好的特异性和敏感性,在粪便等临床样本中志贺菌的检测与鉴定方面具有优势和应用前景。     

黄芩茎叶没食子酸-KGM复合保鲜膜在鸡蛋保鲜中的应用研究

为延长鸡蛋货架期，以商洛黄芩茎叶没食子酸作为研究对象制备复合保鲜膜。本研究采用超声辅助乙醇浸提法从黄芩茎叶中提取没食子酸，提取量为203.35 mg/g；对提取出的没食子酸浓缩液进行抑菌实验，研究没食子酸对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肠炎沙门菌的抑菌能力。结果表明：抑菌效果为大肠杆菌<金黄色葡萄球菌<肠炎沙门菌。在分别探讨没食子酸、魔芋葡甘聚糖、壳聚糖和柠檬酸保鲜作用的单因素试验基础上，采用响应面法，以哈夫单位为响应值对复合保鲜配方进行优化。结果表明：没食子酸1.85%、魔芋葡甘聚糖1.24%、壳聚糖1.96%、柠檬酸3%复配用以制备复合保鲜膜为最佳配比。将此配方制成的复合保鲜膜均匀涂抹在鸡蛋上，在37℃下鸡蛋可以保存15天，鸡蛋的哈夫单位可达到74.86±2.61。所制备的复合保鲜膜绿色、安全，可为鸡蛋的保鲜提供技术参考。     

锦州地区鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

由锦州地区不同类型鸡场采集疑似大肠杆菌病病料,分离出大肠杆菌15株。血清型鉴定试验确定14株的血清型,优势血清型为O15 、O35。并选择10种抗生素进行药敏试验,结果表明实验菌株耐药程度和多重耐药较为严重,耐药率在46.67%～100%,对5种以上抗生素耐药的菌株共有13株,占86.67%。     

水稻纹枯病菌对己唑醇的敏感性及抗性监测

为评估水稻纹枯病菌对己唑醇的抗性风险,采用菌丝生长速率法测定了贵州、湖北、湖南及河南7个稻区分离的101株纹枯病菌菌株对己唑醇的敏感性,建立其敏感性基线。测定结果表明,不同稻区101株水稻纹枯病菌菌株的EC₅₀值介于1.0751~2.9228 mg/L,平均EC₅₀值为1.8081 mg/L,菌株之间的EC₅₀值最大相差2.72倍。供试纹枯病菌群体对己唑醇的敏感性频率近似于正态分布(W=0.980,P=0.157>0.05),因此将其EC₅₀均值作为水稻纹枯病菌对己唑醇的敏感基线;且2016—2018年监测表明,水稻纹枯病菌对己唑醇仍敏感。该研究结果可为田间用药提供参考。     

百香果茎基腐病菌分离鉴定与药剂筛选研究

为研究百香果产业中多发病害茎基腐病的病原菌鉴定与防治问题,在广东省百香果主产区采集茎基腐病病株,结合形态学观察与分子测序方法鉴定分离病原菌菌株,并对其进行致病性检测,同时检测系列杀菌药剂对病菌生长及其致病性的影响。结果表明,通过形态特征观察、分子生物学鉴定,从百香果茎基腐病病株中分离获得的8个菌株鉴定为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)。离体和活体致病力测试结果显示,致病力较高的菌株为FP6、FP7、FP2,其次为FP1、FP3、FP8、FP4,最低为FP5。不同药剂处理对病菌的生长及致病力均产生影响,其中30%苯甲嘧菌酯处理的抑制效果为最佳。研究结果可为后续百香果茎基腐病病理学、百香果抗病育种等研究提供基础。     

产紫丁香苷内生真菌CJ7的鉴定及发酵条件研究

为高效利用刺五加内生真菌资源,推动紫丁香苷的生产,采用HPLC法,以紫丁香苷为对照,分析内生真菌CJ7的次生代谢产物;采用琼脂糖扩散法,对内生真菌CJ7进行抑菌活性分析,并采用单因素实验及正交实验法对内生真菌CJ7发酵条件进行优选;采用形态学观察及ITS序列分析法对内生真菌CJ7进行菌种鉴定。结果表明,在内生真菌CJ7发酵液中含有紫丁香苷。抑菌活性实验结果表明,内生真菌CJ7对10种致病菌均有较好的抑制作用,尤其对金黄色葡萄球菌抑菌效果较为明显。经优化,CJ7的最佳发酵工艺为培养基中葡萄糖质量浓度2.5%,牛肉膏质量浓度2.0%,初始pH 7.0,装液量40%,接种量2%,培养8天,摇床转数120 r/min,发酵温度28℃。经鉴定,内生真菌CJ7为产烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。上述研究说明,内生真菌CJ7为紫丁香苷产生菌。研究结果可为采用微生物发酵法生产紫丁香苷提供参考。     

南五味子酯乙-Nisin-KGM复合涂膜剂在鲜肉保鲜中的研究

以商洛“药食同源”植物南五味子为研究对象,对其木脂素类中的南五味子酯乙提取纯化及抑菌研究,复配Nisin、KGM、番茄红素制备复合涂膜保鲜剂,以期延长冷鲜肉贮藏期。HPLC测定响应面法优化超声辅助乙醇浸提南五味子酯乙,在超声温度68℃、料液比1:8、乙醇质量分数84%、提取时间60 min时,南五味子酯乙得率为1.426 mg/g。HPD100型大孔树脂纯化的南五味子酯乙对供试菌的抑菌顺序为甲型副伤寒沙门氏菌<大肠埃希氏菌<金黄色葡萄球菌<枯草芽孢杆菌。以pH、TVB-N值、MetMb含量为冷鲜肉主要鲜度指标,考察不同浓度南五味子酯乙、Nisin、KGM、番茄红素对冷鲜肉保鲜效果影响,正交法优化复合涂膜保鲜剂最佳配方为2.5%南五味子酯乙+0.1%Nisin+0.4%KGM+0.03%番茄红素,在4℃可贮藏冷鲜肉10天。研究结果可为南五味子酯乙在冷鲜肉贮藏和保鲜中的应用提供技术参考。     

规模化养殖场猪粪源沙门氏菌的耐药性调查

为了解新疆乌鲁木齐周边某规模化猪场猪粪源沙门氏菌对临床常用抗菌药物的耐药情况,并将耐药数据用于指导该养殖场临床合理用药,采用琼脂稀释法对550 份粪样中分离出的58 株沙门氏菌进行最小抑菌浓度测定。结果显示：沙门氏菌对四环素(100.0%)、环丙沙星(96.6%)、恩诺沙星(94.8%)、阿莫西林/克拉维酸(91.4%)、卡那霉素(89.6%)、氟苯尼考(84.5%)和氨苄西林(75.9%)7 种药物呈现高水平耐药;对阿米卡星(58.6%)、安普霉素(55.2%)、诺氟沙星(51.7%)和庆大霉素(50.0%)呈现中等水平耐药;仅对头孢噻呋(8.6%)敏感。该养殖场猪粪源沙门氏菌对临床常用抗菌药物耐药情况严重,临床应考虑联合用药、轮换用药。     

巨菌草对七彩山鸡生长、屠宰性能及H-FABP和A-FABP基因表达的影响

本试验通过在基础饲粮中添加巨菌草，探究其对七彩山鸡生长指标、屠宰性能以及心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因的影响。试验选取同批次、健康的七彩山鸡150只（4周龄），随机分为4个试验组和1个对照组，每组10只，3个重复，试验组巨菌草的添加量分别为4%、8%、12%、16%，对照组喂养基础饲粮，饲养周期为16周。结果发现，与对照组相比，添加8%的巨菌草组的平均体重差异显著提高(P<0.05)；平均日采食量有所增加，但差异不显著(P>0.05)，但各试验组的平均日增重相比较于对照组均显著提高(P<0.05)，其中以8%的巨菌草组提高效果最为显著；添加量为4%、8%、12%的巨菌草组料重比有所下降；与对照组相比，8%巨菌草组的屠宰率、半净膛率和全净膛率显著升高(P<0.05)；巨菌草组七彩山鸡胸肌率有所升高，但与对照组相比差异不显著(P>0.05)；添加量为8%的巨菌草组的腿肌率较对照组显著提高(P<0.05)。经实时荧光定量PCR测定H-FABP和A-FABP基因在添加巨菌草饲粮之后均有差异表达，其中以8%巨菌草组显著提高。因此，饲粮中添加8%的巨菌草可显著改善七彩山鸡的生长指标、屠宰性能和脂肪相关基因的表达。