绵羊精液不同处理方法对体外受精效果的影响

试验通过开展绵羊低温保存精液和冷冻精液制备精子对体外受精效果影响的研究,旨在探讨制备绵羊IVF优质精液的新方法。结果表明:利用低温保存精液和冷冻精液,分别采用Percoll离心法和上游法制备精子进行体外受精,低温保存精液上游法的卵裂率78.6%显著高于低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法和60.2%、62.3%,(P<0.05),极显著高于冷冻精液上游法21.1%,P<0.01;低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法组间无显著(P>0.05)差异,但均显著(P<0.05)高于冷冻精液上游法。低温保存绵羊精液可用于制备IVF精子,上游法优于Percoll离心法,可显著提高体外受精效果。     

利用CTC染色进行猪精子不同体外获能方法的比较

为了探讨不同方法对猪精子体外获能的影响,本试验以猪的新鲜精液为研究对象,分别经肝素上游法、钙离子载体诱导法和咖啡因诱导法进行精子不同获能时间的处理,并利用金霉素荧光染色法（chlortetracycline,CTC）对其获能效果进行检验。结果表明,采用肝素上游法孵育40 min处理后,精子的获能比例显著高于其他各处理组（P<0.05）,说明肝素上游法可以较好地诱发猪精子在体外获能。     

不同发情阶段的绵羊血清对绵羊精子获能和体外受精的影响

为比较不同发情阶段和不同浓度的绵羊血清在绵羊体外受精过程中对绵羊精子体外获能及存活时间、受精效果的影响,试验以绵羊输卵管合成液(SOF)为基础获能液,在其中分别添加发情当天、发情结束和发情间期的绵羊血清,血清浓度分别为0%、2%、5%、10%和20%.利用金霉素荧光染色(CTC,chlortetracycline)法及体外受精2种方法检测不同血清及其浓度对绵羊精子获能的影响.结果表明:1)当在获能液中添加发情当天绵羊血清时,在10%和20%血清浓度下作用45 min的获能效果最好,其获能而且未完成顶体反应的精子率(45.28%和44.52%)显著高于0%、2%和5%血清浓度组(30.14%、28.71%和35.49%,P<0.05);2)当在获能液中添加发情结束时或发情间期的绵羊血清时,在含不同浓度的这2种血清的获能液中作用45 min后,各浓度组引起的获能精子百分率变化均不显著(P>0.05);3)在含20%发情当天绵羊血清的获能液中,精子的存活时间(18 h)显著高于含20%发情结束和发情间期的绵羊血清的获能液(11 h;11 h);4)在不同血清诱导获能后进行的体外受精的试验中,添加发情当天绵羊血清组的卵裂率和囊胚率(62.5%和26.25%)均显著高于发情结束时血清组(42.22%和11.11%,P<0.05)和发情间期血清组(37.36%和15.38%,P<005).以上结果表明:在进行绵羊体外受精试验中,采用20%发情当天绵羊血清作用45 min比采用发情结束和发情间期的绵羊血清能更好地诱导精子获能.     

波尔山羊精子体外获能和体外受精研究

肝素和钙离子载体在多种动物身上被证实对精子的体外获能有很好的诱导作用.试验着重研究肝素、钙离子载体对波尔山羊精子体外获能体系的适用性,从而寻找一套适合波尔山羊精子体外获能的培养体系,并对波尔山羊体外受精进行简单的探讨.     

培养液中不同浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响

采用上游法分离优化精子,以mTyrod's液作为基础培养液检测培养液中不同质量浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响,试验设4个肝素质量浓度:0,10,20,50 μg/mL,38.5℃、5%C02培养箱进行孵育,获能培养时间为6h.利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率,观测法检测精子活力...     

不同处理方法对牛卵母细胞体外受精效果的影响

在牛体外受精(IVF)过程中,比较不同浓度的牛卵泡液对其卵母细胞的成熟效果,并将成熟的卵母细胞与不同方法获能的精子进行受精,分析其卵丘细胞在受精前后的脱除对卵裂率及囊胚率的影响。结果表明:添加10%的牛卵泡液(BFF)对卵母细胞的成熟有显著的提高作用(P0.05);卵丘细胞在受精后的脱除效果显著优于受精前的脱除(P0.05);上游法和离心法的精子获能方式对IVF没有显著差异,但离心法略优于上游法。     

发情羊血清、肝素和BSA对绵羊冷冻-解冻精子体外获能的影响

分析了在受精液SOF中添加发情绵羊血清、肝素和牛血清白蛋白(BSA)对绵羊冷冻-解冻精液体外获能和受精的影响。结果表明:(1)使用含发情羊血清浓度为0、5%、10%和20%的受精液,分裂率分别是0、73.79%、73.25%和77.61%。加发情羊血清的3个试验组分裂率差异不显著。而未加血清的试验组分裂率为0,证明发情羊血清促进了绵羊冷冻-解冻精液的体外受精效果。(2)以含5%发情羊血清受精液为基础液,添加0IU/mL、5IU/mL和10IU/mL的肝素,受精后分裂率分别达86.64%、86.63%和75.53%。不加肝素组和5IU/mL肝素组分裂率差异不显著,而10IU/mL高浓度肝素组同其他两组比较,差异极显著(p<0.01)。说明含10IU/mL肝素的受精液,降低了绵羊体外受精后的分裂率。(3)用含5%发情羊血清受精液为基础液,以添加3mg/mLBSA为试验组,不加BSA为对照组,受精后两组分裂率差异不显著。发情绵羊的血清促进绵羊冷冻-解冻精子的体外受精效果。在受精液中添加发情绵羊血清进行绵羊冷冻解冻精子的体外受精,无需添加肝素和BSA。而且添加10IU/ml肝素,降低了受精后的分裂率。建议受精液中添加发情绵羊血清浓度在2%～10%较合适。     

家兔卵子体外受精研究

从供体母兔输卵管冲取成熟的卵母细胞,与体外获能的附睾精子或射出精子体外受精。三种获能方法分别是 His-DM 法、肝素法和附睾精子 DM 预培养法,获能精子与卵母细胞体外受精后的2-细胞胚胎发育率分别是36.37%(24/66)、12.57%(13/102)和35.33%(53/150)。体外受精后体外发育到2-至4-细胞期胚胎经移植给7只同期发情受体母兔,结果有2头怀孕并产仔9只,胚移产仔率为28.57%(2/7),移入胚胎成仔率为11.39%(9/79)。     

β-谷甾醇、淫羊藿苷对猪精子体外获能效果的影响

探讨中药单体成分β-谷甾醇(β-sitosterol)、淫羊藿苷(Icariin,Ica)对猪精子体外获能的影响,以期提高体外受精效果.以mTBM+肝素获能液为对照组,分别添加β-谷甾醇、淫羊藿苷的低、中、高3个剂量为试验组,利用金霉素荧光染色(chlortetracycline,CTC)法结合体外受精检验体外获能效果.在mTBM+肝素中添加β-谷甾醇2(中剂量0.08 mg/L)、淫羊藿苷2(中剂量17 mg/L)的B型精子率(获能精子)显著高于对照组和其他剂量组(P＜0.05),F型精子率(未获能精子)显著低于对照组和其他剂量组(P＜0.05),AR型精子率(发生顶体反应精子)与对照组和其他剂量组差异不显著(P0.05),卵裂率和囊胚率均极显著高于对照组和其他剂量组(P＜0.01);表明中药单体成分β-谷甾醇、淫羊藿苷能够显著促进猪精子体外获能效果.     

绵羊精子在不同动物生殖道内获能效果的比较

体外获能是哺乳动物体外受精体系中很重要的一步,获能处理的好坏直接关系着受精的成功与否.目前,绵羊体外受精效果与牛相比尚有较大差距,虽然原因是多方面的,但绵羊精子体外获能效果不十分理想是一个重要方面.因此,试验拟从精子获能的角度来探寻绵羊受精效果不理想的原因.     

牛卵母细胞体外受精技术研究

本研究从3方面进行了牛卵母细胞的体外受精试验,即用不同离心法、不同温度上浮法、不同精子浓度等方法对COCs进行体外受精,测定其体外受精率。结果表明,两种离心法中,以上清液二次离心法的精子获能效果最好,受精率最高,该法首次采用低速离心技术,突破了离心法的传统方法,离心效果明显提高;不同温度条件下的精子上浮效果以CO2培养箱恒温（38.5℃）上浮法最好,受精率最高;对于选择受精时获能精子的浓度,宜控制在1.0×106～1.5×106个/ml,不仅能提高受精率,还可避免或降低多精受精现象。     

哺乳动物精子获能机理及体外研究

精子获能是哺乳动物精卵融合之前必须经历的一个阶段。自发现精子获能现象以来,对精子获能机制的研究已取得一些进展,但仍有不少问题需要进一步研究。精子获能为体外受精研究获得突破性进展,为人类直接观察受精过程和研究受精机理奠定了基础。文章主要对精子获能的变化、机制及体外研究进行了综述。     

牛成熟卵母细胞体外受精的研究进展

这篇论文论述了牛成熟卵母细胞体外受精的研究进展,主要从精子的制备方法,获能液的组成、精子获能的判定、受精方,法以及卵母细胞受精与否的评定5个方面加以阐述,并展望了体外受精的研究方向。     

牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术

文章从卵母细胞的来源、精子体外获能、卵母细胞体外成熟、体外受精和体外受精早期胚胎培养五个方面综述了牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展.同时指出了影响精子体外获能的因素、影响卵母细胞成熟培养的因素、体外受精存在的问题及解决办法等.并且对影响该技术的主要因素进行了系统分析.     

BSA在精子获能中的作用及其替代物研究进展

摘　要:精子获能(Capacitation)是受精过程能否完成的一个关键因素,是生殖机理研究和体外受精(IVF)技术研究中的一个重要方面,但精子获能的机理仍然不甚明确。精子获能孵育液和促获能物质的研究是研究精子获能的基础,牛血清白蛋白(BSA)是经典的精子获能液中不可或缺的添加物,具有促使大多数哺乳动物精子获能、防止精子质膜之间发生黏连等作用。但由于BSA 是生物制剂,化学成分不确定并且作用复杂,给试验研究带来不便。因此,成分和功能相对确定的替代物被研究,像聚乙烯醇(PVA),环化糊精(Cyclodextrin)和合成蛋白等。这方面的研究仍处于起步阶段,有必要继续进行。     

Premature capacitation of frozen-thawed spermatozoa from subfertile Japanese black cattle

Artificial insemination (AI) subfertility is an indication of failure of AI with frozen-thawed sperm classified as normal by conventional semen examination. Recently, 8 AI-subfertile Japanese Black cattle (S1-S8) were identified using the routine AI test or in vivo fertilization test, which included AI with frozen-thawed sperm of superovulated females and subsequent non-surgical recovery of presumptive zygotes. In the present study, we assessed capacitation states and in vitro oocyte penetration of frozen-thawed sperm from these bulls to estimate causal factors of AI subfertility. Frozen-thawed sperm from 8 AI-subfertile (S1-S8) and 9 fertile (F1-F9, control) bulls were washed and then used for a chlortetracycline (CTC) staining assay and in vitro fertilization test. The CTC staining assay revealed that approximately 50% of the sperm from 4 of the AI-subfertile bulls (S5-S8) were prematurely progressing into the capacitation state immediately after washing and resuspension in a CaCl(2)-lacking medium. In contrast, most of the sperm from the fertile bulls and other AI-subfertile bulls (S1-S4) remained uncapacitated. Addition of CaCl(2) to the medium effectively promoted a spontaneous acrosome reaction in the sperm samples from the AI-subfertile bulls (S5-S8). Moreover, the in vitro fertilization test showed that rates of sperm penetration into oocytes were significantly lower in sperm samples from the AI-subfertile bulls (S5-S8) than in the control sperm samples from the fertile bulls (F2-F4 and F7-F9). It has previously been suggested that prematurely capacitated sperm undergo a spontaneous acrosome reaction possibly due to uncontrolled influx of calcium ion, and consequently they possess relatively lower in vitro fertilizing ability. It is therefore possible that premature capacitation of sperm used for AI is a causal factor of subfertility of male Japanese Black cattle and a potentially good marker for identification of subfertile bulls for removal from AI programs.     

多种因素对小鼠卵母细胞体外受精效果影响的分析

为了探讨不同精子获能时间,精卵孵育时间,精子密度以及颗粒细胞对小鼠卵母细胞体外受精的影响,从而达到对卵母细胞体外受精体系优化的目的。比较了精子获能时间分别为40 min、60 min、80 min试验组的受精卵卵裂率。结果表明,带颗粒细胞卵母细胞(COCs)在三个试验组中卵裂率无显著差异,不带颗粒细胞卵母细胞(NO)在精子获能时间为60 min时卵裂率最高;比较了精卵孵育时间分别为2 h、4 h、6 h、8 h试验组的受精卵卵裂率,结果显示COCs精卵孵育时间2 h试验组的效果最好,NO孵育时间为6 h试验组的效果最好;比较了精子密度分别为3×10⁵/mL,3×10⁶/mL,3×10⁷/mL试验组受精卵卵裂率,结果显示COCs和NO均为3×10⁶/mL试验组卵裂效果最好;比较COCs和NO的受精卵卵裂率,结果显示COCs与NO之间存在显著差异(P<0.05),裸卵卵裂效果显著优于颗粒细胞卵裂效果。试验结果表明,在卵母细胞体外受精过程中,精子获能时间60 min,精子密度为3×10⁶/mL,精卵孵育6 h,培养24 h后卵裂率最高。     

牛卵母细胞体外受精和培养技术

本文综述了牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展,包括精子的体外获能、卵母细胞成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等,并且对影响该技术的主要原因进行了分析。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展，包括卵丘卵母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟，以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法，无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展，卵母细胞体外成熟状态与标志的某些理论上的突破；体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择、冷冻解冻精液的体外获能、精子的体外受精力，以及体外的异常受精；还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种和胚胎克隆等方面的应用前景     

不同培养液对蓝狐精子体外获能效果的比较试验

采用上游法分离优化精子,用mTyrod’s液(T)、BO液(B)以及高渗液(HIS)3种不同培养液,在5%CO2的培养箱中进行获能培养,获能培养时间为6h。利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率以及观测法检测精子活力。在培养的0、1、2、4、6h时分别检测上述指标并统计分析,从而筛选出适合蓝狐精子体外获能的培养液。结果显示:B培养液优于T、HIS培养液,最佳获能培养时间t≥6h;HIS可以提高精子顶体反应率,但较高的渗透压不利于精子保存,不建议使用。