产抗菌素2,4-二乙酰基藤黄酚假单胞杆菌的分离及其防治沙打旺根腐病的室内测定

从山东、内蒙古、北京等地土壤中分离筛选出荧光菌 50 0 0余株 ,其中 1 2 0 0余株为抑制性荧光菌。经PCR检测 ,获得 73株 2 ,4 二乙酰基藤黄酚 (2 ,4 DAPG)产生菌。平板筛选结果表明 ,2 ,4 DAPG产生菌CPF 1 0和 2P8对沙打旺根腐病菌Sad1和Sad2均有较好的抑制效果 ,其中CPF 1 0的抑菌带宽分别为 5.0和 1 2 .0mm ;2P8抑菌带宽分别为 3 .5和 7.0mm。温室试验两次调查表明 ,CPF 1 0对沙打旺根腐病防治效果最好 ,达 63 .5%和 67.8% ;2P8防效也在 40 %左右 ,且均达到极显著水平。 2 ,4 DAPG产生菌可以显著促进沙打旺植株根系发育 ,CPF 1 0处理后地上部株高差异不显著 ,但鲜重和干重与对照相比有极显著的增加 ,说明两菌株菌剂处理可以促进植株生长。根部定殖结果表明 ,两菌株在沙打旺根部都有一定的定殖能力 ,在根表种群数量比较稳定 ,根内细菌数量在调查时间内呈逐渐上升的趋势     

功能型复合微生物菌剂防治黄瓜根结线虫的研究

根结线虫是一类重要的土传性病原物,对露地和温室蔬菜造成严重的经济损失。本研究通过平板亲和性试验,构建出一组(淡紫拟青霉、红灰链霉菌和苍白杆菌各1株)生物兼容性好、作用方式互补的功能型复合微生物菌群;以各功能菌株发酵菌体为活性成分,研制出一种防治黄瓜根结线虫的功能型复合微生物菌剂;对该复合菌剂对黄瓜根结线虫的防效及植株生物量和产量的影响进行了评价,大田试验结果表明,施用该复合菌剂的土壤线虫扩繁指数最低;移栽后38和105 d,该复合菌剂处理的根结级数分别为2.0和4.6,对病害防效为56.5%和42.5%,效果优于10%噻唑膦处理;施用该复合菌剂可以促进植株生长、增加黄瓜产量。本研究为蔬菜根结线虫病的生物防治提供了新思路。     

高岭土、壳聚糖和几丁质作为Fo47菌剂填料的研究

从对菌体的保护作用、菌剂在土壤中的活菌量变化以及菌剂对西瓜枯萎病的防治效果与对西瓜幼苗的促生效果测定3个方面,研究高岭土、壳聚糖和几丁质作为生防菌非致病尖镰孢Fusarium oxysporum Fo47菌剂填料的可能性。结果表明,3种填料对生防菌Fo47具有一定的抗紫外线辐射作用和良好的热保护作用。在4℃条件下储存半年,各处理的活菌量是对照的100倍以上。在土壤中,3种填料对菌体均有良好的保护作用和一定的释放效果,其中壳聚糖和几丁质处理在施用60d内可增加土壤中菌体含量,说明其与菌体之间有良好的兼容性。3种菌剂对西瓜苗期枯萎病的防效分别为42.31%、65.39%和57.68%,均高于单纯Fo47菌体的防效;同时对西瓜幼苗均具有不同程度的促进生长发育的作用;其中,壳聚糖处理的菌剂防效与恶霉灵相当,其促生作用最好。表明高岭土、壳聚糖和几丁质作为生防菌Fo47菌剂的填料具有一定的应用前景。     

植物有机质处理土壤防治黄瓜根结线虫病

用12种植物有机质处理土壤,在盆栽和田间小区试验条件下研究了它们对黄瓜根结线虫病的防治效果及其对黄瓜植株生长的影响。盆栽试验结果表明:蓖麻叶、麦糠、楝叶和花生饼粕对黄瓜根结线虫病防治效果较好,分别达到70.44％、68.17％、56.09％、54.92％;田间小区的试验结果与盆栽试验结果基本一致,防效较好的有麦糠、楝叶、蓖麻叶和菜籽饼粕4个处理,防效分别达到71.55％、69.99％、63.14％和62.19％。通过分析应用不同植物有机质处理地土壤对黄瓜植株的地上部鲜重、地下部鲜重以及株高的影响,发现麦糠、楝叶、松树锯末和菜籽饼粕对黄瓜的生长表现出明显的促生作用,其中麦糠的促生作用更为明显。     

植物内生细菌固体菌剂对辣椒的促生和防病作用

为了获得应用性强的植物内生细菌接菌剂,选用卡拉胶、聚乙烯醇-海藻酸钠(PVA-SA)、草炭和米糠4种载体分别配制了内生细菌菌株XG32、DLJ1和DP24的12种固体菌剂,分别采用利福平标记法和盆栽试验研究了菌剂中内生细菌在辣椒体内的定殖能力和菌剂的促生防病效果。结果表明:卡拉胶和草炭比较适合用作菌剂载体,经卡拉胶包埋和草炭吸附的菌体数量可达108CFU/g,保存12个月后活菌数均在106CFU/g以上;制成菌剂后不影响内生细菌在植物体内定殖和促生作用;菌剂的促生试验中处理组与对照组相比,株高、根长、鲜重和干重均差异显著,其中干重增加率为109.03%～140.63%;制成的固体菌剂对辣椒疫霉病的防治效果显著,为75.0%～84.2%。     

抱茎苦荬内生细菌的分离及其抑菌活性研究

为明确药用植物抱茎苦荬不同部位内生细菌分布及其在植物病害生物防治中的应用价值,采用组织分离法对抱茎苦荬不同部位内生细菌进行了分离.用平板对峙法筛选出具有抑菌活性的菌株,并用生长速率法测定了其代谢物的抑菌活性.结果表明,从抱茎苦荬不同部位共分离到24株内生细菌.其中,15株具有一定的抑菌活性,占分离总数的62.5％; 15株中有3株对梨黑斑病病菌、番茄早疫病病菌和番茄灰霉病病菌有较强的抑菌活性,其抑制率为84.2％～92.9％:3株内生细菌代谢物对6种植物病原真菌抑菌活性为8.1％～91.0％,经121℃高温处理后其抑菌活性在0～22.3％之间,表明其3株内生细菌具有较强的抑菌效果.     

整合微生物组菌剂对番茄种子萌发和幼苗生长的影响及其对青枯病的防治效果

整合微生物组菌剂是利用微生物发酵床作为发酵槽，通过二次好氧发酵生产含有多个功能微生物组的一种新型土壤连作障碍修复剂。本研究采用室内培养皿法，研究整合微生物组菌剂不同浸提液体浓度对番茄种子萌发的影响，结果表明，整合微生物组菌剂浸提液的100倍稀释液处理的番茄种子发芽指数（36.75）和种子活力指数（106.07）均显著高于无菌水对照（发芽指数33.98，种子活力指数65.26）；整合微生物组菌剂浸提液的稀释倍数低于50倍会抑制番茄种子萌发，其发芽率、发芽指数和种子活力指数均显著低于无菌水对照。通过盆栽试验，研究不同添加量整合微生物组菌剂对番茄植株生长及青枯病害的防治效果，结果表明，低浓度整合微生物组菌剂（添加量为小于60%）会促进番茄植株生长，而高浓度整合生物组菌剂（添加量大于80%）抑制番茄植株生长；添加量为40%，其促长效果最好，植株的株高、茎粗和根长分别比对照增加13.77%、26.00%和79.51%，其根系活力31.15 μg/（g·h），也显著高于对照组24.72 μg/（g·h）；整合微生物组菌剂对番茄青枯病的防治效果随添加量增大而增加，添加量大等于40%，其对番茄青枯病的防治效果均大于65%，添加量为100%的防治效果最好，为77.37%。综合促长效果、青枯病的防治效果及成本，建议整合微生物组菌剂使用剂量为添加量40%。     

蛇床子提取物对茄子根际土壤中黄萎菌数量及植株抗病性的影响

本试验以茄子根际土壤黄萎菌为作用对象,采用浓度为2、4、8、10 mg/mL的蛇床子提取物,通过田间灌施,配合伤根接菌的方法处理茄子幼苗,探讨蛇床子提取物对根际土壤黄萎菌抑制作用及其对植株抗病性的影响.结果表明,不同浓度蛇床子提取物均可抑制茄子黄萎病的发生,其中浓度为8 mg/mL效果最为显著.与清水对照相比,根际土壤中的黄萎菌数量减少了56.67％～69.23％;茄子植株的发病率和病情指数分别减少了53.12％～54.98％、51.26％～56.82％;生长指标的增幅分别为:株高3.68％～9.59％、茎粗3.41％～9.98％、地上部鲜重4.43％～9.47％、根鲜重2.61％～9.57％、叶面积3.56％～9.55％;防御酶活性也有所增加,增幅分别为:过氧化物酶(POD)45.60％～64.23％、多酚氧化酶(PPO)108.62％～255.00％、苯丙氨酸解氨酶(PAL)62.32％～76.04％.上述结果表明,蛇床子提取物会抑制茄子黄萎病的发生,增加植株的抗病性,促进植株生长.     

娄彻氏链霉菌XL-6的抑菌活性及对茄子幼苗的防病促生效应

本文研究了娄彻氏链霉菌Streptomyces rochei XL-6无菌发酵液在自然状态下的抑菌活性及对茄子幼苗的防病促生效果。结果表明,菌株XL-6发酵液的抑菌活性物质可耐70℃高温,在pH 5~8其抑菌活性保持稳定;该抑菌活性物质不受紫外线、蛋白酶K和胰蛋白酶的影响,在4℃条件下贮藏28 d仍可保持良好的抑菌活性。采用不同浓度的发酵液处理茄子幼苗均可提高茄苗对青枯病的抗性,其中,施用40倍发酵液显著降低茄子青枯病发病率和病情指数并显著提高PAL和PPO酶活性,对盆栽茄子的防治效果达64.78%。同时,40倍发酵液显著提高茄子种子发芽率、鲜重、叶绿素含量及根系活力,较病原菌菌体处理和无菌水处理,茄苗干重增幅分别达15.81%和27.95%,对茄苗的促生效果显著。说明适宜浓度的拮抗菌XL-6发酵液兼具防治茄子青枯病和促进植株生长的效果。     

三唑酮和苯醚甲环唑种子处理对小麦安全性和产量的影响研究

2011-2012年,通过大田小区试验研究比较了三唑酮3%悬浮种衣剂和苯醚甲环唑3%悬浮种衣剂包衣处理后的小麦出苗率、生长情况(株高和鲜重)、对白粉病的防治效果和小麦产量。试验结果表明,无论从小麦出苗率、株高还是植株鲜重等因素来看,小麦都对三唑酮表现出更高的敏感性,在药种比1∶25时,小麦出苗率只有48.76%,药害明显;苯醚甲环唑则相对安全。从小麦株高鲜重分析,三唑酮3%悬浮种衣剂在药种比为1∶600、1∶400和1∶200时的株高和鲜重与对照相比都有增加,说明在适当的用药量条件下,三唑酮对小麦株高和鲜重有促进作用;苯醚甲环唑3%悬浮剂在药种比为1∶600、1∶400、1∶200、1∶100和1∶50时株高和鲜重与对照相比也有稳定增加,但不如三唑酮明显。从结果可以初步推断,适量的包衣处理在对出苗率影响不大的基础上,可以增加小麦的株高和鲜重。三唑酮3%悬浮剂和苯醚甲环唑3%悬浮剂种子包衣对小麦后期的白粉病均有一定的防治效果,防效均>52.3%。三唑酮和苯醚甲环唑在试验剂量范围内大部分处理都对小麦亩产量表现出一定的增产作用,苯醚甲环唑增产效果更为显著。     

Influence of plant species on disease suppression by Pseudomonas fluorescens strain CHAO with enhanced antibiotic production

Introduction of the recombinant cosmid pME3090 into Pseudomonas fluorescens strain CHAO, a good biocontrol agent of various diseases caused by soilborne pathogens, increased three- to five-fold the production of the antibiotic metabolites pyoluteorin (Pit) and 2,4-diacetylphlorogIucinol (Phi) in vitro. Strain CHAO/pME3090 also overproduced Pit and Phi in the rhizosphere of wheat infected or not infected with Pythium ultimum. The biocontrol activity of the wild-type and recombinant Straitis was compared using various plant pathogen-host combinations in a gnotobiotic system. Antibiotic overproduction affected neither the protection of wheat against P. ultimum and Gaeumannomyces graminis var. tritici nor the growth of wheat plants. In contrast, strain CHA0/pME3090 showed an increased capacity to protect cucumber against Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum and Phomopsis sclerotioides , compared with the wild-type strain CHAO, The antibiotic overproducing strain protected tobacco roots significantly better against Thielaviopsis basicola than the wild-type strain but drastically reduced the growth of tobacco plants and was also toxic to the growth of sweet com. On King's B agar and on malt agar, the recombinant strain CHA0/pME3090 inhibited all pathogens more than did the parental strain CHAO. Synthetic Pit and Phi were toxic to all fungi tested. Tobacco and sweet com were more sensitive to synthetic Pit and Phi than were cucumber and wheat. There was no correlation between the sensitivity of the pathogens to the synthetic antibiotics and the degree of disease suppression by strain CHAO pME3090. However, there was a correlation between the sensitivity of the plants and the toxicity of the recombinant strain. We conclude that the plant species rather than the pathogen determines whether cosmid pME3090 in P. fluorescens strain CHAO leads to improved disease suppression.     

戊唑醇种子处理防治小麦纹枯病

种子处理是控制小麦纹枯病的有效措施,在小麦纹枯病的综合治理技术体系中起着举足轻重的作用。在苏南宜兴和淮北徐州,2％戊唑醇湿拌剂和6％戊唑醇悬剂胺10kg麦种拌药0.3-0.4g有效成分,对小麦的出苗没有显著影响,对根系和冬前分蘖具有促进作用。对小麦纹枯病的控制效果较为理想,表现为冬前效果显著,病析率防效60％－100％,从而有效地抑制了冬前发病高峰。戊唑醇处理区拔节期的病情指仍然极显著地低于对照区,亦显著低于对照药剂纹霉净,侵茎高峰明显推迟,最终的枯白穗防效突出,0.3-0.4g ai/10kg种子拌种的枯白穗防效达到85％以上。由于控病和对小麦生长调控的双重作用,保穗、保产效果明显,最终产量较对照增加10％－15％。     

产植物激素拮抗细菌CX-5-2的筛选、鉴定及其特性研究

 利用高效液相色谱筛选到能够同时产生IAA和GA₃的细菌菌株1株,产GA₃的细菌菌株2株。生测结果显示,菌株CX-5-2对小麦的促生长作用最明显,10倍稀释发酵液处理比清水对照处理可使麦苗高度增加10.54%。利用反相高效液相色谱法明确了菌株CX-5-2在不同培养条件下产生GA₃和IAA的积累情况;通过细菌16S rDNA的保守序列鉴定,菌株CX-5-2为假单胞菌属。本研究表明利用高效液相色谱可快速高效地筛选产激素类植物促生菌。     

小麦全蚀病生防细菌的筛选和鉴定

为获得对小麦全蚀病菌有良好拮抗效果的生防菌株,分别从河南省商丘市及驻马店市小麦全蚀病发生田块中采集小麦根际土样,采用稀释平板涂布法共分离到1051株细菌,通过与全蚀病菌G1037菌株进行平板对峙筛选,最终获得9株具有明显拮抗效果且生长状况良好的菌株。16S rDNA序列比对及生理生化性状分析结果表明：菌株P155、P154、P16及P147为荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens,菌株P188和P97为恶臭假单胞菌Pseudomonas putida,菌株LY3为产酶溶杆菌Lysobacter enzymogenes,菌株S38为嗜根寡养单胞菌Stenotrophomonas rhizophila,菌株B20为洋葱伯克霍尔德Burkholderia cepacia。产抗生素相关基因的检测结果发现,菌株P147含吩嗪和硝吡咯菌素合成基因,菌株B20含硝吡咯菌素合成基因。除B20、LY3、S38和P147外,其余菌株均可产生嗜铁素。9株细菌都产蛋白酶。除P97、B20和S38外,其余菌株均可产脂肽类物质。盆栽试验结果表明,9株生防菌对小麦全蚀病都具有较好的防治效果,菌株P155和P154的防治效果最好,相对防效分别为67.11%和63.82%,略高于3%的苯醚甲环唑种衣剂的防治效果。研究结果表明这些细菌具有作为小麦全蚀病生防菌的潜力。     

小麦茎基腐病生防菌株YB-161的分离鉴定及防效测定

为筛选防治小麦茎基腐病的高效生防菌株,采用稀释涂布法从小麦茎基腐病病土中分离细菌,以假禾谷镰孢Fusarium pseudograminearum为靶标菌,通过平板对峙培养法和室内盆栽试验筛选优良菌株并测定其田间防治效果,分析优良菌株发酵滤液对假禾谷镰孢的抑菌能力,并结合形态特征、Biolog微生物自动鉴定系统和gyrA序列分析对其进行种类鉴定,以及测定该菌株的抑菌谱。结果表明,10份供试土样中共分离到98株细菌,对假禾谷镰孢的菌丝生长抑制率超过40.00%的菌株有14株,其中菌株YB-161对假禾谷镰孢的菌丝生长抑制率最高,达63.50%。室内盆栽试验结果显示,菌株YB-161处理小麦的病情指数最低,为31.40,对小麦茎基腐病的防治效果最好,为68.15%,其对小麦也表现出较好的促生作用。田间调查结果显示,菌株YB-161菌液拌种处理对小麦茎基腐病的田间防治效果高于52.35%,并对小麦具有一定的增产作用。菌株YB-161的发酵滤液5倍稀释液和10倍稀释液对假禾谷镰孢的菌落抑制率分别达66.67%和44.33%,该菌株被鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。此外,菌株YB-161对辣椒炭疽病菌Colletotrichum capisci、烟草疫霉病菌Phytophthora parasitica等5种植物病原真菌均有较好的拮抗作用。表明生防菌株YB-161对绿色防控小麦茎基腐病具有良好的开发利用潜能。     

小麦全蚀病菌拮抗细菌的筛选及生防效果

为筛选小麦全蚀病菌Gaeumannomyces tritici的拮抗细菌,从健康小麦根际土壤中分离和筛选拮抗细菌,采用对峙培养法和室内盆栽试验测定拮抗细菌对小麦全蚀病菌的抑制活性及生防效果,通过形态学特征观察、生理生化特性测定和保守序列分析确定其分类地位。结果表明,从小麦根际土壤中分离并筛选获得2株具有较好拮抗效果的菌株XJ-3和XJ-4,对小麦全蚀病菌菌丝生长的抑制率分别为64.31%和65.25%。基于菌株XJ-3和XJ-4的形态学特征、生理生化特性和gyrB基因系统进化分析结果,将其均鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。菌株XJ-3和XJ-4的发酵液中均含有一类具抗真菌活性、耐热性的非蛋白类次生代谢产物;经菌株XJ-3和XJ-4发酵液处理小麦幼苗后,株高较对照分别显著增加了6.48%和13.12%,干重较对照分别增加了1.30%和14.29%,其中菌株XJ-4的促生效果相对较好;对小麦全蚀病的盆栽防效分别达到51.29%和52.46%。表明筛选得到的贝莱斯芽胞杆菌XJ-3和XJ-4可用于小麦全蚀病的生物防治,具有开发为生防制剂的潜力。     

Biological control of fusarium seedling blight disease of wheat and barley

ABSTRACT Fusarium fungi, including F. culmorum, cause seedling blight, foot rot, and head blight diseases of cereals, resulting in yield loss. In a screen for potential disease control organisms and agents, Pseudomonas fluorescens strains MKB 100 and MKB 249, P. frederiksbergensis strain 202, Pseudomonas sp. strain MKB 158, and chitosan all significantly reduced the extent of both wheat coleoptile growth retardation and wheat and barley seedling blight caused by F. culmorum (by 53 to 91%). Trichodiene synthase is a Fusarium enzyme necessary for trichothecene mycotoxin biosynthesis; expression of the gene encoding this enzyme in wheat was 33% lower in stem base tissue coinoculated with Pseudomonas sp. strain MKB 158 and F. culmorum than in wheat treated with bacterial culture medium and F. culmorum. When wheat and barley were grown in soil amended with either chitosan, P. fluorescens strain MKB 249, Pseudomonas sp. strain MKB 158, or culture filtrates of these bacteria, the level of disease symptoms on F. culmorum-inoculated stem base tissue (at 12 days post- F. culmorum inoculation) was >/=31% less than the level on F. culmorum-inoculated plants grown in culture medium-amended soil. It seems likely that at least part of the biocontrol activity of these bacteria and chitosan may be due to the induction of systemic disease resistance in host plants. Also, in coinoculation studies, Pseudomonas sp. strain MKB 158 induced the expression of a wheat class III plant peroxidase gene (a pathogenesis-related gene).     

小麦纹枯病拮抗细菌的筛选

 从小麦纹枯病病田土壤中分离到722株细菌,通过对峙培养法筛选出拮抗细菌397株,拮抗菌率为55.0%。细菌对小麦纹枯病病原菌的拮抗作用分为两种类型:其一以竞争作用为主,表现为菌株生长快,抑菌率高但抑菌带较窄,如菌株BNT-25抑菌效果可达100.0%,抑菌带仅为2 mm;其二为抗生物质的产生,表现为菌株生长慢,菌落小,抑菌率高且抑菌带宽,如JJ-5菌株抑菌效果可达94.3%,抑菌带为12 mm。选用18株抑菌作用良好的拮抗细菌在室内测定其防治小麦苗期纹枯病的效果。结果发现,与空白对照相比,有9株拮抗细菌的防治效果达到了极显著水平,有15株拮抗细菌的防治效果达到了显著水平。在极显著水平中菌株NZT-47、MTT-8和DHT-12的防治效果分别为76.45%、64.03%和58.89%,对小麦纹枯病表现了较高的防治效果;菌株HNT-7-16、BDT-94和BNT-28的防治效果分别为43.47%、40.97%和40.97%,具有一定的防治作用。其中NZT-47的防治效果最好。     

禾谷丝核菌拮抗细菌的鉴定及其拮抗产物分析

 小麦纹枯病是长江中下游麦区重要的土传病害。明确小麦根际拮抗细菌种类和拮抗机理对小麦纹枯病生物防治具有重要意义。从江苏省姜堰市小麦根际分离到拮抗细菌A6、A12、B37、B40、B41和B42。通过生理生化测定和16SrDNA同源序列比对分析,这些菌株都为荧光假单胞杆菌。在温室条件下进行种子处理,这些菌株对小麦纹枯菌都有一定的控制作用,其中菌株A6、B41和B42的控病作用明显,菌株B42对小麦纹枯病的控制效果最好,温室防效达71.67%。基因检测和次生代谢物分析的结果表明:6个菌株都不产生2,4-二乙酰基间苯三酚和吩嗪,菌株A12、B37和B42含有与吡咯菌素合成相关的基因PrnD,在菌株B37中还检测到合成基因PrnC;菌株A12、B37和B42产生嗜铁素;除了菌株A6和B37,其余菌株都产生蛋白酶;所有菌株都不产生几丁质酶。     

黄瓜白粉病拮抗细菌的筛选与鉴定及其防病机理

通过室内盆栽试验,筛选到对黄瓜白粉病具有显著防治效果(≥90.0%)的细菌12个菌株进行田间小区防病试验,结果表明其中10个菌株具有显著的防治效果,菌株XJT-7、NZT-14-84和BDT-25的防治效果较好,分别为79.02%、67.51%和57.38%。对该3株生防细菌的防病机理初步研究证明他们的胞外代谢产物具有防病作用。通过分类鉴定,确定菌株XJT-7为坚强芽孢杆菌。