植酸酶包埋后酶活和热稳定性的变化规律研究

为了了解植酸酶在包埋状态下酶活及酶性的变化,分别对酶的释放情况和热稳定性进行了研究。结果表明,随着时间的延长,包埋酶释放出的酶活逐渐上升(P<0.01),60min时达到最大值;而未包埋酶释放出的酶活逐渐下降(P<0.01),60min时达到最小值。包埋酶和未包埋酶在30、40、50、60、70、80、90和100℃的条件下,随着温度的升高,残留的植酸酶活力下降(P<0.01)。对于包埋酶,当温度升高到70℃时,植酸酶相对酶活仍保持在93%(P>0.05);当温度升高到80℃时,植酸酶的相对酶活才明显下降(P<0.01),不过在100℃时,仍能保持67%的酶活(P<0.01)。对于未包埋酶,当温度升高到60℃时,植酸酶相对酶活明显下降(P<0.01);当温度升高到100℃时,植酸酶相对酶活仅有23%(P<0.01)。通过在统一温度条件下,对包埋酶和未包埋酶处理组的相对酶活的对比发现,在50℃以下时,二者差异不显著,当温度超过60℃时,包埋酶的相对酶活极显著高于未包埋酶。     

转植酸酶基因玉米植酸酶稳定性的研究

试验以转植酸酶基因玉米(PTC)为原料,通过烘箱高温处理,研究PTC的耐热性能;通过在不同挤压温度(60、80和100℃)和不同物料(750 U/kg PTC组和6 500 U/kg PTC组)组合下,研究PTC在制粒加工工艺中的稳定性。结果表明:PTC具有较好的耐热性能,120℃烘箱处理5 min,其植酸酶酶活损失率为13.38%;但在制粒温度上升时,植酸酶酶活损失率呈明显上升趋势,当制粒温度达到100℃时,PTC的植酸酶酶活损失率在90%以上。     

6种商品植酸酶对热和pH的耐受性比较

本试验测定了六种商品植酸酶(A、B、C、D、E和F)分别在不同的温度和pH条件下的酶活性,以比较这6种商品植酸酶对不同温度和pH的耐受性。试验结果表明,A、B、C、D、E和F等6种植酸酶产品经40℃水浴处理15h后残留的相对酶活分别为88%、83%、93%、76%、51%和43%;经80℃水浴处理1min后残留的相对酶活分别为97%、96%、69%、84%、67%和98%;经95℃水浴处理5min后残留的相对酶活分别为83%、76%和22%;在偏离pH5.5时,6种植酸酶的相对酶活均呈大幅下降,其中在pH6.0时均下降到60%以下,在pH2.0时分别下降至43%、42%、24%、30%、45%和52%。     

不同的处理条件对植酸酶活力的影响

242个饲料样品被分为试验和对照两组,每组分为121个样品。试验组选用层析柱来浓缩酶以去除原酶液中的底色对测定结果的影响,对照组选用原酶液。结果表明,层析柱虽可去除底色的副作用,但对测定植酸酶的活力无任何影响(P>0.05)。在制颗粒料过程中,随着制粒温度的升高(60、70、80℃),植酸酶的活力丢失也愈多(P<0.01)。当用柠檬酸和醋酸两种缓冲液来浸提和测定植酸酶时,以柠檬酸缓冲液测得的植酸酶活力较低(pH5.5,P<0.01)。不同的浸提温度(4、25℃)及不同的浸提时间(5、10、15、30、45、60、90和120min)对测得的植酸酶活力皆无明显的影响(P>0.05),因而植酸酶适宜的浸提温度和时间分别为25℃和60min。     

不同来源植酸酶抗逆性的研究

本试验通过模拟饲料制粒过程及动物胃环境,对不同来源的植酸酶在经过高温和酸处理后酶活变化情况进行了对比分析,为植酸酶的实际应用提供理论依据。(方法)搜集到11种市售的植酸酶产品,编号为1~11采用湿热法,温度分别设置为75℃、80℃和85℃,处理时间为2.5min,p H处理值设定为4.0、3.0和2.5,处理时间为2h。结果表明,不同来源的植酸酶耐温性和耐酸性存在很大差异,从耐温性看,温度在75℃~80℃时,1号样相对酶活最高,而继续升至85℃时,11号样稳定性最好,10号样次之;从耐酸性看,p H值从4.0降至3.0时,10号样相对酶活最高,11号样次之,其他稳定性均比较差。因此,综合考虑,在模拟饲料制粒条件和动物胃环境下评定酶的作用效果,以10、11号样耐受性最好,4、5号样酶活稳定性最差。     

植酸酶基因在嗜酸乳杆菌中的表达

植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶液的抗蛋白酶活性。结果表明：重组嗜酸乳杆菌发酵24 h植酸酶活性为984 U/mL,植酸酶的最适催化pH为4.5,最适催化温度为60℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0～4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为76.4%。植酸酶液用胃蛋白酶处理160 min后植酸酶液剩余85%的相对酶活,用胰蛋白酶处理160 min后剩余29%的相对酶活。上述研究结果为重组嗜酸乳杆菌后续应用研究提供了重要依据。     

植酸酶混合均匀度对仔鸡生长性能矿物质贮存率骨质矿化的影响

为了确定植酸酶的不同混合均匀度对仔鸡生长性能、矿物质贮存率、骨质矿化的影响,进行了为期18d的试验.试验鸡随机分为7组,每组6(组1)或7(组2～7)个重复,每重复7只仔鸡.植酸酶的不同混合均匀度通过交替使用植酸酶含量不同的两种饲料模拟而成,每24h更换一次饲料.组1为阳性对照,Ca1.0%,有效磷0.45%;组2为阴性对照,Ca0.9%,有效磷0.35%;组3(CV0)组2+每天600植酸酶单位(FTU);组4(CV17)组2+500或700FTU;组5(CV34)组2+400或800FTU;组6(CV69)组2+200或1000FTU;组7(CV103)组2+0或1200FTU.组1和组3CV0的增重、采食量和骨骼强度相近(P＞0.15),但组2下降了(P＜0.01).各组间肉料比未受影响(P＝0.15).组2和组3CV0的骨灰分较组1低(P＜0.02),但组3CV0的骨灰分极显著地高于组2P＜0.01.随植酸酶单位变异系数(CV)的增大,骨骼强度和骨灰分下降(P＜0.01).随植酸酶单位变异系数的增大,钙和磷的贮存率(P＜0.08)以及增重P＜0.09逐渐下降.组3和组7间,仅骨骼强度和骨灰分差异显著(P＜0.01).结论增加植酸酶变异系数对生长性能几乎无影响,但植酸酶变异系数极大时骨灰分、骨骼强度、钙和磷的贮存率、排泄率下降.     

兔精液冷冻保存的研究

本试验采用不同的稀释液对兔精液进行冷冻保存,并比较了在稀释液中添加不同防冻剂以及平衡时间对兔精液冷冻保存效果的影响.结果表明:稀释液Ⅱ稀释的精液,解冻后,精子活率明显高于稀释液Ⅰ稀释的(P＜0.01),其复苏率显著高于后者(P＜0.05).以稀释液Ⅱ为基础液,添加不同浓度(27.3%,15%,12%,9%)的DMSO对兔精液冷冻保存,结果解冻后精子活率以15%及12%两组较好,其中添加15%的优于12%的,但差异不显著(P＞0.05).选择不同种类的防冻剂(7%甘油与15%DMSO)比较时,发现7%甘油组解冻后精子活率明显低于15%DMSO组,二者差异极显著(P＜0.01),其复苏率显著低于后者(P＜0.05).以15%DMSO作为防冻剂,采用不同的平衡时间在5 ℃平衡,结果发现平衡30 min和60 min的解冻后精子活率较好,但差异不显著(P＞0.05),而90 min和120 min的冷冻效果较差.     

不同制粒温度对植酸酶活性的影响及畜禽饲养对比试验研究

试验将含有制粒专用植酸酶制剂的日粮样本在4种温度条件下进行制粒．制粒后的饲料应用植酸酶国标法进行酶活测定,结果表明：制粒专用植酸酶在调制温度70℃左右、蒸汽压力不高的情况下酶活基本未丧失,性能比较理想：当制粒温度达到80℃以上时,酶活明显降低,但总体保持在500U／kg以上．制粒用植酸酶仍具有较好的耐热性能。经过动物饲养试验表明．肉鸡和育肥猪饲养对照组和处理组之间的平均日增重和料肉比差异都不显著（p〉0．01）,这说明在添加制粒专用植酸酶后．对磷酸氢钙的量进行调整并不会影响肉鸡和育肥猪的生长性能．且同样能达到普通植酸酶在粉状饲料中的应用效果。     

植酸酶的特性及稳定性效果的对比研究

试验就植酸酶的相关特性及其在此基础上的应用选择功效进行研究,并对市场上占有率较高的三个国产知名企业生产的植酸酶产品(P1、P2、P3)进行稳定性研究,比较这三种植酸酶产品在不同pH值、不同温度下(室温、80℃水浴、90℃常湿)和不同储存时间的酶活,为生产实践中合理选择使用植酸酶提供参考依据。结果表明,P2在酶活高峰pH值4.5～5.0表现出的酶活显著高于P1和P3(P0.05)。高温稳定性效果P3显著优于P1和P2(P0.05)。