氮离子注入对同源四倍体水稻成熟胚组织培养体系的影响

选择3份同源四倍体水稻为材料,研究了氮离子注入对其成熟胚诱导愈伤组织和分化成苗的影响。结果显示,低剂量范围(1.0×1016~2.0×1016ions/cm2)的N 注入能明显提高愈伤组织诱导率;无论离子注入剂量大小,N 注入能明显改善愈伤组织的发育状态,抑制其褐化衰老的进程,提高愈伤组织的绿苗分化率。     

双低油菜品种组织培养的反应

在有激素培养基中萌发的油菜种苗的子叶大而厚、根少而短、下胚轴粗短,并有少数愈伤组织出现。2,4—D1～3mg/1均能诱导愈伤组织形成,添加0.1～1mg/16BA有利于愈伤组织的分化培养。子叶愈伤组织诱导率高于下胚轴,三个品种中,双低油菜DSV—SR—50的诱导率最高。来自激素萌发培养基的下胚轴的愈伤组织发生早、发展快、诱导频率高,并有直接分化出芽的。愈伤组织在含有IAA1mg/l和6BA1～7mg/l的B5培养基中都能分化出芽,但以添加6BA3～5mg/l对频率最高。小塔的愈伤组织分化频率最高为45.65％,以下为DSV—SR—5034.32％,Liglando 22.79％。并讨论了前期培养基和材料基因型与愈伤组织诱导分化的问题。     

提高水稻成熟种胚体细胞培养力

实验结果认为,水稻成熟胚是一种“竞争性”外植体。高浓度的脱落酸（ABA）能有效地抑制胚芽和胚根的生长,而对水稻盾片愈伤组织的生长影响较小,从而促进盾片愈伤组织的同步健壮生长。这些愈伤组织致密,呈乳白色且分化频率高。调节分化培养基的浓度可减少愈伤组织变褐老化,有效地提高愈伤组织绿苗分化率。在诱导培养期间,较高的2,4－D浓度（大于1 mg/L）和6－BA会抑制种胚体细胞愈伤组织的诱导,其中籼稻比粳稻敏感。在诱导培养基中附加2,4－D 0.5 mg/L,BA 0.5 mg/L,ABA 5 mg/L,B_1 (5－10 mg/L)对成熟籼稻种胚培养是较合适的。     

水稻成熟胚盾片诱导愈伤组织再生体系的建立

采用水稻成熟胚盾片诱导愈伤组织作为分化再生的外植体，通过优化激素组合和调节培养基渗透压，建立了适合水稻遗传转化的高效再生体系，将水稻成熟胚诱导愈伤组织分化再生的过程划分为3个不同时期，即成熟胚盾片愈伤组织诱导，胚性细胞诱导保持，胚性愈伤组织分化再生，以CultureI(LS 2,4-D2.0mg/L)诱导成熟胚盾片愈伤组织，愈伤组织剥离后接种于Culture II-3(LS 2,4-D 2.5mg/L 山梨醇3g/L)上诱导胚性愈伤组织，继代后接种于Culture Ⅲ-2(MS NAA 0.5mg/L 6-BA 1.0mg/L Kinetin 2.0mg/L 山梨醇8g／L）上分化成苗，培养结果表明，该再生体系所获得的胚性愈伤组织分化再生率均在60％－80％之间，利用本研究建立的高效再生体系建立水稻外源基因遗传转化系统，使转化过程中所得转化愈伤组织高效再生成苗，从而顺利获得转化植株，可以提高水稻外源基因转化的效率，为水稻品种的定向遗传改良提供优良的遗传转化技术体系。     

提高水稻愈伤组织植株再生能力几种方法的评价

选用提高水稻愈伤组织植株再生能力的几种方法,对3个光温敏核不育水稻品系的愈伤组织进行培养比较.结果表明:愈伤组织在继代培养过程中再生能力的衰退难以避免,但不同品种间的衰退速度存在差异;选用的几种方法中,除了添加亚精氨的处理没有效果外,其它处理均能提高水稻愈伤组织的再生能力,而两步分化培养法的效果远远优于其它方法,可优先考虑应用于诱导经过长期继代创造体细胞无性系变异的愈伤组织的植株再生.     

2,4 D和干燥处理对小麦成熟胚愈伤组织诱导与分化的影响

为解决西北地区小麦栽培品种高频再生体系建立过程中的瓶颈问题,以不同品种、不同2,4-D浓度及对愈伤组织的不同干燥处理时间为变量,研究不同处理对小麦栽培品种成熟胚愈伤组织诱导与分化的影响。结果表明,甘春24、甘春20、西旱1号在2,4-D浓度为2.0～5.0mg·L-1时,愈伤组织诱导与分化较好,2,4-D浓度为5.0mg·L-1以上愈伤组织容易褐变,分化能力减弱,成苗率低;在转入胚性诱导培养基前,12h的干燥处理能促进各品种愈伤组织分化;通过正交设计分析,甘春24在2,4-D浓度为2.5mg·L-1,12h干燥处理条件下所建立的再生体系最好,是转基因中良好的受体;甘春20在2.0mg·L-1 2,4-D、12h干燥处理下愈伤组织形成与分化较好;西旱1号经3.0mg·L-1 2,4-D、12h干燥处理,能显著提高其愈伤组织的分化。     

甘蔗（甘蔗属热带种）叶鞘离体培养中的愈伤组织诱导和绿苗分化

甘蔗叶鞘外植体在外加不同生长调节剂(IAA、NAA和2，4—D)，加或不加椰乳的改良MS培养基上培养诱导愈伤组织。结果表明，本研究添加伪不同生长素中，只有NAA和2，4—D能诱导出愈伤组织，其中，各种供试浓度2，4—D诱导愈伤组织助效果都比相应浓度NAA的诱导效果好。经过10天的培养，在不同供试浓度中，3mg／L2，4—D诱导甘蔗品种Isd16和无性系1327—86分别形成具有再生能力的乳白色愈伤组织和谈绿色愈伤组织最多。Img/LBA 0.1mg/LIBA和1mg/LBA 0.5mg/L NAA从这两组生长调节剂使愈伤组织分化绿苗的效果最好。甘蔗无性系1327-86比品种Isd16分化出比较浓密但个体小的绿苗。     

应用Cre/loxP系统在转化细胞水平上高效删除转基因水稻的标记基因

 研究了Cre/loxP系统在转化细胞水平上删除转基因水稻中抗性标记基因的可行性和效率。采用农杆菌介导法将Cre/loxP标记基因剪切系统载体pNCG导入水稻细胞,用G418筛选法获得水稻抗性愈伤组织后,在组织培养不同阶段的培养基中添加25 μmol/L雌激素进行Cre基因的诱导表达和标记基因的剪切,PCR检测T0植株中标记基因nptⅡ、重组酶基因Cre和目标基因gusA的整合情况。将扩增结果为gusA（+）/nptⅡ（-）/Cre（-）的转基因植株统计为标记基因剪切成功的植株。结果表明,在抗性愈伤组织培养的预分化前、预分化和分化阶段添加雌激素诱导表达重组酶Cre均能成功切除标记基因序列,标记基因剪切成功率为6.82%~46.43%。在预分化前采用液体培养基添加雌激素诱导处理愈伤组织3 d,T0植株中标记基因的剪切效率高达173.33%,主要原因是雌激素处理提高了愈伤组织绿苗分化率。直接在分化培养基中添加雌激素诱导处理,T0植株中标记基因剪切成功率达46.43%,剪切效率（144.44%）也较高。表明雌激素诱导的Cre/loxP系统能在水稻抗性愈伤组织水平上实现对标记基因序列高效快速删除。     

多效唑对水稻种胚愈伤组织诱导和分化的影响

本文报道多效唑对水稻种胚愈伤组织诱导和分化的影响。试验结果表明。多效唑对水稻种胚愈伤组织的诱导以及诱导种胚愈伤组织时种子芽的生长均有抑制作用；低浓度（１─５ｐｐｍ）的多效唑处理多数能提高绿苗分化率，且诱导期进行低浓度多效唑处理的绿苗分化率高于分化期处理；再生绿苗的高度多数随多效唑浓度的提高而降低。本研究初步显示出多效唑可对水稻组织培养进行有效的化学调控。     

玉米幼胚组织培养体系优化

以5个骨干玉米自交系幼胚为材料, 研究幼胚大小、2, 4-D浓度、KT浓度对幼胚愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明, 5个骨干玉米自交系均可诱导出愈伤组织, 但不同条件下诱导率存在显著差异。最适幼胚大小为2.0～3.0 mm, 因基因型不同而有所变化;2, 4-D浓度在1.0～3.0 mg/L有利于愈伤组织诱导, 同一材料不同2, 4-D浓度对胚性愈伤组织诱导率的影响具有显著差异, 不能以初级愈伤诱导率高低作为选择胚性愈伤诱导率的标准;KT可显著提高愈伤组织的分化率, 随着KT浓度的增加分化率呈先上升后下降的趋势, 最适KT浓度为1.0～2.5 mg/L。