南瓜烂果病病原菌的分离与鉴定

采后腐烂给南瓜生产带来巨大的经济损失。为明确山东省青岛胶州南瓜果实腐烂病的病原,采用分子生物学和形态学鉴定方法,依据柯赫氏法则,对病原菌进行分离和鉴定。结果表明,从发病南瓜果实上共分离出2种菌株;经鉴定,引起南瓜果实腐烂的病原菌分别为腐皮镰刀菌(Fusanrum solani)和匍枝根霉菌(Rhizopus stolonifer)。这是我国腐皮镰刀菌和匍枝根霉菌侵染南瓜果实的首次报道。     

梨树腐烂病拮抗真菌JK2的分离和鉴定

【目的】分离鉴定对梨树腐烂病具有拮抗活性的内生真菌,为梨树腐烂病生物防治提供新的资源菌。【方法】利用组织分离法从梨树腐烂病发病枝条中分离内生菌,通过平板对峙实验筛选对梨树腐烂病菌具有拮抗作用的菌株。结合形态学和分子生物学手段,分析和确定拮抗菌株的种属。利用离体梨树枝条鉴定拮抗内生真菌对腐烂病的防治效果。【结果】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株对梨树腐烂病菌具有强烈拮抗活性的菌株JK2,抑制率超过95%。JK2上清液对梨树腐烂病菌同样具有抑制活性。经鉴定,菌株JK2为青霉属产紫青霉。离体梨树枝条鉴定结果显示,JK2对梨树腐烂病具有良好的防治效果。【结论】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株具有拮抗活性的内生真菌JK2,该菌株是一株新的梨树腐烂病生防菌资源,具有潜在的应用价值。     

胡萝卜镰刀菌根腐病病原菌的鉴定

为明确内蒙古西部地区一种新病害——胡萝卜镰刀菌根腐病病原菌种类,采用组织分离法对病原菌进行分离,用胡萝卜片接种、有伤口和无伤口胡萝卜肉质根接种及盆栽接种进行致病性测定,并通过形态学和分子生物学方法对病原菌进行鉴定。结果表明,分离到的3个菌株F1、F2和F3均表现致病性。经形态学鉴定,F1菌株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),F2和F3为茄病镰刀菌(Fusarium solani)。进一步采用真菌通用引物ITS1/ITS4对病原菌r DNA-ITS进行PCR扩增,并将测序结果在Gen Bank中进行同源性比对分析,鉴定结果和形态学鉴定的结果一致。明确了内蒙古西部地区胡萝卜镰刀菌根腐病的病原菌种类为尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和茄病镰刀菌(F.solani)。     

草莓病害拮抗细菌的筛选及其对草莓褐色叶斑病的防效

通过组织分离法和稀释分离法从草莓根、茎、叶和根际土壤中分离内生细菌183株及根际细菌55株，其中9株拮抗菌对草莓褐色叶斑病病原菌（Pilidium concavum）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、链格孢菌（Alternaria alternate）4种草莓病原菌具有广谱拮抗效果。结合病原菌形态学特征、生理生化特性和分子生物学鉴定结果，将拮抗菌株G3-23、J3-20、G3-29鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,J6-1、J1-4、G2-12、G3-k2和J1-11鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,G3-20鉴定为耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans）,G3-17鉴定为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。菌株G3-23能够分泌蛋白酶和纤维素酶，对由P. concavum引起的草莓褐色叶斑病具有良好的防治效果，并且该菌株能在离体草莓叶片上成功定殖，表现出较好的生防潜力。     

苹果树腐烂病拮抗菌株的分离、筛选和鉴定

为筛选出对苹果树腐烂病有拮抗效果的生防菌,从内蒙古达茂草原采集土样,利用逐级稀释法分离菌株;以苹果树腐烂病病菌（Cytospora mali）QH2为供试病原菌,采用平板对峙、离体枝条法、抑菌谱,结合耐盐、耐紫外的稳定性测定筛选拮抗菌株,通过形态学、分子生物学和生理生化方法对拮抗菌株进行鉴定。结果表明,从6份土壤样品中分离纯化得到细菌288株、放线菌54株,经筛选得到DM5-29和DM3-18。DM5-29和DM3-18对C. mali QH2的皿内拮抗圈在1 cm以上,在金红和黄太平枝条上的防效分别在64%、77%以上,抑菌谱广,发酵液紫外照射120 min后仍对苹果树腐烂病具有一定的拮抗活性,可分别在5%NaCl与12%NaCl中生长,鉴定确定DM5-29为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,DM3-18为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）,2个菌株对苹果树腐烂病均有良好的拮抗效果,抗逆性强、抑菌谱广,有应用潜力。     

我国梨腐烂病病原菌的初步鉴定及序列分析

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省(市)梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化分离株;观察在PDA、25℃黑暗条件下病原菌菌落形态以及产孢体形态,并对其在梨枝条上产生的分生孢子器徒手切片置显微镜下观察其结构特征和分生孢子形态;采用菌丝块接种法测定梨腐烂病菌在‘翠冠’梨离体枝条上的致病力。对部分菌株rDNA-ITS进行PCR扩增、测序,利用BLAST软件与GenBank数据库进行序列相似性分析,并用MEGA 4.1和邻接法构建系统发育树。【结果】根据梨腐烂病菌各分离株在PDA上的菌落形态特征可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,不同梨腐烂病菌分离株在PDA上产生多种类型的产孢体,不同梨腐烂病菌菌株在离体梨树枝条上的致病力存在差异,我国梨腐烂病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率为99.98%~100%,与苹果腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。【结论】我国梨腐烂病病原菌存在不同的菌落类型,其rDNA-ITS核苷酸序列分析显示均为V.mali var.pyri。     

东北油豆角枯萎病病原菌的分离、纯化与鉴定

为明确引起东北油豆角枯萎病病原菌的分类地位,采用形态学和分子生物学方法(r DNA-ITS区序列测定)对其进行分离、纯化和致病性测定。结果显示:病原菌菌落呈淡紫色,大型分生孢子镰刀形,有3~5个隔;小型分生孢子椭圆形,有0~1个隔。试验共分离到镰刀菌菌株6株,其中对油豆角(将军一点红)有致病性的1株,经分子生物学方法测定,被鉴定为尖孢镰刀菌菜豆专化型(Fusarium oxysporum f.sp.phaseoli)。     

福建马铃薯黑胫病病原分离及鉴定

为明确福建马铃薯黑胫病的病原菌的种类和生物学特性，采集福建3个马铃薯种植区的病样，并通过平板分离、纯化和致病性测定、生理生化测定及分子生物学方法对该病原菌进行鉴定。结果从病样中分离获得9个菌株，其中2个菌株鉴定为黑腐果胶杆菌（Pectobacterium atrosepticum），3个菌株鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（P. carotovorum subsp. carotovorum），4个菌株鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌巴西亚种（P. carotovorum subsp. brasiliensis）。不同地区菌株差异较大，其中福州青口的病原是P. atrosepticum，霞浦的病原是P. carotovorum subsp. carotovorum，而周宁的是P. carotovorum subsp. carotovorum和P. carotovorum subsp. brasiliense混合侵染。     

海南白沙和儋州油梨叶部及果实炭疽病菌的鉴定

【目的】明确海南省白沙县和儋州市油梨种植基地的油梨叶片和果实的病原菌种类，为该病害的准确鉴定和田间防治措施的制定提供理论依据。【方法】在海南省白沙县和儋州市的油梨种植基地调查炭疽病的发生情况并采集病叶和病果，通过组织分离法和单孢分离法获得纯化分离株，并对纯化菌株进行致病性测定，结合形态学和分子生物学对所得菌株进行病原菌种类鉴定。【结果】从采自白沙县的14份病叶种分离的得到3株菌株，儋州市的10份病叶中分离获得6株分离物以及自白沙市采集的5份病果中分离出的1株真菌，经致病性测定，菌株HNBSL01、HNDZL02和HNBSF03为致病菌，且均与田间症状一致。根据3种致病菌的菌落、分生孢子和附着胞的形态特征可初步判断引起油梨叶片和果实炭疽病的病原菌均为炭疽菌属（Colletotrichum sp.）；多基因（ITS-ACT-TUB2-CHS-1-GAPHD-HIS3）联合分析构建系统发育树分析结果显示，病原菌HNBSL01与暹罗炭疽菌（C. siamense）的同源性为81%、HNDZL02与果生炭疽菌（C. fructicola）的同源性为100%、HNBSF03与长直孢炭疽菌（C. g...     

镰刀菌引起的北京市草莓根腐病病原鉴定

对北京市昌平区采集的35个草莓根腐病病样进行病原鉴定,结果分离获得13个菌株,根据培养特征和形态学鉴定,确定分离到的菌株均为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）|选取真菌通用引物ITS1/ITS4扩增菌株的rDNA-ITS序列并进行测序,通过与GenBank数据库序列比对,分子鉴定结果与形态学一致。将分离到的菌株回接到健康草莓幼苗上,植株表现出与田间发病相似的症状,重新分离能够得到相同的病原物。基于形态学、分子生物学鉴定及致病性检测,最终确定北京市昌平区草莓根腐病的病原菌为Fusarium oxysporum。     

香蕉叶斑病病原菌芭蕉新拟盘多毛孢的鉴定

在广东省茂名市香蕉产区进行病害调查时发现一种为害较为严重的香蕉新发叶斑病害。根据柯赫氏法则对其进行病原菌分离及致病性检测，并根据形态学特征和ITS、β-tubulin和tef1序列分析对该病原菌进行鉴定。研究结果表明：分离得到的病原菌菌株MM3-2z9能够侵染香蕉叶片，并能诱发与田间类似的症状。其菌落在PDA培养基上呈白色，产生明显的同心轮纹；分生孢子纺锤形，具4个隔膜，中间3个细胞异色，顶细胞无色，锥形，附属丝2～4根（多为3根），基部细胞有1根附属丝，中生，无色。序列同源性分析显示MM3-2z9菌株3个单孢菌株的ITS、β-tubulin和tef1序列与芭蕉新拟盘多毛孢（Neopestalotiopsis musae）菌株相应序列的一致性都高于98%,3片段串联构建系统发育树的结果表明，菌株MM3-2z9与芭蕉新拟盘多毛孢（N.musae）亲缘关系最近。基于形态学与系统发育树分析结果，鉴定菌株MM3-2z9为芭蕉新拟盘多毛孢（N. musae）。该病原菌还可快速侵染大蕉和粉蕉‘粉杂1号’的叶片。     

广西厚皮甜瓜根腐病病原菌鉴定及抗病种质筛选

根腐病是近年上升为广西地区大棚厚皮甜瓜生产上的重要病害,严重影响甜瓜产业的健康发展.为明确该病害病原菌的分类地位并获得抗病种质材料,对病原菌进行分离纯化和致病性测定,结合形态学和分子生物学特征对病原菌进行分类鉴定,并通过苗期抗病性鉴定方法筛选抗病种质材料.结果表明,致病菌株的菌落和分生孢子形态特征与前人报道的腐皮镰孢菌...     

非洲菊根腐病病原菌的分离鉴定及致病性

以非洲菊根腐病发病植株为试材,采用常规组织分离法对引起非洲菊根腐病病原菌进行分离纯化,研究了分离物对非洲菊的致病性,并通过形态学结合rDNA-ITS和TEF-1α序列的分子系统学方法对病原菌进行鉴定,以期明确非洲菊根腐病的病原菌类型.结果 表明:从典型病根上共分离获得8株菌株,分别为FZJf 1-1、FZJf 1-2、FZJf 1-3、FZJf 2-1、FZJf 2-2、FZJf 2-3、FZJf 3-1和FZJf 3-2;8株菌株均能导致非洲菊幼苗出现典型的叶片枯萎和根腐症状,其中菌株FZJf 1-1和FZJf 1-3致病力最强,接种第3周植株开始发病,其次是菌株FZJf 2-1,接种第5周植株开始发病,其余菌株致病性较弱;根据形态学特征和分子系统学特征鉴定出6株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),分别是FZJf 1-1、FZJf 1-2、FZJf 1-3、FZJf 2-1、FZJf 2-3和FZJf 3-2,1株为茄类镰刀菌(F.solani)FZJf 2-2,1株为层出镰刀菌(F.proli feratum) FZJf 3-1,尖孢镰刀菌(F.oxysporum)为优势病原菌,茄类镰刀菌(F.solani)和层出镰刀菌(F.proli.eratum)为弱势病原菌.     

内蒙古苹果树腐烂病病原菌鉴定

【目的】明确内蒙古地区引起苹果树腐烂病的病原种类。【方法】采用形态学结合分子生物学的方法,对内蒙古呼和浩特市周边果园的苹果腐烂病病菌进行分离、鉴定和致病力测定。【结果】从感病’金红’苹果树上分离到2株苹果腐烂病病菌,命名为QH1和QH2。QH1与QH2的致病力与分离自陕西杨凌的参照菌株YL1相同;菌落、分生孢子及子实体的形态特征均符合Cytospora属的特征;基于内转录间隔区、核糖体大亚基片段、转录延长因子和β微管蛋白4个基因的序列一致性和系统发育的分析证明,QH1属于Cytospora schulzer,QH2属于Cytospora mali。【结论】内蒙古呼和浩特地区苹果腐烂病病菌为C.schulzer和C.mali两种致病菌。     

核桃溃疡病病原菌鉴定及药剂筛选试验

对长期被各大核桃产区误作“流黑水病”或“腐烂病”的病原菌进行鉴定,已查明是由小穴壳菌危害引起的核桃溃疡病.经两年多点最佳组合药剂防治试验及推广应用,取得了很好成效.     

石榴采后腐烂病病原菌的分子鉴定

按照柯赫氏法则对石榴采后腐烂病病原菌进行了分离, 应用PCR技术对分离菌rDNA的内转录间隔区( ITS区) 基因克隆后测序, 并将所测序列提交到欧洲分子生物学实验室核酸数据库( EuropeanMolecular Biology Laboratory Genbank) , 通过Blast程序将该序列与数据库已有的序列进行分析比较, 发现与葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea) 的同源性达到了99%以上, 因此认为石榴腐烂的病原菌是葡萄座腔菌。该菌引起的石榴腐烂病害特征与以往报道的石榴干腐病相似。对葡萄座腔菌的部分生物学特性和侵染循环规律进行了描述。     

3株魔芋茎腐病病原菌的分离鉴定与致病性研究

镰刀菌引起的魔芋茎腐病是魔芋栽培过程中重要病害之一,为明确贵州省兴义市魔芋茎腐病的病原菌种类,2019年从贵州省兴义市采集魔芋茎腐病病样,采用组织分离法对病样进行分离,通过形态学鉴定方法结合基于rDNA-ITS与tef序列分析的分子鉴定方法对分离物进行鉴定,并按照柯赫氏法则进行致病性测定。结果显示,经组织分离法共获得3株镰刀菌纯培养物,经鉴定分属于2个种,分别为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和茄腐镰刀菌(F.solani);致病性结果表明,尖孢镰刀菌菌株xymy-8没有致病性,茄腐镰刀菌菌株xymy-7、xymy-9有致病性,且致病性有差异,其中菌株xymy-7的致病性强于菌株xymy-9的致病性。试验结果为魔芋茎腐病防控提供了理论依据。     

赣南脐橙园枯枝微生物的研究初探

为探明赣南脐橙园内枯枝表层微生物群落,及时了解不同季节枯枝上的病原菌,为赣南柑橘产区从源头上防治病害提供理论依据及技术支撑,用PDA培养基进行枯枝表层微生物的筛选鉴定。结果表明,4～8月份共筛选出7株单菌株,经16SrDNA鉴定分别为Ap1-1和Au4-3为枝状枝孢菌属(Cladosporium cladosporioides)、Ap1-2和Au3-1为短小杆菌属(Curtobacterium)、Ap4-2为甲基细菌(Methylobacterium komagatae)、Au1-1为裂褶菌(Schizophyllum commune)和Au4-4为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas trueperi)。     

澳洲坚果叶斑病新病原及生物学特性

在澳洲坚果园发现一种叶部病害,为明确该病害的病原菌种类,将采集病叶进行病原菌分离,并运用柯赫法则测定致病性,根据病原菌的形态学特征和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定。结果表明,分离菌株的菌落形态和分生孢子形态都与小孢拟盘多毛孢Pestalotiopsis microspora一致,经分子生物学鉴定,其ITS序列与小孢拟盘多毛孢的ITS序列的同源性为99%,将引起澳洲坚果叶斑病的病原菌鉴定为小孢拟盘多毛孢。PDA培养基最有利于该病原菌生长,培养3d后,菌落直径达62.9mm,最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为硫酸铵;病原菌在15~30℃均能生长,最适生长温度28℃;病原菌在pH值4~11范围内均可生长,pH值7生长最佳,全光照有利于病原菌生长。首次报道Pestalotiopsis microspora引起澳洲坚果叶斑病。     

大樱桃根茎腐烂致病菌的分离鉴定

以感根茎腐烂病的樱桃树为试材,对其病原菌进行分离纯化、致病性检测和r-DNA-ITS序列分析,研究了pH和温度对病原菌菌丝生长的影响.结果表明:分离到的4株病原菌中仅1株引起了根茎腐烂病,经r-DNA-ITS序列分析鉴定,该菌为撕裂蜡孔菌;该菌在pH 4.0～7.0生长较快,最适宜pH为6.0;最适生长温度为32～34℃,最高生长温度38℃,致死温度42℃.