超低温冷冻对绵羊精子肌酸激酶活性的影响

为了研究冷冻保存对绵羊精液肌酸激酶(CK)活性的影响,提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)对冷冻保存前后绵羊精液、精子和精清中CK活性进行研究。结果表明:与冷冻前比较,冷冻保存后绵羊精液、精子CK活性极显著降低(P0.01),而精清中CK活性显著升高(P0.05)。说明冷冻保存对绵羊精子CK活性影响严重。     

绵羊冻融精子过氧化氢酶活性变化的研究

为了研究冷冻保存对绵羊精液过氧化氢酶(CAT)活性的影响,从而提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用CAT比色法对冷冻保存前后绵羊精子和精清中CAT活性进行了研究。结果表明:与冷冻前相比,冷冻保存后绵羊精子中CAT活性极显著降低(P0.01);精清中CAT活性极显著升高(P0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子和精清中CAT的活性造成了很大影响;冷冻后精子活率与精子CAT活性呈显著正相关(r=0.887,P0.05),冷冻前精子活率与精子CAT活性呈极显著正相关(r=0.987,P0.01)。说明绵羊精子中CAT的活性与精子活率密切相关,可作为绵羊精液品质评价的参考指标。     

冻融过程对绵羊精子超氧化物歧化酶活性影响的研究

为了研究冷冻保存对绵羊精子超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用改良的邻苯三酚自氧化法对冷冻保存前后小尾寒羊精液、精子和精清中SOD的活性进行研究。结果表明:冷冻保存小尾寒羊精液SOD活性[(1 432.24±45.04)U/mL]和精子SOD活性[(511.58±35.06)U/mL]与冷冻前[(1 550.57±60.17)U/mL、(937.42±21.24)U/mL]相比均极显著降低(P<0.01),精清SOD活性[(903.51±9.35)U/mL]与冷冻前[(531.26±7.02)U/mL]相比极显著升高(P<0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子和精液中SOD活性造成了显著损伤。     

冷冻保存对绵羊精子谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

为了研究冷冻保存对绵羊精子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响,提高绵羊冷冻精液的品质,试验采用5,5-二硫二硝基苯甲酸(DTNB)比色法对冷冻保存前后绵羊精液、精子和精清中GSH-Px活性进行研究。结果表明:冷冻保存后绵羊精液GSH-Px活性[(6.25±2.80)U/mL]与冷冻前[(9.48±2.37)U/mL]相比极显著降低(P0.01),冷冻保存后绵羊精子GSH-Px活性[(4.84±1.92)U/mL]与冷冻前[(7.58±2.67)U/mL)]相比显著降低(P0.05),说明冷冻保存对绵羊精液和精子GSH-Px活性造成了严重损伤。冷冻前后精子活率与精子中的GSH-Px活性均呈极显著正相关(P0.01),GSH-Px活性与精子活率关系密切,可作为绵羊精液品质评价的新指标。     

冷冻保存对绵羊精子乳酸脱氢酶活性的影响

为了研究冷冻保存对绵羊精液乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,提高绵羊精液的品质,试验采用酶动力学分光光度法对冷冻保存前后绵羊精液、精清和精子中LDH的活性分别进行研究。结果表明:冷冻保存后绵羊精液LDH活性[(18.40±7.85)U/m L]和精子LDH活性[(5.91±2.16)U/m L]与冷冻前[(24.89±8.21)U/m L、(10.80±4.95)U/m L]相比均极显著降低(P0.01),而精浆中LDH活性则极显著升高(P0.01),冷冻保存对绵羊精液及精子中LDH的活性造成严重损伤。冷冻前后精子活率与LDH活性均呈极显著正相关(P0.01),LDH的活性可以在一定程度上预测精子活率,可以作为绵羊精液品质评价的新指标。     

冻融过程对绵羊精子ATP酶活性的影响

为了充分发挥和提高优良种公羊的利用率,提高绵羊冻融精液品质,试验采用酶动力学分光光度法对冷冻保存前后小尾寒羊精子和精清中ATP酶活性变化进行研究。结果表明:冷冻保存小尾寒羊精子中ATP酶活性(83.76±3.53)U/m L与冷冻前(175.42±4.32)U/m L相比极显著降低(P0.01),精清中ATP酶活性(164.96±3.22)U/m L与冷冻前(73.51±2.23)U/m L相比极显著升高(P0.01);冷冻前后精子活率与精子ATP酶活性均呈极显著正相关(r=0.979和0.968,P0.01)。说明冻融过程对绵羊精子中ATP酶的活性造成了严重损伤。绵羊冻融精子ATP酶的活性可以在一定程度上预测精子活率,并可作为绵羊精液品质评价的重要指标。     

冷冻保存对姜曲海猪精液酶活性的影响

为了研究猪精液超低温冷冻-解冻后酶活性的变化,试验以姜曲海猪新鲜和冷冻保存精液为研究对象,对其超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶,透明质酸酶(HYD)、顶体酶(ACE)等功能性酶和酸性磷酸酶(ACP)、ATP、肌酸激酶(CK)等代谢性酶活性进行测定。结果表明:与新鲜精液比较,冷冻-解冻精液除GR活性显著升高(P0. 05)外,其他酶活性均显著降低(P0. 05)。说明超低温冷冻保存破坏了姜曲海猪精子酶系统,导致多数酶活性降低,是影响其冷冻效果的原因之一。     

冻融过程对绵羊精子琥珀酸脱氢酶活性影响的研究

为了检测冷冻对绵羊精子琥珀酸脱氢酶(SDH)的影响,探索其与精子活率的关系,试验采用试管法对冷冻前后小尾寒羊精子SDH的活性进行研究。结果表明:冷冻后精子活率[(38.80±4.15)%]及精子SDH阳性反应率[(32.80±4.32)%]与冷冻前精子活率[(81.20±2.17)%]和精子SDH阳性反应率[(72.20±4.02)%]相比极显著降低(P0.01),冷冻前后精子活率与精子SDH阳性反应率分别呈显著正相关和极显著正相关(P0.05和P0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子SDH活性造成显著损伤;精子活率与SDH阳性反应率之间的显著相关性证实了精子SDH的活性与精子生命活动密切相关,其活性可以在一定程度上预测精子活率和受精能力,并可作为评价绵羊冻融精液品质的新指标。     

绵羊冻融精子透明质酸酶活性变化的研究

为了检测冷冻对绵羊精子顶体透明质酸酶活性的影响,试验采用改良后的明胶膜片法对冷冻保存前后小尾寒羊精子顶体透明质酸酶活性变化进行研究。结果表明:冷冻保存后精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(43.00±2.45)%]和平均成环直径[(32.86±0.32)μm]与冷冻前精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(67.00±4.79)%]和平均成环直径[(55.05±0.47)μm]相比极显著降低和减少(P0.01),且冷冻前后精子活率与透明质酸酶活性均呈极显著正相关(P0.01),表明冷冻保存对绵羊精子顶体透明质酸酶活性造成显著损伤。说明透明质酸酶的活性可以在一定程度上预测精子活率和受精能力,可作为绵羊精液品质评价的新指标。     

精清浓度对马精子低温及冷冻保存效果的影响

本研究旨在比较不同精清浓度对马精子低温保存效果的影响。选取4匹4~12岁英纯血种公马,收集精液用含有不同浓度精清的稀释液进行精液低温保存或冷冻,检测保存和解冻后精液质量,评价精清浓度对马精子低温和冷冻保存效果的影响。结果表明:30%和40%浓度精清组低温保存后精液TM、PM、RAP及VAP值均显著低于0%、10%和20%精清浓度组(P0.05),10%精清浓度组低温保存24 h后TM值显著高于0%和20%精清浓度组,但保存至96 h后精液TM显著低于0%精清浓度组。不同浓度精清对精液冷冻效果的研究结果表明,含0%浓度精清组冻融后精液质量最优,随着精清浓度的增加冻融后活力及质膜完整性逐级递减。综上数据认为,进行马精液低温或冷冻保存时不添加精清可获得最理想的保存结果。     

用电子显微镜和生物化学的方法评定绵羊冷冻精液品质

作者对绵羊冷冻精液的精子顶体完整率,精清中的透明质酸酶、谷草转氮酶、乳酸脱氢酶的活力与受胎率的关系进行了研究。利用电子显微镜负染色技术检查冷冻绵羊精子的顶体完整率,同时测定精清中的 Hyase、GOT 和 LDH的活力。根据统计分析,顶体完整率和受胎率之间呈显著相关(P<0.05)。Hyase 和 GOT 与受胎率呈显著负相关(P<0.05),但是 LDH 的活力与受胎率无显著相关(P>0.05)。因此,能够利用这些方法作为评定绵羊冷冻精液品质的指标之一,并在一定程度上反映了精液的受胎能力。     

猪精液冷冻过程中的脂质过氧化损伤

实验采集长白猪精液,分析猪精液中抗氧化酶活性及冷冻-解冻过程中精子抗氧化酶活性、精子质量与丙二醛(MDA)含量变化的相关性分析,研究猪精液冷冻过程中的脂质过氧化损伤。结果表明:新鲜猪精子和精浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性较高、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性较低,没有检测到过氧化氢酶(CAT);解冻后精子中SOD、GPX活性降低,SOD活性与鲜精相比差异极显著(P<0.01),精子中MDA含量极显著高于鲜精和平衡后精子(P<0.01)。精子中MDA含量与SOD、GPX活性、质膜完整率和顶体完整率呈负相关,但差异不显著(P>0.05),与活力和活率呈极显著负相关(P<0.01)。结果表明,在猪精液冷冻过程中SOD、GPX活性变化从一定程度上影响了猪精子脂质过氧化损伤,又引起精子活力和活率发生变化,继而影响精子的质膜和顶体完整性。     

冷冻保存对绵羊精子DNA链完整性的影响

为了探讨冷冻保存对绵羊精子DNA链完整性的影响,试验采用原位末端标记法(TUNEL)对绵羊新鲜和冻融精子DNA链完整性进行检测。结果表明:绵羊新鲜精液和冻融精液中DNA断裂精子百分率分别为(1.74±0.33)%和(2.08±0.52)%;与新鲜精液相比,解冻后的精液中,DNA断裂精子百分率虽略有增加但无显著差异(P0.05)。提示冷冻保存对绵羊精子DNA链的完整性没有显著影响。     

影响马精液冷冻保存效率的因素分析

马精液冷冻保存技术对提高马的繁殖效率有重要意义,多种因素会对冷冻保存精液的精子造成损害。本文综述了精清、抗冻剂、微生物、过氧化作用、渗透压、冷冻和解冻等影响马精子冷冻保存的因素,旨在为提高马精液冷冻保存技术的效率、促进我国马产业更快发展提供理论依据。     

牛冷冻精液保存时间对精液品质及其受精能力的影响

为探究不同冷冻精液保存时间对荷斯坦奶牛精液品质及其受精能力的影响,选取北京奶牛中心冻存1年(A冻精)、冻存3年(B冻精)及冻存13年(C冻精)的3批精液进行研究。利用精子分析仪分析精子运动能力,台盼蓝染色鉴定精子活率,检测精子顶体完整率、线粒体功能以及DNA完整性,利用体外受精技术检测卵裂率和囊胚率,Realtime PCR检测弱精子症相关蛋白基因表达水平。结果显示:3批精液的精子活力和直线性随冷冻时间延长逐渐下降,精子活率也显著下降;3批冷冻精液的卵裂率和囊胚率随冷冻时间延长显著下降;精子线粒体功能分析结果表明,A精液线粒体膜通道孔相对荧光单位(RFU)值和线粒体活性光密度(OD)值最高(P0.05),C精液最低(P0.05);精子DNA完整性检测结果显示,随冷冻时间延长,精子拖尾率显著增加;弱精子症相关蛋白的基因表达趋势并未显现出与体外受精结果相一致的趋势。研究证明,随着冷冻保存时间的延长,精子活力、精子线粒体功能以及精子DNA完整性逐渐下降,最终导致精子受精能力下降。     

LDL对绵羊精子冷冻保存效果的研究

绵羊冷冻精液的受精率低于自然交配,其原因之一可能是在冷冻过程中精子质膜损伤严重造成的.该研究以内蒙古细毛羊为试验动物.在稀释液中以低密度脂蛋白(LDL)代替卵黄.分析了冷冻过程中对精子活率、顶体完整率和质膜完整率的影响.筛选出了最优的LDL稀释液配方,以提高绵羊精液质量,减少精子的损伤,为提高绵羊精子冷冻保存后的受精率提供理论依据.     

冷冻保存对绵羊精子顶体蛋白酶活性的影响

为了检测冷冻保存对绵羊精子顶体蛋白酶活性的影响,试验采用改良的明胶膜片法对冷冻保存前后小尾寒羊精子顶体蛋白酶的活性进行研究。结果表明:冷冻保存后精子顶体蛋白酶阳性反应率[(47.00±2.55)%]和平均成环直径[(23.89±0.22)μm]与冷冻前精子顶体蛋白酶阳性反应率[(77.00±2.00)%]和平均成环直径[(37.26±0.47)μm]相比差异极显著(P<0.01)。说明冷冻保存对绵羊精子顶体蛋白酶活性造成显著性损伤。     

稀释液中添加多不饱和脂肪酸(PUFA)对绵羊精液冷冻效果的影响

以葡3-3稀释液(葡萄糖-柠檬酸盐-卵黄)为基础,添加富含多不饱和脂肪酸(PUFA),且含较高比例DHA和EPA的深海鱼油作为冷冻绵羊精液的新型添加剂,进而研究PUFA对绵羊精子冷冻-解冻过程优良的保护作用.研究结果表明,绵羊精液冷冻稀释液中添加3%PUFA的处理组,同时添加1%VE(V/V)作为抗氧化剂,经冷冻-解冻对精子的损害较小,解冻后活率和顶体完整率分别比对照组1(0)显著提高6%和10%(P＜0.05),精清中LDH酶(乳酸脱氢酶)活力和GOT酶(谷-草转氨酶)活力比对照组1(0)显著降低65%和15%(P＜0.05).     

影响精液冷冻和人工授精效果的因素

通过对精液冷冻保存的细胞反应原理的阐述 ,指出冷冻保护剂甘油对精液保存具有利弊效应 ,提出精子膜脂组成的差异使得不同品种的精子对冷冻损伤的易感性不同。雌性生殖道解剖结构的品种差异 ,精子形态 ,精子运行机制的细微差异 ,人工授精时间及精子的运行能力 ,采精方式等因素对精液冷冻保存和人工授精的成功有决定性作用。研究精子质膜的生物学特性可解决低活力精子的问题 ,然而这并不能解决冷冻后精子质量的个体差异。对精细胞基因组的研究可以找出这些个体的遗传差异。因此 ,冷冻精子和精原细胞 (用于细胞外注射 )的差异已经成为完整基因组问题。     

维生素E对秦川牛冷冻精液的抗氧化保护作用

本试验旨在研究维生素E对秦川牛细管冷冻精液品质和精浆中抗氧化酶活性的影响.在稀释液中分别添加0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg·mL~(-1)的维生素E,将细管冻精解冻(37.5℃,30 s)后用伟力精子分析系统分析精子活力和精子顶体完整率等标准参数,并用相关试剂盒测定精浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、谷胱甘肽还原酶(GR)和过氧化氢酶(CAT)的活性.结果表明:当维生素E添加量为0.04mg·mL~(-1)时,精子活力与对照组相比差异显著(P<0.05),SOD、GSH、CAT 3种酶活性与对照组相比差异显著(P<0.05).当维生素E的添加量为0.06 mg·mL~(-1)时,冷冻-解冻后精子活力显著高于对照组(P<0.05),顶体完整率极显著高于对照组(P<0.01);GR和CAT酶活性与对照组相比均差异显著(P<0.05).当维生素E的添加量为0.08 mg·mL~(-1)时,精子活力、活率及顶体完整率与对照组相比差异显著(P<0.05),GSH与对照相组比差异极显著(P<0.01),GR及CAT与对照组相比差异显著(P<0.05).在冷冻精液稀释液中添加维生素E可以有效提高冷冻-解冻后秦川牛精液品质及精浆中SOD、CAT、GSH、GR酶的活性,稀释液中维生素E的适宜添加量为0.04～0.08 mg·mL~(-1).