斑节对虾溶菌酶基因的原核表达与产物活性检测

采用PCR方法对所克隆的斑节对虾溶菌酶基因的cDNA进行改造，并克隆至含温控启动子PRPL的大肠杆菌表达质粒pBV220，构建斑节对虾溶菌酶表达载体pBV220-lyz。该质粒转化大肠杆菌后经42℃诱导表达。SDS-PAGE电泳表明，表达产物中有16kD左右的特异性条带，与预期斑节对虾溶菌酶分子量相符。薄层扫描显示，重组斑节对虾溶菌酶约占全菌总蛋白的32％，纯化后的重组斑节对虾溶菌酶占全菌可溶性蛋白的90％左右。比浊法检测复性后产物的生物活性，结果表明重组斑节对虾溶菌酶的最适pH为6．0，最适温度为40℃。测定了重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌和几种鱼病原菌菌株的溶菌活力，结果表明，重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌、溶藻弧菌和鳗弧菌有较强的溶菌活力，对爱德华氏菌有一定的溶菌活力，对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌和大肠杆菌DHSa溶菌活力较弱。     

水产养殖动物嗜水气单胞菌病的免疫技术介绍

目前在我国水产养殖动物中普遍发生的嗜水气单胞菌病如对虾细菌性红体病、肠炎病及淡水养殖鱼类暴发性出血病业已查明，其主要病原为嗜水气单胞菌，这类细菌属于弧菌科、气单胞菌属，是养殖水体普遍存在的一种条件性致病菌。嗜水气单胞菌在水温14.0-40.5℃范围内均可繁殖，以28     

黄芩对7种水产动物病原菌的体外抑菌活性研究

采用纸片扩散法和二倍稀释法,利用黄芩水提液对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、哈维氏弧菌、温和气单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌进行最低抑菌质量浓度和最低杀菌浓度的测定。试验结果表明,黄芩对鳗弧菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑菌效果,最低抑菌质量浓度均为15.63 mg/ml,最低杀菌质量浓度分别为31.25、15.63、31.25、31.25 mg/ml;黄芩对大肠杆菌、温和气单胞菌和哈维氏弧菌的抑菌效果弱于副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、金黄色葡萄球菌,最低抑菌质量浓度分别为31.25、62.51、31.25 mg/ml,最低杀菌质量浓度分别为62.5、62.5、125 mg/ml。     

氟苯尼考的体外抑菌作用及其对鲫抗嗜水气单胞菌感染的效果

研究了氟苯尼考对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、鱼链球菌等水产动物主要病原菌的体外抑菌作用,并进一步观察了其对异育银鲫抗嗜水气单胞菌感染的效果。实验结果表明,氟苯尼考对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、鱼链球菌具有良好的抗菌活性,最小抑菌浓度(MIC)分别为1mg/L、0.5mg/L、2mg/L、4mg/L。此外,投喂氟苯尼考的异育银鲫对抗嗜水气单胞菌感染具有良好的效果,以5,10,15mg/kg体重剂量将氟苯尼考拌饲投喂异育银鲫的平均死亡率与对照组相比分别降低了50%,70%,70%。     

流水式养殖动物中弧菌和嗜水气单胞菌的PCR法监测

为了解流水式养殖场养殖动物中弧菌和气单胞菌的感染状况,分别针对霍乱孤菌肠毒素A亚单位(ctxA)基因、0139和01群群特异基因、毒力协同调节菌毛A亚单位基因(tcpA)、中心调节蛋白基因(toxR)、副溶血弧菌不耐热溶血素基因(tlh)、创伤弧菌Vibrio vulnificus溶细胞素基因(vvhA)和嗜水气单胞菌的气溶素基因(aerA)设计引物,建立了聚合酶链式反应(PCR)检测技术,PCR产物经电泳,根据扩增条带的大小和数目,检测和区分霍乱孤菌、嗜水气单胞菌和副溶血孤菌.对南昌沿岸霍乱流行水域及附近养殖场的养殖动物进行了18个月的连续监测,对1 440份水产品的增菌液进行PCR检测,17份检出副溶血弧菌,25份检出霍乱弧菌,创伤弧菌和嗜水气单胞菌均未检出.扩增结果与传统培养检测法的结果一致.监测结果表明,南昌附近地区霍乱弧菌和副溶血弧菌检出率分别为1.74%和1.18%,总体感染状况处于较低水平,但个别养殖品种弧菌检出率较高.     

10株副溶血弧菌多位点序列分型新序列型

2011年浙江某规模化养殖场大面积爆发凡纳滨对虾红体病。病虾未检出白斑病毒与桃拉病毒,在肝胰脏分离得到10株副溶血弧菌,对其进行基于dnaE-gyrB-recA-dtdS-pntA-pyrC-tnaA的多位点序列分型。这些菌株均为新序列型(ST)菌株,其中1株为ST413,7株为ST414,2株为ST415;ST413包含新等位基因型recA-166与tnaA-121,ST414则含有新等位基因型gyrB-219。新等位基因型与新序列型已被多位点序列分型数据库确认并收录。新序列型与已知序列型均只含有3个以下相同的等位基因。结果提示,与此次凡纳滨对虾红体病相关的副溶血弧菌分离株可能经历了较高水平的分子变异,呈现出显著的分子多样性,并非来自单一克隆。本研究代表由副溶血弧菌新序列型引起凡纳滨对虾红体病的首次报道。     

副溶血弧菌对斑节对虾和日本对虾的致病力研究

作为条件致病菌的弧菌,前人对其致病性已作了大量的研究,但不同研究者得出的结果很不一致,有的甚至相互矛盾［1－4］,其差异主要在于浸泡感染能否使健康对虾致病。因此,本实验以不同的感染方式以及不同的实验条件,对斑节对虾体内分离出的副溶血弧菌的致病力进行研究,以便了解对虾弧菌病的发病条件。１材料与方法１.１材料 对虾：体长７～９ ｃｍ的健康斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｎｄｏｎ）和日本对虾（Ｐ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）,直接购于养殖场。 菌株：对虾病原菌一副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐｏｒａ－ｈａｅｍｏｌｙｔｉ…     

稻田养殖的大鳞副泥鳅出血病病原菌的分离鉴定与药敏试验

为确定稻田养殖的大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)出血病病原与防治措施,应用微生物分离技术和分子生物学相关方法,对患出血病的大鳞副泥鳅进行病原菌的分离和鉴定并分析其药物敏感性。从患出血病大鳞副泥鳅中分离到3株优势菌(命名为DLFNQ-1、DLFNQ-2、DLFNQ-3);回归感染实验结果显示,仅DLFNQ-1对大鳞副泥鳅具有致病性,半致死浓度为2.3×10~7 CFU/mL;生理生化试验表明,DLFNQ-1菌株对葡萄糖、阿拉伯糖、氧化酶、七叶灵等反应为阳性,对柠檬酸、尿素酶等反应为阴性,与嗜水气单胞菌的生理生化特性相符;DLFNQ-1菌株的16S rDNA序列与嗜水气单胞菌(JN391411.1)的相似度达到99.7%,N-J进化树显示其16S rDNA与其它嗜水气单胞菌的聚为一支。DLFNQ-1菌株对庆大霉素、妥布霉素这两种抗生素高度敏感,对阿洛西林、哌拉西林、卡那霉素等中度敏感,对青霉素、阿莫西林、四环素等呈现出一定的耐药性。结果表明,引起稻田养殖大鳞副泥鳅出血病的病原为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),稻田养殖时可选用庆大霉素、妥布霉素进行防控。     

山东近海主要养殖动物的弧菌检测与病害防治的研究

本文从１９９９年秋季采集的山东近海鲈鱼、牙鲆、黑鲷、梭子蟹、牡蛎等５种主要养殖动物中分离出１１０个菌株,经形态、生理、生化测定,由计算机数值分类和《伯杰氏细菌鉴定手册》相结合,鉴定出溶藻胶弧菌、副溶血弧菌等９种弧菌属弧菌和１种嗜水气单胞菌。文中尚对养殖生物弧菌病害的防治作了初步探讨。     

虹鳟源嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)分离及16SrRNA基因鉴定

从发病虹鳟(Oncorhynchus mykiss)肾脏组织中分离到了1株优势菌HZS-01,将分离纯化的菌株进行形态、生理生化特征研究和16S rRNA基因鉴定分析。结果显示,HZS-01株菌的形态和生理生化反应结果符合嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的特征。16S rRNA基因序列分析结果显示,分离菌株在系统发育树上与嗜水气单胞菌(A.hydrophila)属同一分支,同源性达99%以上。综合菌株HZS-01的形态学特征和16S rRNA基因分析结果,将其鉴定为嗜水气单胞菌。药敏试验结果表明,分离菌株对强力霉素、诺氟沙星、左氧氟沙星、新生霉素、阿奇霉素敏感度高,对生产用药预防和治疗有实际指导意义。     

山东近海主要养殖动物的弧菌检测与现害防治的研究

本文从１９９９年秋季采集的山东近海鲈鱼、牙鲆、黑鲷、梭子蟹、牡蛎等５种主要养殖动物中分离出１１０个菌株,经形态、生理、生化测定,由计算机数值分类和《伯杰氏细菌鉴定手册》相结合,鉴定出溶藻胶弧菌、副溶血弧菌等９种菌属弧菌１种嗜水气单胞菌。文中尚对养殖生物弧菌病害的防治作了初步探讨。     

弧菌疫苗对斑节对虾和日本对虾免疫预防的作用

尝试使用免疫学的方法来防治对虾弧菌病。将病原副溶血弧菌制成福尔马林灭活疫苗,在实验条件下分别以浸泡、口服和注射等方式接种于斑节对虾和日本对虾,结果发现,在一定的范围内,对虾的免疫保护率随疫苗浓度的增加而升高。在注射接种的方式中,斑节对虾在１９＾９、１０＾８、１０＾７ｃｅｌｌｓ．ｍＬ＾－１的疫苗剂量下的保护力分别为４０％、５０％和４０％,浸泡组（疫苗浓度分别为１０＾８ｃｅｌｌｓ．ｍＬ＾－１、１０＾７     

对虾养殖池副溶血弧菌的分离鉴定及其耐药特征、毒力基因分析

为了解对虾养殖池中副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的耐药性和毒力基因的携带情况,2018年从山东4个地区的对虾养殖池收集分离副溶血弧菌,采用Kirby-Bauer纸片法检测其对12种抗生素的耐药性,用PCR方法检测其携带耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热相关溶血素基因(trh)的情况。从对虾养殖池共分离副溶血弧菌50株。药敏实验结果显示,副溶血弧菌对庆大霉素、硫酸新霉素和氨苄西林的耐药情况最为严重,耐药率分别高达98%、90%和86%,对氟苯尼考、氯霉素、头孢他啶等敏感性较高,耐药率分别为10%、10%和20%。88%的菌株具有多重耐药性。毒力基因检测结果显示,所有菌株均不携带tdh基因,4%的菌株表现为trh阳性。本研究表明,对虾养殖水环境中的副溶血弧菌对抗生素的耐药性较为严重,应加强副溶血弧菌的病原学监测,在养殖过程中合理使用抗生素,以实现水产养殖业健康发展。     

12种中药及其组方对3种水产致病菌的抑菌作用

为了筛选出对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶藻弧菌(V.alginolyticus)有抗菌效果的安全药物,本实验采用琼脂扩散法和二倍稀释法测定了12种中药的抑菌效果,同时以"棋盘法+中药互配"研究了对上述致病菌具有较强协同抑制作用的药物组合。结果显示:12种中药对3种供试病原菌均具有不同程度的抑菌效果,丁香、罗汉果、山茱萸、五味子和八角的抑菌作用较强,其抑菌圈直径达到17～44 mm,最小抑菌浓度(MIC)2.031 mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)4.062 mg/mL;其中,山茱萸的抑菌作用最显著,对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的MIC分别为0.172、0.043、0.086 mg/mL。互配实验结果表明,10种不同的药物组合对嗜水气单胞菌的联合抑菌作用具有显著协同作用;而大部分药物组合对副溶血弧菌的抑菌效果表现为无相关作用,仅五味子和八角对副溶血弧菌的组合效果表现为协同作用。另外,丁香和罗汉果对副溶血弧菌的组合效果表现为拮抗作用。10种中药组合对溶藻弧菌的联合抑菌效果均表现为协同作用。     

凡纳滨对虾细菌性红体病病原的分子特征与耐药性

为探明引起凡纳滨对虾细菌性红体病的病原,从病虾肝胰脏分离得到10株优势菌,经回归感染实验证实其为引起此次红体病的病原菌.Vitek与16S rRNA序列分析显示,分离株均为副溶血弧菌.基于dnaE-gyrB-recA-dtdS-pntA-pyrC-tnaA的多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)表明,这些菌株形成3个新序列型(ST),其中1株为ST413,7株为ST414,2株为ST415;ST413包含新等位基因型recA-166与tnaA-121,ST414则含有新等位基因型gyrB-219.MLST结果提示,这些副溶血弧菌分离株并非来自单一克隆,呈现出一定水平的分子多样性.但这些菌株均含有大流行群(PG)的分子标记toxRS与VPA1168,并具有相同的毒力基因构成(tlh+ tdhtrh-T3SS1+T3SS2-)与耐药谱,其tdh与trh的缺失并未影响细菌对凡纳滨对虾的致病力.综上所述,引起此次凡纳滨对虾红体病的10株副溶血弧菌可能为PG的不同变异株.     

噬菌体生物制剂在草鱼细菌性疾病治疗中的应用实例

正噬菌体是一种可入侵细菌内繁殖,最终使细菌裂解的病毒,又称为细菌的"食者"。国内外很多研究表明,噬菌体对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、副溶血弧菌、维氏气单胞菌、迟缓爱德华氏菌等均有较好的裂解效果,特别对具有多重耐药性的病原菌有较好的裂解效果。本实验室于2018年从中华鳖养殖池塘中分离到一株宽谱噬菌体,经研究发现,它对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌等多种致病菌都具有较好的裂解作用,开始逐渐将其应用在实际生产中。     

辽宁地区河蟹暴发性流行病病原研究

从患暴发性流行病的中华绒螯蟹稚蟹体内分离到５株细菌,其中２株经人工感染试验证实为病原菌,又经形态,生理生化特性测试,鉴定为嗜水气单胞菌和副溶血弧菌,生物型２。药敏试验结果表明,前者对氯霉素,庆大霉素,红霉素等敏感;后者对呋喃唑酮,磺胺,链霉素,卡那霉素,磺胺＋ＴＭＰ等敏感。     

我国养殖对虾细菌性疾病

<正> 我国养殖对虾主要有11种细菌性疾病。 1 红腿病(红肢病) 1.1 病原 均为革兰氏阴性杆菌:①鳗弧菌(V.anguilarum)对VP、阿拉伯糖产酸有反应。②副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)大小为(0.8～1.2)um×(2.2～3.0)um,杆状或弧状,端生鞭毛。③溶藻弧菌(V.alginolyticus)短弧状或杆状,大小为(0.9～1.3)um×(1.6～2.2)um,端生单鞭毛。④嗜水气单胞菌短杆状或椭球状,大小为(0.5～0.7)um×(0.8～1.5)um,有运动力,菌体两端钝圆,端生单鞭毛。     

亚硝酸氮胁迫下噬菌体防治凡纳滨对虾弧菌病

在养殖水体不同亚硝酸氮的条件下,通过对凡纳滨对虾的毒性试验和检测对虾部分免疫指标的变化来研究副溶血弧菌噬菌体对对虾弧菌病的防治效果.试验设置0.005(对照)、0.75、1.50 mg/L和3.00 mg/L 4个不同亚硝酸氮的质量浓度作为胁迫组,并在此基础上加入副溶血弧菌设置为胁迫感染组,加入副溶血弧菌和噬菌体设置为...     

豫北地区主要淡水鱼类感染嗜水气单胞菌的流行病学调查

对豫北地区嗜水气单胞菌引起的细菌性败血病进行流行病学调查,分离鉴定致病性嗜水气单胞菌菌株,并对致病性嗜水气单胞菌菌株进行毒力验证和药敏试验。采集4个养殖场病鱼标本及水样,每月进行流行病学调查,利用生理生化及分子生物学方法检测嗜水气单胞菌的分布状况。结果显示,筛选出52株为嗜水气单胞菌,其中32株为致病性嗜水气单胞菌,20株为非致病性嗜水气单胞菌,且致病性嗜水气单胞菌主要分布在7—9月份,毒力验证试验表明,32株致病性菌株的毒力大小差异明显,筛选出强毒株XDMG(4),为后期试验的疫苗株做准备;药敏试验表明,不同菌株对同一种药物的药敏结果不同,但大部分药物的药敏结果基本一致,70%以上的致病性菌株对头孢哌酮、氟本尼考、菌必治、阿米卡星等抗菌药物表现为高度敏感,对青霉素类药物表现为高度耐药性,耐药率达100%,对氨基糖苷类(不包括阿米卡星)、磺胺类、四环素等药物呈现不同程度的耐药性,具有多重耐药性。本试验旨在丰富本地区的鱼类细菌性败血病的病原资料,并为该菌引起的人类疾病的防控提供科学依据。