冻融辅助碱提法提取蛹虫草蛋白的条件优化

以蛹虫草子实体超微粉为原料,采用冻融辅助碱提法提取蛹虫草中的蛋白,设计正交试验优化工艺条件,利用氨基酸分析仪对其进行初步营养分析。结果表明,最佳提取工艺参数为料(g)液(mL)比1∶25,-20℃反复冻融3次,pH 12,提取温度40℃,提取时间3 h,该条件下蛹虫草蛋白提取率为35.34%,初步营养分析所提取蛋白氨基酸种类丰富,必需氨基酸占比高,具有较好的营养价值。     

蛹虫草高产菌丝体蛋白菌株的ARTP诱变选育

目的:筛选高产蛋白蛹虫草菌株,降低食用菌蛋白(蛹虫草蛋白)的生产成本。方法:优化蛹虫草原生质体制备、再生等条件,并采用ARTP诱变系统诱变原生质体,确定最佳的诱变条件。结果:最佳的诱变条件为0.6 mol/LNaCl溶液作为原生质体的渗透压稳定剂,ARTP处理240 s,菌株致死率达到93%。诱变、筛选得到高产蛋白突变菌株,菌丝体蛋白产量比出发菌株提高了20%以上,连续6次转接遗传性状稳定。200 L罐工业化发酵试验,菌丝体蛋白产量达到6.5 g/L。选育的菌株具有非常好的工业化生产应用潜力。     

蛹虫草抽屉式培养架的设计及应用效果

介绍了一种抽屉式培养架的设计和配套的蛹虫草子实体培养方法并探讨了其在蛹虫草子实体生产中的应用效果。结果表明该设计及配套培养方法结合室内层架式栽培方式与传统蛹虫草培养方法比较，具有可充分利用培养空间、保持良好的通风和采光条件的优点，还可简化生产流程、减小劳动强度、提高生产效率、节约生产场地、降低生产成本，避免了生产过程中的交叉污染。     

蛹虫草菌丝体循环富硒法的建立及其硒多糖抑癌作用初探

研究富硒蛹虫草菌丝体循环富硒作用及该法获取的硒多糖对人宫颈癌细胞Hela的抑制作用.采用循环富硒法获得蛹虫草富硒菌丝体并制备硒多糖,经硒定量和多糖含量测定后采用MTT.法检测硒多糖与正常蛹虫草多糖(12.5、25、50、100、200μg/mL)作用Hela细胞72 h后细胞存活率的变化.循环富硒法可有效促进蛹虫草菌丝体对硒的富集,硒含量为680.2μg/g,多糖含量为47.4%;硒多糖与正常蛹虫草多糖(100μg/mL)对Hela细胞的抑制率分别为91.87%和77.98%.其IC50分别为18.5μg/mL和48.5μg/mL.循环富硒法可有效制备富硒蛹虫草菌丝体和硒多糖,循环富硒法获取的硒多糖能有效的抑制Hela细胞的增殖.     

蛹虫草高产菌株人工栽培条件的优化

采用单因素试验考察了蛹虫草诱变菌株Z9人工栽培的最佳条件，并探索植物生长激素对诱变菌株生长的影响。试验结果表明：蛹虫草诱变菌株栽培的最佳的原料一大米蛹粉比（g/g）为100：15，原料含水量以65％为佳，最适子实体生长温度为23℃，最适pH为7．5，在500lx的散射光照时产量最高为5．13g；喷洒赤霉素能有效促进蛹虫草诱变菌株Z9的生长，培养26d子实体产量比未喷洒赤霉素提高7．7％。     

蛹虫草不同栽培菌株产虫草素及腺苷差异性研究

目的：测定不同栽培菌株蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的含量,为人工蛹虫草的质量评价提供依据。方法：采用高效液相色谱法测定11个栽培菌株人工蛹虫草样品中虫草素和腺苷的含量。结果：所测定的不同栽培菌株人工蛹虫草的腺苷含量为0.1%-0.17%,虫草素含量为0.06%-0.39%,表明蛹虫草不同栽培菌株的虫草素含量变化较大,腺苷含量则相对稳定。     

蛹虫草对果蝇紫外辐照的保护作用

以不同含量的蛹虫草培养基饲养经不同时间紫外辐照的果蝇,观察统计其寿命及生殖力。结果表明:蛹虫草含量为0.2%的培养基对紫外辐照果蝇的延寿作用最佳,该培养基也能显著提高紫外辐照20min果蝇的生殖力;而紫外辐照40min的果蝇,蛹虫草含量为0.1%的培养基可显著提高其生殖力,但随培养基中蛹虫草浓度的增加生殖力下降。     

北虫草怎么吃好呢？

北虫草即蛹虫草，其子实体可以泡茶，用开水冲泡，5 min后饮用，多次冲泡，无黄色时，将蛹虫草吃掉，有蘑菇鲜味。
　　也可以泡酒：38°~56°白酒5 kg，加蛹虫草100~250 g，浸泡7天后，即可饮用。黄酒5 kg，加蛹虫草100~150 g，浸泡15天后，即可饮用。     

适于作为食品生产原料的蛹虫草栽培基质的优化

为拓宽蛹虫草栽培基质为原料开发食品的应用前景,研究了栽培蛹虫草基础基质、碳源、氮源、添加物对蛹虫草生长的影响,并通过正交试验优化栽培基质配方。最终确定基础基质的较优配比为大米80%,黄豆20%,以1∶1.2的料液比添加的营养液中,含绵白糖12 g/L,蚕蛹粉40 g/L,VC 0.1 g/L,VB_10.01 g/L。在不影响蛹虫草产量、保证品质的前提下,提高了栽培基质的食用安全性。     

蛹虫草类胡萝卜素酶法提取和TLC法纯化研究

为了开发一种条件温和、安全环保的方法来分离纯化水溶性蛹虫草类胡萝卜素,通过试验筛选得到辅助提取蛹虫草类胡萝卜素的最佳酶为脂肪酶,并优化形成最佳工艺。蛹虫草子实体粉与水1∶4 (m∶v)混匀,加入0.1%脂肪酶,于pH 8～8.5,50°C条件下酶解30 min;将酶解液的乙醇浓度调至60%,室温下静置提取90 min;离心收集上清液。用该工艺提取1次蛹虫草类胡萝卜素的含量为(1 747.8±17.6)μg·g~(-1),显著高于直接浸提法的[(652.3±24.9)μg·g~(-1)]和超声辅助提取法[(661.5±41.9)μg·g~(-1)],P0.01。通过试验筛选得到蛹虫草类胡萝卜素TLC纯化法的最佳展开剂配比为:0.5%乙酸水溶液∶乙醇∶正丁醇∶乙酸乙酯=12∶8∶24∶36。用该展开剂能分离形成4个清晰的条带。经HPLC对比分析,4个条带的溶出液在出峰时间和顺序上与文献报道的4种蛹虫草类胡萝卜素Cordyxanthin-Ⅰ、Cordyxanthin-Ⅱ、Cordyxanthin-Ⅲ、Cordyxanthin-Ⅳ分别一一对应,峰面积百分比分别为76.10%、95.90%、97.96%、81.53%。     

响应面法优化蛹虫草液体发酵配方及条件的研究

蛹虫草是一种珍稀的药食两用真菌,为提高其菌丝体的液体发酵效率,首先通过单因素试验确定了蛹虫草液体发酵的最优碳源、氮源及适宜培养的pH、温度、装液量和转速6个因素。然后采用Plackett-Burman试验设计,确定葡萄糖、牛肉膏、温度是影响蛹虫草液体发酵菌丝体生物量的关键因素。利用响应面法设计三因素三水平试验,最终获得蛹虫草菌丝体液体发酵的最佳配方及条件为：牛肉膏13.34g/L、葡萄糖20.00g/L、MgSO₄ 1.5 g/L、KH₂PO₄ 1.5 g/L,pH 6.5,摇床转速150 r/min,温度27℃。验证试验表明,优化后条件培养的菌丝生物量可达1.489 g/105 mL,是优化前的2倍,与模型预测值基本一致,优化效果较好,可为蛹虫草液体深层发酵培养及后续工厂化生产提供技术参考。     

人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸成分测试分析

通过对人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸的测试分析，结果表明：在野生蛹虫草中含有的１７种氨基酸，在人工培育蛹虫草中几乎都含有，并且在以蚕蛹为培养基质生长的蛹虫草中氨基酸总量及人体必需的八种氨基酸总量均高于野生型及其它人工培育型的蛹虫草。     

发酵蛹虫草产品的研制

以液体发酵蛹虫草分离得到的发酵液和菌丝体为原料,添加辅料调味,根据其不同的理化性质分别开发蛹虫草产品-虫草饮料、虫草酱,并提出工艺流程和操作要点.该产品营养丰富、成本低廉、口感好、方便食用,符合相关卫生标准.蛹虫草液体发酵技术成熟,发酵周期短,产品制作工艺简单,易于掌握,有较大的市场潜力和发展前景.     

喂食蛹虫草的小鼠血清对小鼠脾淋巴细胞增殖及活化的影响

探讨喂食蛹虫草(Cordyceps militaris)的小鼠血清对脾淋巴细胞的影响。将20只雄性BALB/c小鼠分为两组。蛹虫草组用蛹虫草水提物(10 mL/kg·d),对照组用等体积纯净水,连续灌胃30 d。收集上述两组小鼠血清,通过小鼠脾淋巴细胞体外增殖实验检测不同浓度(5%、10%、20%)血清对小鼠脾淋巴细胞增殖和活化的影响。采用流式细胞术检测T细胞(CD~(3+))、B细胞(CD~(19+))、辅助性T细胞(helper T,Th)(CD~(3+)CD~(4+))、细胞毒性T细胞(cytotoxic T cell,Tc)(CD~(3+)CD~(8+))在淋巴细胞中所占百分比,以及细胞表面共刺激因子CD28和早期活化蛋白CD69的表达量。采用酶联免疫吸附法测定小鼠脾淋巴细胞上清液中干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)的表达量。结果表明:与对照组相比,培养基中添加10%和20%喂食蛹虫草的小鼠血清可刺激脾淋巴细胞增殖,刺激指数分别为(105.25±2.40)%和(134.54±5.99)%;喂食蛹虫草的小鼠血清可明显提高小鼠脾淋巴细胞中T细胞和B细胞的百分比,与对照组相比,添加10%和20%喂食蛹虫草的小鼠血清使T细胞在淋巴细胞总数中的百分比分别提高了(3.00±0.20)%和(7.20±0.21)%,添加20%喂食蛹虫草的小鼠血清使B细胞的百分比提高了(8.53±0.25)%;喂食蛹虫草的小鼠血清可促进Th细胞、Tc细胞分化,上调T细胞及其亚群中CD28分子的表达,提高T细胞和B细胞中CD69分子的表达,促进淋巴细胞活化,还可显著促进小鼠脾淋巴细胞中免疫调节因子IFN-γ和IL-2的表达;添加20%喂食蛹虫草的小鼠血清IFN-γ表达量为(101.92±12.76)ng/L,添加10%和20%喂食蛹虫草的小鼠血清IL-2表达量分别为(369.56±30.98)ng/L和(417.69±15.94)ng/L。     

蛹虫草菌素提取工艺条件的研究

以蛹虫草子实体为原料,用超声波辅助法提取虫草素,以料液比、提取温度、提取时间和超声波功率为试验因素,通过对比及正交试验,优化蛹虫草菌素提取工艺条件。结果表明,超声波辅助提取蛹虫草菌素的最佳工艺条件为:料液比1:50,提取温度80℃,超声波功率11 0 W,提取时间60 min。在此工艺条件下,提取虫草素的含量为8.568 mg/g。     

蛹虫草对金属锌的耐受性与富集特征

以蛹虫草为试材,通过在培养基中添加不同浓度的锌,利用罗丹明B分光光度法测定菌丝体和子实体锌含量,蒽酮-硫酸法和DNS法测定子实体多糖和还原糖含量,探究了锌对蛹虫草菌丝体、子实体生长和生理活性的影响,以期为富锌蛹虫草培育提供参考依据。结果表明:锌对蛹虫草菌丝体、子实体均有一定的影响,适量浓度促进生长,过高则抑制生长,最适合蛹虫草生长的培养基锌浓度为678 mg·kg^-1,该浓度下蛹虫草子实体生长良好无退化现象,干质量出现最大值为3.56 g,多糖含量为7.32%,锌富集率达6.45%。     

运用基因枪法进行蛹虫草遗传转化的研究

采用蛹虫草[Cordyceps militaris（L.）Link]野生型菌株CM01为供试材料,以金粉包裹质粒pDHt-gpdA-GFP-bar,运用基因枪法转化,经草铵膦抗性筛选,最终在靶距离6 cm或9 cm,氦气压力7.58 × 106 Pa或8.96 × 106 Pa条件下,获得2个遗传稳定的转化子Gfp2与Gfp3,转化效率为0.4 cfu ? μg-1。PCR鉴定与Southern杂交分析显示,草铵膦抗性基因Bar已经以单拷贝或者多拷贝方式整合到蛹虫草转化子的基因组中。蛹虫草转化子的菌丝在荧光显微镜下可以观测到绿色荧光,表明载体携带的绿色荧光蛋白基因在蛹虫草转化子中得到表达。研究结果表明可以把基因枪法应用于真菌蛹虫草,建立了一种简便有效的遗传转化方法,而转化效率需要通过优化基因枪参数设置、受体材料制备等途径进一步提高。     

不同来源蛹虫草核苷类成分分析

采用超高效液相色谱法测定了不同来源蛹虫草样品中的9种核苷类成分,包括尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷、2’-脱氧腺苷、虫草素,使用统计产品与服务解决方案(19.0)和中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012)软件,分析不同来源蛹虫草核苷类成分的含量差异。结果表明,不同来源蛹虫草9种核苷类成分总含量在4 488.36μg·g~(-1)~10 294.16μg·g~(-1),平均值为8 115.06μg·g~(-1),变异系数为15.33%;蛹虫草中9种核苷类成分含量高低依次为腺苷、鸟苷、尿苷、虫草素、肌苷、腺嘌呤、尿嘧啶、 2’-脱氧腺苷、胸苷,其中,腺苷、鸟苷、尿苷和虫草素是蛹虫草中主要的核苷类成分;聚类分析结果显示,不同来源蛹虫草中核苷类成分的含量具有一定的地理相关性。指纹图谱相似度计算结果显示, 30个样品间指纹图谱相似度在0.69~0.99,表明不同来源蛹虫草核苷类成分相似度较高,但仍然存在一定的差异。     

蛹虫草菌丝体粉营养成分及挥发性气体成分分析

探究蛹虫草(Cordyceps militaris)菌丝体粉的营养成分和挥发性气体成分,为其进一步开发提供一定的理论依据。采用失重法检测灰分和水分含量,脂肪、蛋白质、总糖含量测定分别采用索氏提取法、凯氏定氮法和蒽酮—硫酸比色法,气质联用仪分析挥发性气体成分。结果显示:蛹虫草菌丝体粉中水分、灰分、蛋白质、脂肪、总糖的含量分别为5.73%、2.54%、3.82%、7.12%、67.58%;挥发性气体成分共鉴定出44种,其中醛类物质14种,占峰面积的47.53%,是蛹虫草菌丝体粉中主要的风味物质。     

蛹虫草甜米酒的生产工艺研究

以转色优质蛹虫草菌丝体及糯米为主要原料,按照单因子对照原则,参考一般甜米酒制作方法,以虫草素含量、虫草酸含量、总糖含量、氨基酸含量、酒精度、乙酸乙酯含量、总酸含量、感官评价等为主要指标,比较和优化了优质蛹虫草甜米酒的发酵工艺及主要技术参数。结果表明:蛹虫草与糯米最佳质量比为6∶80,最佳甜酒曲浓度为1.5%,最佳发酵时间为28h,最佳发酵温度为30℃,最佳终止发酵方法为微波灭菌法;对最佳发酵条件生产蛹虫草甜米酒的口感、风味及营养保健成分等进行感官评价及常规理化分析表明,该蛹虫草甜米酒在充分保留传统甜米酒风味的同时,营养及保健价值明显提高。