LRH-1的小分子激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞类固醇合成基因表达的影响

LRH-1(nuclear receptor subfamily 5, group A, member 2),是核受体家族的成员之一,作为转录共激活子调控相关基因的表达,对类固醇激素的分泌及细胞代谢有重要影响。为探究LRH-1对牛卵巢颗粒细胞类固醇激素分泌的影响,以体外培养的牛卵巢颗粒细胞为试验材料,使用不同浓度(20μM、50μM、100μM、150μM、200μM)LRH-1的激活剂DLPC激活LRH-1的表达,通过免疫荧光、免疫组织化学和RT-qPCR方法,检测LRH-1在牛卵巢组织中的表达定位及其对牛卵巢颗粒细胞类固醇合成相关基因表达水平的影响。试验结果表明,LRH-1在牛卵巢颗粒细胞中高度表达,50μM DLPC可显著提高STAR、LRH-1、CYP17基因的表达,20μM DLPC可显著抑制CYP11基因的表达。研究结果揭示了LRH-1表达的上调可以显著提高类固醇激素合成相关基因的表达。     

促卵泡素对体外培养牛卵泡类固醇合成相关基因表达的影响

本研究旨在探究促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)处理对体外培养的牛有腔卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇激素合成相关基因表达的影响。采集牛卵巢表面直径9～11 mm的有腔卵泡,用含不同浓度FSH的DMEM/F12体外培养牛有腔卵泡24 h。提取卵泡颗粒细胞、膜细胞RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测卵泡颗粒细胞、膜细胞中类固醇激素合成酶基因(CYP11A1、3β-HSD、CYP17A1、CYP19A1、17β-HSD)和促性腺激素受体基因(FSHR、LHR)的表达水平。结果显示,FSH处理上调了颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP19A1基因表达,其中,25 ng/mL FSH处理极显著上调了CYP11A1基因表达(P0.01),10 ng/mL FSH处理显著上调了3β-HSD基因表达(P0.05),50 ng/mL FSH处理显著上调了CYP19A1基因表达(P0.05);50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达(P0.05;P0.01),但在10和25 ng/mL FSH处理组中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达显著或极显著下调(P0.05;P0.01)。对FSHR、LHR基因研究结果显示,不同浓度FSH处理对颗粒细胞中FSHR、LHR基因的表达均无显著影响(P0.05),只有25和50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中LHR基因表达水平(P0.05;P0.01),且不同处理组之间膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达变化与LHR基因表达变化趋势较一致。结果表明,FSH处理可提高牛有腔卵泡颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达,膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因对LH的刺激更敏感,FSH可能通过影响LHR基因的表达来调节膜细胞中类固醇合成酶基因的表达。     

脱氢表雄酮对大鼠颗粒细胞激素生成的作用

为了探讨脱氢表雄酮(DHEA)对大鼠原代卵巢颗粒细胞激素生成及相关甾体生成酶的影响,采用机械法分离培养大鼠原代卵巢颗粒细胞,放射免疫分析法检测培养液中雌二醇、孕酮和睾酮的含量;Real-time PCR法检测类固醇代谢途径中3β-羟基固醇脱氢酶(3β-HSD)、17β-羟基固醇脱氢酶(17β-HSD)、CYP450 mRNA的表达变化。结果显示:10μmol/L DHEA处理48 h后可显著促进大鼠原代卵巢颗粒细胞雌二醇(P<0.05)、孕酮(P<0.01)和睾酮的分泌量(P<0.01);显著促进3β-HSD(P<0.01)和17β-HSD(P<0.05)mRNA的表达,CYP450 mRNA表达略有降低,但无统计学意义。说明外源性DHEA处理可能通过调节3β-HSD、17β-HSD和CYP450等相关酶的基因表达,进而影响大鼠原代卵巢颗粒细胞雌激素和雄激素的分泌。     

α-亚麻酸对猪颗粒细胞胆固醇合成、类固醇激素合成和凋亡的影响

本试验旨在探究α-亚麻酸(ALA)对猪颗粒细胞(GCs)胆固醇合成、类固醇激素合成和凋亡的影响。试验收集150日龄健康母猪卵巢GCs，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot和流式细胞术探究ALA对猪GCs胆固醇合成、类固醇激素分泌及其凋亡的影响。结果表明：1)50μmol/L ALA处理极显著抑制了雌二醇(E₂)的合成(P<0.01)，但对孕酮(P₄)的合成没有显著影响(P>0.05);2)50μmol/L ALA处理显著下调了胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1)和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的mRNA相对表达量(P<0.05)，同时显著下调了CYP11A1和类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)的蛋白相对表达量(P<0.05);3)50μmol/L ALA处理显著下调了关键胆固醇合成基因3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、清道夫受体B类成员1 (SCARB1)和胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)的mRNA相对表达量(P<0....     

FSH及Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞的增殖及雌激素分泌的影响

旨在研究Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖及雌激素分泌的影响,探究其是否与促卵泡素(Follicular stimulating hormone,FSH)有关。在添加有FSH以及不同浓度Wnt信号通路抑制剂IWR-1的培养基中培养绵羊卵巢卵泡颗粒细胞168h,利用Guava ViaCount?Reagent测定细胞数目的变化,利用绵羊ELISA试剂盒检测雌激素浓度的变化,利用qRT-PCR检测FSH靶基因CYP19和CCND2的相对表达量差异。结果表明,无论有无FSH,抑制剂IWR-1使颗粒细胞数目显著减少(P0.05);当有FSH时,抑制剂IWR-1的添加导致雌激素浓度显著降低(P0.05)。IWR-1的浓度为1.0μmol·L-1时,对颗粒细胞的抑制效果最明显。IWR-1还导致CYP19和CCND2mRNA的表达量降低。综上表明,Wnt信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞的生物学功能具有促进作用,并且这种促进作用可能与FSH有关。     

抑制素对绵羊颗粒细胞雌激素和孕酮分泌及相关基因表达的影响

本试验旨在研究RNA干扰抑制素α亚基(Inhibinα-subunit,INHα)基因和添加抑制素A(InhibinA)对绵羊颗粒细胞雌激素(Estrogen,E2)和孕酮(Progesterone,P)分泌及相关基因表达的影响,以探索抑制素在绵羊颗粒细胞E2和P分泌中的作用。从1.0~1.5岁小尾寒羊的卵泡(3~7mm)中分离培养颗粒细胞,分为2个处理组:干扰组(脂质体介导法转染颗粒细胞)和InhibinA添加组(200ng·mL~(-1))。利用ELISA试剂盒检测E2和P的分泌,荧光定量RT-PCR检测E2和P的分泌相关基因(CYP11、3β-HSD和CYP19)的表达量。结果表明,与对照组相比,干扰组siRNA转染颗粒细胞48h后,INHα基因的抑制率达87%,E2和P的分泌量显著降低(P0.05);InhibinA添加组E2和P的分泌水平显著升高(P0.05);干扰组3β-HSD和CYP19的mRNA表达量显著降低(P0.05),CYP11的表达量显著升高(P0.05);InhibinA添加组CYP19、CYP11和3β-HSD的mRNA表达水平均显著升高(P0.05)。综上表明,抑制素在绵羊颗粒细胞中起关键调控作用,通过调节绵羊颗粒细胞类固醇激素的分泌参与调控卵泡发育和排卵过程。     

细胞自噬相关信号通路分子在猪卵巢黄体形成与退化过程中的表达

为了研究细胞自噬相关信号通路分子在猪卵巢黄体发育与退化过程中的表达,本试验以猪卵巢为对象,分别采集卵泡期卵巢(F)、早期黄体(E)、中期黄体(M)和晚期黄体(L),应用Western blot检测LC3-B、p-Akt、Akt、p-JAK2、JAK2、p-STAT3及STAT3的表达,应用免疫组织化学技术检测STAT3在卵巢中的细胞定位。Western blot结果显示,LC3-B在早期及中期黄体表达量较高(P0.01);p-Akt在卵泡期卵巢的表达量高于黄体期(P0.05),且黄体发育的不同时期差异不显著(P0.05);p-JAK2在早期黄体表达量较高(P0.05);p-STAT3在晚期黄体表达量显著升高(P0.01)。Akt、JAK2与STAT3的表达量在整个卵巢周期无显著差异(P0.05)。免疫组化结果显示,STAT3主要定位在猪卵巢卵泡的颗粒细胞、膜细胞和黄体的类固醇生成细胞中。结果表明,猪黄体细胞的自噬可能受多种信号通路的协同调控,为进一步研究黄体形成和退化的分子机制提供依据。     

Wnt/β-catenin通路激动剂-LiCl对3T3-L1细胞Villin 2表达的影响

试验旨在探究Wnt/β-catenin通路激动剂-Li Cl对3T3-L1细胞Villin 2表达的影响,明确Villin 2在脂肪生成中是否与Wnt/β-catenin信号通路相关。培养3T3-L1细胞,分别设置对照组和20 m M Li Cl处理组,油红O染色观察3T3-L1细胞分化的形态变化;荧光定量(PCR)检测Villin 2 mRNA水平的变化。结果表明:20 m M Li Cl处理组相对于对照组显著抑制3T3-L1细胞分化;在3T3-L1细胞分化过程中和完全分化后20 m M Li Cl处理组的Villin 2 mRNA相对表达量都显著高于对照组(P0.05)。因此,20 m M Li Cl能在3T3-L1细胞中成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Villin 2在3T3-L1细胞分化过程中和完全分化后都是作为一个下调基因起抑制脂肪生成的作用,并且Villin 2与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

p38MAPK抑制剂SB202190对猪颗粒细胞活力的影响

p38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated potein kinase,MAPK)家族成员,是细胞内重要的信号转导系统之一,对细胞的生长、分化、凋亡具有重要影响及作用。为探究p38MAPK信号对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响及其可能作用机制,研究以体外培养的猪卵巢颗粒细胞为模型,在培养液中分别添加浓度为0、1、10、20μmol/L的p38MAPK特异性抑制剂SB202190。以免疫细胞化学染色法鉴定体外培养猪卵巢颗粒细胞,通过CCK-8法检测其增殖活性,应用Annwxin V-FITC/PI及细胞周期试剂盒染色检测细胞凋亡及细胞周期状况,以实时定量PCR检测猪卵巢颗粒细胞中凋亡、周期相关基因的相对表达水平。结果表明,添加p38APK信号抑制剂SB202190可抑制体外培养猪卵巢颗粒细胞的增殖活性,20μmol/L处理组与其他组相比呈显著性差异(P0.05);20μmol/L SB202190添加处理未显著影响颗粒细胞的凋亡水平,而该浓度SB202190可将大部分细胞阻滞在G1/G0期,与对照组相比差异显著(P0.05);基因相对表达水平检测显示SB202190添加可抑制Fas、FasL、CDK-4的表达,而同时促进Bcl-2、Bax、P27的表达(P0.05),对Caspase-3的表达没显著影响(P0.05)。综上所述,SB202190通过调控猪卵巢颗粒细胞的周期来影响其增殖作用,但对其凋亡没有影响。     

甲氨蝶呤通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导小鼠肠道损伤

研究旨在探讨甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)对小鼠肠上皮更新的影响及其机理。选用体重相近的5～6周龄的昆明小鼠64只,随机分为两组,每组设32个重复,每个重复1只小鼠,连续2 d分别腹腔注射生理盐水和50 mg/kg BW MTX溶液,并于注射后72 h处死小鼠;同时用0.025、0.05、0.10μM和0.20μM MTX处理小鼠结肠癌细胞系CMT-93。结果表明,MTX可显著降低小鼠平均日采食量、日饮水量和日增重(P0.05);显著降低十二指肠、空肠和回肠肠重(P0.05),其中空肠肠重降低幅度最大,达到28.14%;MTX导致小鼠空肠绒毛顶部上皮细胞脱落,绒毛高度显著降低(P0.05),固有层裸露,隐窝增生明显,隐窝深度显著增加(P0.05),绒毛高度/隐窝深度比值显著降低(P0.05);空肠中ZO-1、Occludin、β-catenin和PCNA蛋白质表达显著降低(P0.05),Caspase-3蛋白质表达显著增加(P0.05);0.025、0.05、0.10μM和0.20μM MTX处理CMT-93细胞24 h即可显著抑制其增殖活性(P0.05),且抑制效果呈剂量依赖性;0.025μM和0.05μM MTX显著降低CMT-93细胞跨膜电阻值(P0.05)和ZO-1、Occludin、β-catenin、PCNA蛋白质表达(P0.05),增加Caspase-3蛋白质表达。结果提示,MTX降低Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制肠上皮细胞增殖,促进其凋亡,破坏肠道屏障功能,诱导肠道结构损伤。     

甲硫脑啡肽对脂多糖作用下奶牛子宫内膜上皮细胞增殖的影响

为探究甲硫脑啡肽(methionine enkephalin,MENK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)增殖的影响,利用CCK-8检测细胞增殖活性变化,荧光定量PCR检测细胞增殖相关基因(EGFR、VEGF、TGF-β3、FGF-2)表达,蛋白免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路关键因子、c-Myc和Cyclin D1表达。结果显示,LPS单独作用时,细胞活性增强(P0.05),细胞增殖相关基因表达升高(P0.05),β-catenin、c-Myc、Cyclin D1表达升高(P0.05)。MENK能显著抑制LPS诱导的细胞活性(P0.05)、细胞增殖相关因子及Wnt/β-catenin通路关键蛋白的表达(P0.05);非选择性阿片受体拮抗剂纳洛酮可阻断MENK对细胞活性、细胞增殖相关因子和通路的抑制效应。MENK可抑制LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞的增殖作用,该机制很可能由阿片受体介导。     

α-亚麻酸对水牛卵巢颗粒细胞体外培养的影响

【目的】研究α-亚麻酸(ALA)对水牛卵巢颗粒细胞体外培养过程中细胞活力、细胞凋亡、细胞周期相关基因表达及激素分泌功能的影响。【方法】为了筛选体外培养水牛卵巢颗粒细胞ALA最适浓度,在96孔板中加入起始细胞数量为1×10⁴/mL的水牛卵巢颗粒细胞,细胞贴壁12 h后更换含0(对照组)、10、50、100、200μmol/L ALA的培养液,在相同条件下处理24 h,用CCK-8进行细胞活力检测,筛选出最适处理浓度,并用于后续试验。后续试验分为对照组(0μmol/L)和处理组(50μmol/L)两组,用实时荧光定量PCR检测颗粒细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白1(p21)和增殖细胞核抗原(PCNA)基因的相对表达量,用免疫荧光对颗粒细胞中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和细胞周期相关蛋白p21进行荧光检测和定量分析,用ELISA法检测培养液中水牛颗粒细胞分泌的雌二醇(E₂)和孕酮(P₄)含量。【结果】与对照组相比,水牛卵巢颗粒细胞经ALA处理2...     

WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞的表达及功能研究

旨在探究WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞(GCs)中的表达及功能。本研究选取4～6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,免疫组化技术检测WNT2蛋白在卵泡中的表达定位;qRT-PCR及Western blot技术检测其在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达差异;siRNA沉默GCs中的Wnt2基因后,qRT-PCR技术检测Wnt2基因及参与经典WNT信号通路关键基因CTNNB1的相对表达量,并测定GCs凋亡情况。结果表明:1)WNT2蛋白在绵羊卵泡内膜细胞、颗粒细胞以及卵丘细胞内均有表达。2)qRT-PCR及Western blot结果基本一致,均表明Wnt2 mRNA及蛋白在不同发育阶段卵泡颗粒细胞表达差异显著(P0.05),且在大卵泡颗粒细胞内表达量显著高于中卵泡颗粒细胞(P0.05),中卵泡颗粒细胞内表达量显著高于小卵泡颗粒细胞(P0.05)。3)基因沉默后,沉默组Wnt2和CTNNB1的表达量均显著低于无义序列siRNA组(NC组)以及空白对照组(P0.05),而Wnt2基因沉默组细胞凋亡率显著高于其他两组(P0.05)。综上表明,WNT2是通过WNT2/CTNNB1信号通路促进绵羊卵泡颗粒细胞生物学功能的。     

激活Wnt/β-catenin信号通路抑制猪AMSCs向脂肪细胞分化

本研究以猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)为材料,通过LiCl对AMSCs细胞中Wnt/β-catenin信号通路第二信使β-联蛋白(β-catenin)的稳定作用,探讨体外激活Wnt/β-catenin信号通路对猪AMSCs向脂肪细胞分化的作用及其初步机制。应用细胞免疫化学染色鉴定AMSCs细胞表面分子CD44和CD105的表达;油红O染色法检测AMSCs成脂分化潜能;采用半定量RT-PCR及Westernblot等技术分析Wnt/β-catenin通路各因子及脂肪细胞分化转录因子的表达。结果显示,猪AMSCs表达CD44和CD105,并具有多向分化潜能;25mmol·L-1的LiCl处理AMSCs后,细胞中β-catenin蛋白表达明显增强;激活Wnt/β-catenin信号通路后,猪AMSCs在成脂诱导剂作用下向脂肪细胞分化的数目减少、细胞内甘油三酯含量降低,脂肪细胞分化转录因子C/EBPα和PPARγ的表达受到抑制。以上结果表明,激活Wnt/β-catenin信号通路能明显抑制猪AMSCs向脂肪细胞分化,其抑制作用可能是通过下调脂肪细胞分化转录因子PPARγ和C/EBPα的表达来实现的。     

T-2毒素对大鼠卵巢颗粒细胞分泌激素的影响

为了研究T-2毒素对卵巢颗粒细胞(GC)分泌功能的影响及其作用机制.通过其染毒体外培养的大鼠GC,采用MTT法检测细胞相对活力、ELISA法检测收集培养液中孕酮(P)和雌二醇(E2)的含量、半定量RT-PCR检测激素分泌相关调控基因FSHR、StAR、P450scc和P450arom mRNA的表达、免疫细胞化学染色法检测细胞中特异的卵泡刺激素受体(FSHR)表达,结果显示,T-2毒素可显著降低体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞活力,影响其激素的分泌,而转运蛋白StAR则可能是T-2毒素影响颗粒细胞激素分泌的关键位点之一.     

促卵泡素对体外培养牛卵泡类固醇合成相关基因表达的影响

本研究旨在探究促卵泡素（follicle stimulating hormone,FSH）处理对体外培养的牛有腔卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇激素合成相关基因表达的影响。采集牛卵巢表面直径9~11 mm的有腔卵泡,用含不同浓度FSH的DMEM/F12体外培养牛有腔卵泡24 h。提取卵泡颗粒细胞、膜细胞RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测卵泡颗粒细胞、膜细胞中类固醇激素合成酶基因（CYP11A1、3β-HSD、CYP17A1、CYP19A1、17β-HSD）和促性腺激素受体基因（FSHR、LHR）的表达水平。结果显示,FSH处理上调了颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP19A1基因表达,其中,25 ng/mL FSH处理极显著上调了CYP11A1基因表达（P<0.01）,10 ng/mL FSH处理显著上调了3β-HSD基因表达（P<0.05）,50 ng/mL FSH处理显著上调了CYP19A1基因表达（P<0.05）;50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达（P<0.05;P<0.01）,但在10和25 ng/mL FSH处理组中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达显著或极显著下调（P<0.05;P<0.01）。对FSHR、LHR基因研究结果显示,不同浓度FSH处理对颗粒细胞中FSHR、LHR基因的表达均无显著影响（P>0.05）,只有25和50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中LHR基因表达水平（P<0.05;P<0.01）,且不同处理组之间膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达变化与LHR基因表达变化趋势较一致。结果表明,FSH处理可提高牛有腔卵泡颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达,膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因对LH的刺激更敏感,FSH可能通过影响LHR基因的表达来调节膜细胞中类固醇合成酶基因的表达。     

食欲素A对绵羊卵巢颗粒细胞孕酮相关蛋白表达的影响

为探寻绵羊卵巢颗粒细胞分泌孕酮与激素合成相关基因之间的关系,体外培养了绵羊卵巢颗粒细胞并进行鉴定后,经FSH、LH处理后添加不同浓度(1,10,58,100,145nmol/L)的食欲素A分别处理0,24,48,72h后提取蛋白,运用Western blot技术检测绵羊卵巢颗粒细胞分泌孕酮过程中的关键蛋白STAR、3β-HSD和P450(CYP11)的表达量变化情况。结果表明:绵羊卵巢黄体化颗粒细胞添加食欲素A后同一时间STAR、3β-HSD和P450(CYP11)的表达量随食欲素浓度的增加呈逐渐升高然后下降的趋势,且浓度在10nmol/L处表达量达到最高;添加同一浓度的食欲素后,随着作用时间的增加STAR及3β-HSD的表达量呈逐渐升高然后下降的趋势,且时间在24h时表达量达到最高,但P450(CYP11)的浓度随时间的增加而降低。结论:绵羊卵巢颗粒细胞分泌孕酮受食欲素A的浓度及时间变化影响,并进一步证实了食欲素A与孕酮的分泌周期性变化密切相关。     

抑制BMP/Smad信号通路对水牛卵巢颗粒细胞生长和类固醇激素合成的影响

【目的】探究BMP/Smad信号通路对水牛卵巢颗粒细胞生长和类固醇激素合成的影响。【方法】利用脂质体转染的方法将合成的Smad4基因的3对siRNAs(Smad4-siRNA1、Smad4-siRNA2和Smad4-siRNA3)和NC-siRNA(对照组)分别转染水牛颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR检测Smad4基因的表达水平,比较不同siRNA的干扰效率。然后利用筛选的干扰效率最高的siRNA,转染水牛卵巢颗粒细胞,通过CCK-8法检测对照组和干扰组细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR检测上述两组细胞凋亡相关基因Bax和Bcl2,细胞周期相关调控基因CyclinD2和CDK4,以及类固醇激素合成相关基因Cyp19A1和Cyp11A1的表达水平,并通过ELISA检测雌二醇(E₂)和孕酮(P₄)的含量。【结果】基因干扰试验结果表明,3对siRNAs对Smad4基因的表达均具有极显著的干扰作用(P<0.01),其中Smad4-siRNA1的干扰效率最高,达到了64%。CCK-8检测结果显示,与对照组相比,干扰组细胞的增殖效率显著降低(P&l...     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路调控猪肠上皮细胞精氨酸转运的机制

本研究旨在基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨猪肠上皮细胞增殖和精氨酸(Arg)转运的调控机制。在含100或350μmol/L Arg的培养基中添加(10 nmol/L)或不添加(0 nmol/L)雷帕霉素(Rap),培养猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)3 d后,对细胞活力、细胞周期以及Arg转运、增殖和凋亡相关通路基因和蛋白表达进行检测。结果表明:1)添加Rap极显著降低了G2期和S期细胞数量(P0.01),而提高Arg浓度有效缓解了Rap对细胞增殖的抑制作用;Rap通过激活磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)-蛋白激酶(Akt)-B细胞淋巴瘤2(Bcl2)信号通路抑制细胞凋亡。2)添加Rap抑制mTOR信号通路后极显著提高了Arg摄取率(P0.01),极显著提高了100μmol/L Arg培养下细胞中阳离子氨基酸转运载体2(CAT2)的mRNA和蛋白表达量(P0.01);进一步试验证明蛋白激酶Cα(PKCα)-细胞外信号调节激酶(Erk)/cFos-CAT2信号通路可能是Rap促进CAT2表达,进而提高Arg摄取的重要通路。综上可知,Rap应激下猪肠上皮细胞增殖被抑制,提高Arg浓度能有效缓解Rap对细胞增殖的抑制作用;Rap通过调控PKCα-Erk/cFos-CAT2信号通路促进猪肠上皮细胞对Arg的摄取,且提高Arg浓度可促进细胞对Arg的摄取。结果提示,mTOR信号通路在调控猪肠上皮细胞Arg利用过程中发挥重要作用。     

miR-144-5p靶向WNT5a对山羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响

旨在探究miR-144-5p靶向WNT5a对山羊颗粒细胞增殖和凋亡的影响。本研究选用2岁健康雷州母山羊的卵巢颗粒细胞来过表达和抑制表达miR-144-5p及WNT5a,通过荧光定量PCR(real-time qPCR, RT-qPCR)、Western blot、双荧光素酶报告基因、CCK-8等技术来探究miR-144-5p与WNT5a对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。结果表明，miR-144-5p在大卵泡颗粒细胞中的表达量极显著高于小卵泡颗粒细胞(P<0.01),WNT5a在大卵泡颗粒细胞中的表达量极显著低于小卵泡颗粒细胞(P<0.01);CCK-8检测发现，miR-144-5p抑制了GCs增殖，过表达miR-144-5p后，抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白表达极显著下调(P<0.01),促凋亡基因BAX的mRNA和蛋白表达极显著上调(P<0.01);Wnt/β-Catenin通路CTNNB1 mRNA和β-Catenin蛋白水平极显著降低(P<0.01);另外，miR-144-5p能靶向WNT5a抑制其表达。同时，CCK-8检测结果表明，WNT5a可促进...