葡萄不同倍性品种的杂种胚挽救及鉴定

以二倍体葡萄为母本,与四倍体葡萄杂交,杂种进行胚珠培养,获得三倍体植株.胚珠培养胚萌发率最高可达39.21%,成苗率最高可达35.32%.先用细胞倍性测定仪初选,再用卡宝品红染色法根尖计数染色体为57条.不同组合取样时期可确定为:早熟母本为花后40～50 d内,中熟品种为50～60 d,晚熟品种则为60～80 d.     

三倍体葡萄胚挽救技术研究

为了克服葡萄二倍体品种与四倍体品种之间的杂交不亲和性,本试验选择巨玫瑰×兴华一号、4x玫瑰香×2x玫瑰香、4x玫瑰香×红旗特、京亚×87-1、2x玫瑰香×4x玫瑰香、87-1×巨玫瑰、红旗特×巨玫瑰7个杂交组合进行了葡萄二倍体和四倍体品种间杂交后代的胚挽救研究,并对巨玫瑰×兴华一号、2x玫瑰香×4x玫瑰香、87-1×巨玫瑰三个杂交组合后代胚挽救试管苗进行根尖染色体鉴定的研究。结果表明,不同杂交组合胚挽救的最佳取材时期不同,多数组合授粉后45～55d接种效果最好;而2x玫瑰香×4x玫瑰香和87-1×巨玫瑰在花后65d胚珠发育率最高,2x玫瑰香×4x玫瑰香胚珠最高发育率可达到100%。多数杂交组合胚珠的最高萌发率在花后65d,其中2x玫瑰香×4x玫瑰香胚珠的最高萌发率可达到76.67%;巨玫瑰×兴华一号在花后55d,4x玫瑰香×红旗特在花后70d。巨玫瑰×兴华一号杂交组合后代三倍体的比例为60%,87-1×巨玫瑰杂交组合后代三倍体的比例为12%,2x玫瑰香×4x玫瑰香杂交组合后代三倍体的比例为31%。     

‘希姆劳特’与不同倍性玫瑰香型葡萄杂交胚挽救技术研究与倍性鉴定

以葡萄二倍体无核品种‘希姆劳特’为母本,分别与二倍体玫瑰香优系和四倍体‘巨玫瑰’杂交胚珠,及‘希姆劳特’自交胚珠为试材进行胚挽救试验,研究亲本基因型、取样时期、胚发育培养基、培养温度对杂交胚生长发育的影响,并通过染色体计数法对‘希姆劳特’与‘巨玫瑰’杂交幼苗进行倍性鉴定。结果表明:‘希姆劳特’×玫瑰香优系的杂交胚发育率、萌发率(18.18%、13.64%)均显著高于‘希姆劳特’ב巨玫瑰’(13.45%、4.20%)和‘希姆劳特’自交(7.03%、6.25%);‘希姆劳特’×玫瑰香优系、‘希姆劳特’ב巨玫瑰’杂交胚珠及‘希姆劳特’自交胚珠的最佳取样时间均为授粉后54 d;‘希姆劳特’×玫瑰香优系、‘希姆劳特’ב巨玫瑰’杂交胚珠在25℃下培养胚发育率更高,适于‘希姆劳特’×玫瑰香优系、‘希姆劳特’ב巨玫瑰’杂交胚发育的培养基为:Nitsch+1.5 mol/L IAA+0.5 mol/L 6-BA+0.5 mol/L GA3+60 g/L蔗糖+5 g/L琼脂+1g/L活性炭。经根尖染色体倍性鉴定,‘希姆劳特’ב巨玫瑰’获得1株三倍体幼苗,2株二倍体幼苗。     

三倍体葡萄种质创新及倍性快速鉴定

 以二倍体葡萄品种玫瑰香、红地球、摩尔多瓦、无核奥迪亚及四倍体葡萄品种巨峰为亲本进行杂交授粉,对杂种进行胚培养,成株率最高可达30.6%。对杂种后代用流式细胞仪初选,确定30个杂交后代为三倍体植株。组合不同,获得三倍体植株的比例不同,目前获得的225个胚培养的葡萄杂种后代全部栽入大田。     

抗病抗寒无核葡萄胚挽救研究

【目的】为了培育抗病抗寒无核葡萄新品种,【方法】以2个种子败育型无核品种‘波尔莱特’、‘红无籽露’作母本,以抗病抗寒的中国野生山葡萄株系‘黑龙江实生’、‘双优’及欧山杂种‘北醇’、‘00-1-10’(‘玫瑰香’ב黑龙江实生’)分别作父本杂交,授粉51 d后将胚珠分别接种于ER和MM4培养基上进行胚挽救,培养60 d后在WPM+BA 0.2 mg.L-1培养基上诱导成苗。【结果】结果表明,2个母本品种胚挽救的适宜培养基不同,‘波尔莱特’作母本适合于ER培养基,‘红无籽露’作母本适合于MM4培养基。2个母本基因型对胚珠的发育率和成苗率的影响差异不大,‘波尔莱特’略优于‘红无籽露’;但4个父本基因型对胚挽救效果影响较大,以欧山杂种‘00-1-10’和‘北醇’作父本的杂交组合胚株的发育率和成苗率明显高于山葡萄‘黑龙江实生’、‘双优’作父本的杂交组合。共获得无核葡萄胚挽救新种质50个株系。【结论】在胚挽救过程中,不同基因型的无核葡萄适宜于不同的基本培养基,欧山杂种比山葡萄更适宜于作杂交的父本。     

用于无核葡萄选育的胚挽救技术研究

通过4a的连续试验,观察了无核葡萄果粒及胚珠发育变化,对胚挽救的多个影响因素包括品种、接种时间、培养基和培养方式进行了研究。结果表明,红脸无核、底来特、黎明无核作母本的胚珠萌发率较高;各品种适宜的接种时间为无核白花后26d,红脸无核花后35d,爱莫无核×火焰无核花后48d,底来特×红宝石无核花后56d;用Nitsch作基本培养基优于B5;添加BA0.2mg/L获得的胚珠萌发率最高;常温黑暗、固体培养有利于胚珠的发育。已定植结果的无核葡萄杂交胚挽救后代的无核比率平均为58.6%。将胚挽救技术用于无核葡萄育种是十分有效的。     

紫香无核胚培养技术研究

以紫香无核为母本,黎明无核、克瑞森无核、京早晶分别为父本杂交,对杂交胚珠进行培养挽救。结果表明:在授粉后52d接种,3个杂交组合的胚珠均达到最大发育率和最大萌发率;胚珠发育阶段采用ER培养基培养的发育率比用Nitsch培养基的高,但在Nitsch接种的萌发率却比ER的都高;低温(7℃)处理的胚萌发率高于常温(24℃)培养的萌发率。     

柑桔属和枳属间体细胞杂种的花粉在柑桔三倍体育种上的应用

用单胚二倍体品种克里曼丁桔(Citrus Clementina Hort ex Tanaka)作母本,以二倍体特罗维塔甜橙和二倍体枳的四倍体体细胞杂种单系CP-1为父本,进行杂交。去雄授粉7个月后,从15个果子中取得种子286粒.其中三粒发育完全,而其它则发育不     

三倍体葡萄胚挽救影响因子的研究

为培育大粒无核葡萄新品种,以玫瑰香优系葡萄为母本,以‘早甜’‘户太8号’‘醉金香’‘巨玫瑰’分别作父本杂交。结果表明:玫瑰香优系ב早甜’、玫瑰香优系ב户太8号’、玫瑰香优系ב醉金香’3个杂交组合的最佳取样时间为授粉后54 d,且在Nitsch培养基中发育率更高;玫瑰香优系ב巨玫瑰’最佳取样时期在授粉后47 d,ER培养基更适合其杂交胚珠的发育;玫瑰香优系ב户太8号’、玫瑰香优系ב醉金香’、玫瑰香优系ב巨玫瑰’在WPM培养基中的幼胚萌发率更高,玫瑰香优系ב早甜’杂交胚在1/2MS中有较高的萌发率。     

尤力克柠檬与四倍体夏橙杂交幼胚试管培养试验初报

正世界各国十分重视柑橘育种,三倍体无籽育种一直都是各育种专家比较重视的柑橘育种方向之一。利用二倍体与四倍体进行有性杂交仍是目前柑橘获得三倍体育种材料的重要途径,但柑橘二倍体作母本与四倍体材料人工授粉受精后产生的三倍体杂种胚在杂交果实生长发育途中极易败育,与此同时杂种胚的获取亦容易受二倍体母本胚性干扰。利用幼胚试管培养技术~([1~3])可有效克服柑橘二倍体作母本与四倍体杂种胚败育问题,及有助于直接分离单、多胚不同     

杏胚珠培养及幼胚子叶不定芽诱导研究

以盛花后25、35、50、55、60d的凯特杏胚珠为外植体,研究胚珠培养的适宜条件;选择发育一致的幼胚子叶,研究不定芽的发生条件。结果表明,SH培养基是凯特杏胚珠培养的适宜培养基;盛花后25d的凯特杏胚珠(PF=0),仅采用生长培养不足以发育成可见胚,试验采用诱导方式获得了可见胚,诱导出胚率为80%;以MS为基本培养基,BA与NAA结合诱导能力强;但这种胚小且瘦弱,继续生长培养,利用幼胚子叶诱导不定芽。在幼胚子叶诱导不定芽方面,盛花后25、35d取样的凯特杏胚珠,培养后获得幼胚子叶,诱导不定芽的适宜TDZ质量浓度为1.25mg/L,诱导出芽率分别为85.00%、80.00%;盛花后50、55d取样的材料,适宜TDZ质量浓度为2.50mg/L,出芽率分别为65.00%、60.00%,而盛花后60d取样的材料,适宜TDZ质量浓度为5.0mg/L,出芽率为61.11%,不定芽主要发生在子叶的近轴面、胚轴连接处及子叶近轴端两侧;在相同培养基中,25℃进行21d暗培养,盛花后35、50、55、60d材料出芽率分别为72.22%、65.00%、60.00%、55.56%;4℃下28d暗培养,35、50、55、60d依次为59.09%,71.42%、77.78%、86.36%;对不定芽进行伸长、生根与快繁培养,获得了健康正常的植株。通过以上研究,建立了凯特杏幼胚4级培养体系,即(1)胚珠培养,获得可见胚(1级培养);(2)幼胚生长培养(胚培养),获得了健壮幼胚(2级培养);(3)幼胚子叶再生,获得不定芽(3级培养);(4)不定芽组培苗快繁(4级培养)。     

采用胚挽救获得Ogura CMS甘蓝与甘蓝型油菜的种间杂种

为将甘蓝型油菜细胞质雄性不育系(Ogura CMS)的恢复基因转至甘蓝Ogura CMS材料上,以6份甘蓝Ogura CMS材料为母本,以含恢复基因的甘蓝型油菜为父本,人工杂交结合胚挽救培养,研究取材时期、培养基成分和杂交组合对胚珠成苗的影响,同时对胚挽救培养获得的植株是否为真实F1杂种进行鉴定。结果发现,胚珠培养以剥蕾授粉后16d取材时胚珠成苗数最多,成苗率为4.56%;培养基以MS+GA 0.1 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)+0.5%水解酪蛋白(CH)+0.5%活性炭(AC)成苗效果最好,成苗率高达6.24%;M09CMS×RFO-46组合成苗数最多,成苗率为5.96%。67株胚挽救培养得到的植株经流式细胞仪、SSR分子标记和形态学鉴定,得出65株为真杂种,真杂种率高达97%。     

葡萄二倍体和四倍体杂交胚挽救的影响因素

采用L25(55)的正交试验设计,对葡萄二倍体和四倍体杂交胚挽救过程中的影响因素如培养基种类、接种时间、植物生长物质浓度等进行了研究。结果表明:影响胚挽救成苗率最重要的是接种时间,然后依次是IBA浓度、GA3浓度、培养基种类和6-BA浓度。获得了一批胚挽救实生苗,最高出苗率达到73.08%。     

玫瑰杂交花柱半离体培养研究

 以1份野生玫瑰种质为母本,2个玫瑰栽培品种和2个月季品种为父本进行杂交,取杂交后的花柱进行半离体培养,并采用荧光显微技术观察花柱中花粉管的生长状况。结果表明：（1）玫瑰花柱半离体培养的最适培养基为15%蔗糖,0.005%硼酸,0.1%琼脂,pH 7.0。（2）授粉后4 h取花柱培养的效果较好。（3）花柱截取长度对种间杂交组合的花柱半离体培养结果的影响明显,只有截取花柱上部1/3进行培养时能长出少量的花粉管。（4）授粉花粉萌发率大于40%,才能保证授粉的良好效果。（1 山东农业大学林学院,山东泰安 271018;2 山东农业大学园艺科学与工程学院,山东泰安 271018）     

Factors affecting haploid induction through in vitro gynogenesis in summer squash (Cucurbita pepo L.)

Haploid production using in vitro ovule cultures has long been recognized as an important tool to produce haploid and homozygous double-haploid plants for genetic studies and plant breeding programs. In the present study, four experiments were carried out to study the influence of genotype, position of female flowers on plant stem, temperature and sucrose concentration on the in vitro gynogenesis induction of squash. (1) Ovules of 12 genotypes were excised from female flowers, 1 day before anthesis, and cultured onto MS medium containing 3% sucrose and 1 mg l⁻¹ from each of kinetin and 2,4-D (2,4- dichlorophenoxy acetic acid). Differences in response among genotypes were demonstrated. Raad F₁ showed the highest percentage of responding ovules and number of plantlets per dish with 48.8% and 15 plants, respectively. The results revealed that genotype is a key factor influencing the in vitro gynogenesis in squash. (2) Ovules were excised from first, second and third female flower of two hybrids (Giad and Raad) and cultured onto the mentioned above medium. The highest percentage of responding ovules and number of plantlets per dish were obtained from ovules excised from the second female flower on the plant stem. (3) Effect of temperature (4 and 32 °C) for 0, 4, 7 and 12 days on the ovule culture of Queen F₁ was studied. Ovules incubated at 4 or 32 °C for 4 days produced a better embryogenic response. (4) Three sucrose concentrations (30, 60 and 90 g l⁻¹) were tested with the ovule cultures of the local cultivar (Eskandrani). Differences among sucrose concentrations were statistically significant and ovules cultured on the MS medium containing 30 g l⁻¹ produced the best result. MS medium containing 90 g l⁻¹ did not produce gynogenic ovules.     

甘蓝与萝卜属间杂交及其胚挽救技术优化

以甘蓝显性雄性不育系C08-11为母本，以萝卜自交系Q07-12为父本进行属间杂交，对杂交子房和胚珠进行离体培养，筛选适合甘蓝与萝卜属间杂种胚挽救的适宜取材时间、培养基及外源添加物。结果表明，胚珠培养优于子房培养；所有处理子房培养仅获得3株杂交苗，取材时间以授粉后第9天为宜，B5培养基中添加合适的生长调节剂、水解酪蛋白和活性炭为子房培养所必需；胚珠培养各处理共获得29株杂交苗，适宜取材时间为蕾期授粉后第14天、花期授粉后第16天，对生长调节剂的需求取决于不同取材时期及培养基。     

白菜与甘蓝的种间杂交及其杂种后代的研究

利用杂交授粉后子房离体培养的方法克服了白菜与甘蓝的种间不亲和性,并获得二倍体和四倍体的杂种后代。对杂种后代进行形态观察、核型研究、同工酶分析和回交试验。杂种后代的形态性状介于两亲本之间,较偏向父本。二倍体杂种有明显的生长优势,根尖细胞染色体数为19。四倍体杂种生长发育较迟缓,根尖细胞染色体数为38。杂种后代过氧化物酶同工酶表现为“偏母本的互补型”,并在二倍体杂种中出现新的酶带。杂种后代高度不育,用白菜花粉回交二倍体杂种有低度的育性,用甘蓝花粉回交则不育。回交试验与同工酶分析的结果给我们以启示,应是由于杂种细胞质基因作用的结果。     

亲本品种对樱桃远缘杂交亲和性及胚抢救的影响

以3个甜樱桃品种为母本,3个中国樱桃品种为父本进行了种间远缘杂交,并对所得到的杂种成功地进行了胚抢救,探讨了不同亲本品种对大樱桃远缘杂交亲和性及其胚抢救的影响。结果表明,(1)不同杂交组合的坐果率差异显著,在同一母本的杂交组合中,均以五莲红樱桃作父本的杂交组合坐果率最高(≥4.14%);而以红灯为母本与3个父本品种杂交的平均坐果率高于那翁和先锋为母本的相同杂交组合的平均坐果率;(2)不同亲本品种的杂种胚萌发生长率与多丛芽增殖系数存在显著差异,其中在参试的3个父本品种中,以五莲红樱桃表现最好;(3)经过生根培养,已经成功地将一批杂种胚培苗移栽到大田。